СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА "ЭНТОКС" Российский патент 1998 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 C12N1/14 C12R1/645 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и защите растений, а именно к способу получения биопрепарата на основе гидролиза нейтральных липидов энтомофторовых грибов.

Основной недостаток этого способа низкий выход токсической фракции и плохая ее эмульгирующая способность.

Наиболее близким техническим решением является способ получения инсектицида путем выращивания энтомофторовых грибов на подходящей питательной среде с последующим отделением выращенного мицелия, обработкой его защитным средством, высушиванием, измельчением и хранением продукта. (Европейский патент N 013873 A 01 N 63/04). Полученный таким образом препарат представляет собой мицелиальную смесь энтомофторовых грибов и применяется для зашиты растений от насекомых вредителей.

Основным недостатком этого способа получения является наличие в препарате крупнодисперсной фазы, способствующей ухудшению качества обработки растений, увеличению применяемой концентрации и снижению эффективности препарата.

Основная задача, на решение которой направлено изобретение выделение из мицелия чисто инсектицидной фракции с сохранением ее биологической активности, удаление крупнодисперсной фракции из препарата, улучшение качества обработки и снижение применяемой концентрации.

Поставленная цель достигается тем, что получение биологического инсектицида проводят следующим образом: грибы рода Entomophthora выращивают на питательной среде, отделяют биомассу, высушивают при температуре 37^oC и из нее проводят гидролиз спиртовым раствором щелочи KOH при подогреве с последующим выпариванием растворителя.

Способ заключается в том, что на питательной среде выращивают биомассу гриба Entomophthora thaxteriana Petch. которую отделяют от среды и высушивают. Затем гидролизуют 10% щелочью KOH в спирте при соотношении биомассы и спиртовой щелочи 1 8,8 в течение 40 мин при подогреве 70^oC, нейтрализуют гидролизат концентрированной HCl, отфильтровывают и выпаривают растворитель при температуре 60^oC.

Гидролизат в своем составе содержит 2 действующих вещества, обладающих инсектицидной активностью.

Исследования грибов проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках с закрепленным слоем силикагеля "Силуфол" УФ-254. Были найдены оптимальные элюирующие системы для определения токсинов: толуол метанол - хлороформ (7-2-1) и петролейный диэтиловый эфиры (1-1).

Применение KOH для гидролиза улучшает качество препарата энтокс. Энтокс становится более однородным и лучше эмульгируется в воде: отсутствие в препарате больших количеств омыленных кислот и солей калия ведет к снижению фитотоксичности, изменяется химическая структура препарата, так как он становится более удобным для применения.

Пример. Гриб E. thaxteriana выращивали на качалке в течение 3 сут. при 27^oC на среде следующего состава: соевая мука 1% клюкоза 6% вода - остальное.

Биомассу отделяли фильтрованием и высушивали при 37^oC, размалывали. К 10 г высушенной биомассы добавляли 88 мл 10% щелочи KOH в этаноле, подогревали до 70^oC в течение 40 мин, затем нейтрализовали концентрированной HCl до pH 6,8 7,0. Нейтральный гидролизат отфильтровывали и отгоняли этанол в вакууме 0,95 а^-1 при 60^oC. Получали остаток массой 8,98 г (токсиносодержащая фракция), что с 1 г сухой биомассы составляет: 8,98/10 0,898
Параллельно проводили опыт согласно ближайшему аналогу: Гриб E. thaxteriana выращивали на среде следующего состава: соевая мука 1% глюкоза 6% вода остальное. Выращенную биомассу отделяли фильтрованием, высушивали и размалывали. Было получено 9,8 г мицелия.

Таким образом, выход биомассы составил по ближайшему аналогу 9,8 г/л, однако, при использовании предложенного нами способа из полученной биомассы (10 г/л) извлекаются чистые токсические вещества, что увеличивает эффективность препарата, так как происходит полное извлечение токсина и мицелий, оставшийся после гидролиза не токсичен в отношении насекомых.

Инсектицидную активность полученных препаратов определяли экспресс-методом, описанным в "Методике испытаний микоафидина T в лабораторных, полевых и производственных условиях" (составители: Воронина Э.Г. Мукамолова Т.Ю. и др. Ленинград Пушкин, 1988). Метод состоит в следующем в чашку Пери диаметром 40 мм на фильтр, смоченный 0,3 мл раствора препарата, помещали тлей, учет гибели поводили через 1 ч. контакта с обработанной поверхностью, количество повторностей 4 5 чашек, число насекомых в 1 чашке 20 30 особей.

Результаты экспериментов по оценке биологической эффективности препаратов, полученных по схемам предложенным в ближайшем аналоге и по нашему способу показали, что эффективность 1% мицелиального препарата, полученного известным способом, на 74% ниже энтокса в той же концентрации, и на 72% ниже при увеличении концентрации препаратов до 2%
В таблице приведена инсектицидная активность и выход препаративных форм гриба E. thaxteriana.

Таким образом, получение инсектицидов на основе метаболитов энтомофторовых грибов в соответствии с предложенным способом улучшает качество энтокса и на 73% увеличивает его эффективность по сравнению с препаратом, полученным по известному способу. Кроме того, энтокс хорошо эмульгируется в воде, не обладает фитотоксичностью, имеет более однородную форму, не воздействует на энтомофагов и пчел, а также теплокровных (Заключение ВНИИ пчеловодства и ВНИИГИНТОКС).

Использование: сельскохозяйственная микробиология, производство средств защиты растений от вредных насекомых. Сущность изобретения: культивируют микромицеты Entomophthora, отделяют от среды, высушивают. В биомассу вводят 10%-ный раствор спиртовой щелочи КОН при соотношении 1 : 8,8, смесь нагревают и выдерживают в течение 40 - 60 мин, полученный гидролизат нейтрализуют и удаляют из гидролизата твердый остаток и спирт. Полученный жидкий препарат хорошо эмульгируется в воде, не фитотоксичен, не воздействует на энтомофагов и пчел, повышает эффективность на 30 - 40%. 1 табл.

Способ получения инсектицидного препарата путем культивирования гриба Entomophthora thaxteriana на питательной среде с последующим отделением биомассы и высушиванием ее, отличающийся тем, что из высушенной биомассы одновременно экстрагируют и гидролизуют липидную фракцию 10%-ным спиртовым раствором КОН при соотношении биомассы к раствору 1 8,8, температуре 70^oС в течение 40 60 мин, полученный гидролизат нейтрализуют и удаляют из него твердый остаток и спирт.