СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/04 

Изобретение относится к терапевтическим агентам, используемым для лечения ВИЧ-инфекции с синдромом СПИД (приобретенного иммунодефицита).

Известно, что СПИД вызывается вирусом семейства ретро-вирусов, называемой БИЧ (вирус иммунодефицита человека). Заражение ВИЧ, однако, не приводит немедленно к открытым симптомам СПИДа. Единственным указанием на наличие вируса может быть присутствие антител к нему в крови инфицированного субъекта, который затем обозначается как "ВИЧ- положительный". Инфекция может быть латентной, не вызывая очевидных симптомов, и инкубационный период до развития СПИДа может варьировать от нескольких месяцев до десятилетий. Развитию собственно СПИДа может предшествовать появление СПИД-ассоциированного комплекса (ARC), который характеризуется необъяснимой лихорадкой, потерей веса, хроническим кашлем или диарреей.

Пока плохо понятны причины различия периодов между заражением и нарушением иммунной системы у зараженного субъекта. В настоящее время не известные факторы могут вызвать пролиферацию вируса с последующим разрушением иммунной системы. Жертвы этой болезни затем подвергаются различным инфекциям и заболеваниям, которые, несдерживаемые неисправной иммунной системой, ведут к их гибели.

Ассоциация между ВИЧ-инфекцией и туберкулезом хорошо известна. Ранний эффект ВИЧ-заражения состоит в реактивации
прежде неактивных туберкулезных бацилл. Поддержание резистентности к микробактериям является активным иммунологическим процессом, который компрометируется ВИЧ-инфекцией. У лиц, зараженных обеими инфекциями, наблюдается высокий процент реактивации латентных туберкулезных бацилл, и эта реактивация происходит задолго до проявления других ВИЧ/СПИД-ассоциированных инфекций, которые являются веским указанием на то, что важным действием ВИЧ-инфекции является разрушение тех иммунных функций, предположительно, Т-клеточных, которые поддерживают микробактериальные инфекции в латентном состоянии ("спячке").

Имеется также свидетельство того, что когда активный туберкулез накладывается на ВИЧ-инфекцию, происходит резкая потеря С4Т-клеток, которая приводит к очень быстрому развитию явных симптомов СПИДа. Это проявляется в том, что иммунные медиаторы, высвобождаемые при туберкулезе, ускоряют трансактивацию провируса ВИЧ.

Мы уже ранее описали использование антигенного и/или иммуно-регуляторного материала, полученного от Mycobacterium vaccae при лечении туберкулеза (см., например, патент Великобритании N 2 156 673 и патент США N 4 724 144). В нашей международной патентной заявке PCT/GB 90/01169 (публикация N WO 91/01751), мы описали использование того же самого материала для иммунопрофилактического лечения против СПИДа, т. е. для увеличения периода между заражением ВИЧ и развитием СПИДа.

Теперь мы обнаружили, что тот же самый терапевтический агент не только задерживает развитие СПИДа у ВИЧ-инфицированных пациентов, но также способен вызывать регрессию или даже исчезновение явных симптомов СПИДа даже у тех больных, у которых болезнь зашла далеко. Эти эффекты были обнаружены у пациентов, также страдающих от туберкулеза, но ожидается, что они возникают и у больных, страдающих ВИЧ-инфекцией со СПИДом и без ассоциированного туберкулеза.

Соответственно, изобретение обеспечивает использование антигенных и/или иммунорегуляторных материалов, полученных от Mycobacteriul vaccae, для производства медикамента, используемого в терапии СПИДа с ассоциированным туберкулезом или без него. Такой материал может вводиться субъекту, например, субъекту, который является ВИЧ-положительным и проявляет явные симптомы СПИДа, с инфекцией Mycobacterium tuberculosis или без нее количестве от 10⁷ до 10¹⁰ микроорганизмов на дозу, достаточном, по меньшей мере, для приостановления прогрессирования симптомов.

Удобно и потому предпочтительно, если терапевтический агент по изобретению включает убитые клетки M. vaccae, более предпочтительно, клетки убитые автоклавированием. Иммунотерапевтический агент обычно включает более чем 10⁸ микроорганизмов на 1 мл разбавителя, предпочтительно от 10⁸ до 10¹¹ убитых клеток M vaccae на 1 мл разбавителя. Изобретение охватывает в своем объеме антигенный и/или иммунорегуляторный материал от M. vaccae для использования при лечении ВИЧ-инфекции с или без СПИДа, а также с или без ассоциированного туберкулеза.

Разбавитель может быть свободен от пирогенов и представляет собой только физиологический солевой раствор для инъекций или боратный буфер с pH 8,0. Разбавитель должен быть стерилен. Подходящий боратный буфер имеет, например, следующий состав:
NaB₄O₇ 10 H₂O - 3,63 г
H₃BO₃ - 5,25 г
NaCl - 6,19 г
Твин - 0,0005%
Дистиллированная вода - До 1 л
Предпочтительным штаммом M. vaccae является штамм R877R, выделенный из грязевых образцов района Ланго в Центральной Уганде (J. L. Standard and R. C. Paul, Ann. Soc. Belge Med. Trop., 1973, 53, 141-389). Этот штамм является стабильным диким вариантом и принадлежит к подвиду aurum. Он может быть идентифицирован как принадлежащий к M. vaccae по биохимическим и антигенным критериям (R. Bomcke, S. E. Juhask., Zentr albl Bacteriol Parasitenkd Infection skv. Hyd. Akt. 1, 1964, 192, 133).

Этот штамм, обозначенный R877R., депонирован в Национальной Коллекции Типов Культур (NCTC) Центральной Лаборатории Народного Здоровья, Колиндейл Авеню, Лондон, 13 февраля 1984 под депозитарным номером NCTC 11659.

Для приготовления иммунотерапевтического агента, микроорганизм M. vaccae может выращиваться на подходящей твердой среде. Предпочтительная модифицированная жидкая среда Саутона, отвержденная агаром (S. V. Bayden and E. Sorkin J. Immunol., 1955, 75, 15).

Предпочтительно, твердая среда содержит 1,3% агара. Среду, инокулированную микроорганизмами, инкубируют в аэробных условиях для обеспечения роста микроорганизмов, обычно при З2^oC в течение 10 дней. Эти организмы собирают, взвешивают и суспендируют в разбавителе. Этот разбавитель может быть небуферным солевым раствором, но предпочтительно является борат-буферным и содержит поверхностно-активное вещество, такое как Твин 80, как описано выше. Суспензию разводят с получением 100 мг микроорганизмов на 1 мл. Для дальнейшего разведения предпочтительно используют боратный буфер, чтобы суспензия содержала 10 мг влажного веса микроорганизмов на 1 мл разбавителя. Суспензия эта затем может разливаться в 5 мл многодозовые капсулы. Хотя микроорганизмы в капсулах могут быть убиты с использованием радиации, например, от изотопа ⁶⁰Co в дозе 1,5 Мрад, или любыми другими средствами, например, химически, предпочтительно убивать микроорганизмы посредством их автоклавирования, например, при 10 psi в течение 10 мин (115-125^oC). Установлено, что автоклавирование дает более эффективный препарат, чем облучение.

Иммунотерапевтический агент обычно вводится инъекцией в объеме от 0,1 до 0,2 мл, предпочтительно, 0,1 мл, внутрикожно. Разовая доза будет обычно содержать от 10⁷ до 10¹⁰ убитых клеток M. vaccae. Предпочтительно, вводить пациентам разовую дозу, содержащую от 10⁸^ до 10⁹ убитых клеток M. vaccae. Однако, эта доза может повторяться в зависимости от состояния пациента.

Хотя иммунотерапевтический агент будет обычно вводиться внутрикожно инъекцией, также могут использоваться и другие пути введения, например, оральный.

Изобретение охватывает в своем объеме способ лечения ВИЧ-инфекции с или без СПИДа, включая СПИД, ассоциированный с туберкулезом, предусматривающий введение субъекту, страдающему ВИЧ-инфекцией, с или без СПИДа, и с или без ассоциированного туберкулеза, антигенный и/или иммунорегуляторный материал, полученный от M. Mycobacterium vaccae, в количестве от 10⁷ до 10¹⁰ микроорганизмов на дозу, достаточном для вызывания иммунной реакции, эффективной против симптомов СПИДа.

У 20-50% африканских пациентов с ВИЧ-инфекцией, туберкулез является первым симптомом развития СПИДа. Среди группы пациентов, лечившихся от туберкулеза, 17 было сероположительными согласно анализу ELISA Wellcome на HIVI. Всем пациентам были предписаны от туберкулеза стрептомицин, изоциазид, рифампицин и пиразинамид. Лечение было укороченным и не длилось более трех месяцев в каждом случае. Восемь из 17 пациентов получали терапевтический агент по настоящему изобретению и девять получали плацебо (солевой раствор). По прошествии примерно одного года только трое из тех, кто получал противотуберкулезные лекарства, остались живы, у всех троих был развитой туберкулез.

Семь из восьми пациентов, обработанных терапевтическим агентом по настоящему изобретению, стали отрицательными по анализу мазка мокроты на туберкулезные бациллы, а общее улучшение их состояния было подобно такому улучшению у туберкулезников, которые не были ВИЧ- положительными. Пять из восьми пациентов имели во время диагноза обширную лимфоаденопатию. Это было устранено во время последующего лечения. Только два пациента, которые были повторно исследованы серологически, при последующем исследовании оказались отрицательно реагирующими на HIVI.

Может быть выгодным, и это находится в объеме изобретения, использование более, чем одного штамма M. vaccae, и/или включение в терапевтический агент других микробактериальных антигенов. Также может быть включен туберкулин.

Терапевтический агент может также содержать BCG-вакцину (БЦЖ, Bacillus Calmette-Guerin), в частности, высушенную замораживанием форму этой вакцины, для усиления эффекта.

Терапевтический агент может содержать дальнейшие ингредиенты, такие как адъюванты, консерванты, стабилизаторы и т.д. Он может поставляться в виде стерильной жидкости для инъекций или в виде стерильной, высушенной замораживанием формы, которую восстанавливают в растворе перед ее использованием.

M. vaccae может быть использован как таковой или в виде экстракта^ или фракционной части организма для получения терапевтического агента по изобретению.

Пример. 1. M. vaccae выращивают на твердой питательной среде, включающей модифицированную среду Саутона, отвержденную 1,3% агара. Эту среду засевают микроорганизмами инкубируют в течение 10 дней при З2^oC для обеспечения роста микроорганизмов. Эти микроорганизмы затем собирают, взвешивают и суспендируют в разбавителе с получением 100 мг микроорганизмов на 1 мл разбавителя. Эту суспензию затем далее разбавляют буферным солевым раствором с получением суспензии, содержащей 10 мг влажного веса микроорганизмов на 1 мл разбавителя, и суспензируют в 5 мл многодозовые капсулы. Капсулы, содержащие живые микроорганизмы, затем автоклавируют, чтобы убить микроорганизмы и получить терапевтический агент по изобретению, который может быть, если нужно, еще более разведен для использования.

Этот иммунотерапевтический агент может быть введен посредством внутрикожной инъекции вышеописанным способом.

Изобретение относится к медицине, конкретно - к лечению инфекционных болезней, и касается способа лечения ВИЧ-инфекции со СПИДом. Авторами настоящего изобретения установлено, что антигенный и/или иммунорегуляторный материал, полученный из Mycobacterium vaccae в количестве от 10⁷ до 10^1 0 микроорганизмов на дозу, вызывает регрессию или исчезнование явных симптомов СПИДа даже у больных с прогрессирующей формой болезни. 4 з.п.ф-лы.

1. Способ лечения ВИЧ-инфекции со СПИДом, отличающийся тем, что вводят субъекту, который является ВИЧ-положительным и проявляет явные симптомы СПИДа, антигенный и/или иммунорегуляторный материал, полученный из Mycobacterium vaccae, в количестве 10⁷ - 10^1 0 микроорганизмов на дозу, достаточном по крайней мере для приостановления прогрессирования симптомов СПИДа. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что антигенный и/или иммунорегуляторный материал, полученный от M.vaccae, представляет мертвые клетки M.vaccae. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что клетки M.vaccae убиты путем автоклавирования. 4. Способ по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что материал, полученный от M.vaccae, происходит из штамма, депонированного в Национальной коллекции типовых культур в Лондоне 13.02.84 под номером NCTC 11659. 5. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что субъект также проявляет симптомы туберкулеза.