ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПСИХИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ, СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ИХ ОСЛОЖНЕНИЙ Российский патент 1999 года по МПК A61K39/04 A61K35/74 

Настоящее изобретение относится к лечению психических заболеваний, сопровождаемых аутоиммунными реакциями инфекционного происхождения, а также к последствиям хронических инфекций, связанных с аутоиммунитетом (иных, нежели увеит).

В описании к британскому патенту N 2156673 описывается иммунологический препарат, содержащий убитые клетки Mycobacterium vaccae. Показано, что эти агенты полезны в иммунотерапии болезней, вызванных микобактериями, особенно туберкулеза и лепры. Указывалось также, что применение таких иммунотерапевтических агентов облегчает выведение из организма бацилл, ответственных за туберкулез или лепру и которые, как хорошо известно, очень трудно излечиваются с помощью только химиотерапевтических средств.

Предполагается, что иммунотерапевтический агент действует за счет введения общих "защищающих" антигенов, а также благодаря содержанию детерминантов иммунного супрессора, способных к активной регуляции нарушенных иммунных механизмов. В результате иммунная система узнает "стойкие" бациллы по наличию у них общих микобактериальных антигенов и направляет против них эффективные механизмы иммунной защиты, при этом отсутствуют некротические формы ткани, характерные для работы иммунной системы в условиях микобактериальной инфекции.

В описании международной заявки PCT/GB 85/00183 описываются композиции, включающие в качестве активного ингредиента целые организмы M. vaccae, которые могут использоваться для облегчения течения, для лечения и диагностики различных заболеваний, имеющих отношение а артриту. В ней также указывалось, что препараты M. vaccae весьма полезны для лечения многих аутоиммунных болезней и особенно артритных состояний, включая ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, или болезнь Рейтера.

В международной заявке PCT/GB 90/01318 описаны композиции, включающие в качестве активного ингредиента M. vaccae, полезные для лечения и других патологических состояний, в которых у пациентов отмечается аномально высокая доля агалактозил IgG, а также для лечения хронических воспалительных заболеваний, вызванных или сопровождающихся слишком высокой секрецией макрофагами интерлейкина-6 и/или фактора некроза опухолевых клеток.

В частности, в описании рассматривается лечение болезни Крона, реактивного артрита, первичного билиарного цирроза печени, саркоидоза, неспецифического язвенного колита, псориаза, системной красной волчанки (особенно в том случае, когда она сопровождается синдромом Шегрена), множественного склероза, синдрома Гийена-Барра, первичного сахарного диабета и некоторых аспектов отторжения трансплантата.

В международной заявке PCT/GB 90/01169 раскрываются антигенные и иммунорегуляторные продукты, приготовленные на основе M.vaccae, которые могут быть использованы для снижения или предотвращения проявлений синдрома СПИД.

В дополнение в этому, в неопубликованной заявке PCT/GB 91/01970 раскрывается использование M. vaccae в лечении увеита-иммунологически опосредованного позднего проявления лепры, вызывающего слепоту.

Настоящее изобретение основано на выявлении поразительной способности M. vaccae эффективно лечить множество других состояний, в которые вовлечены инфекции, такие, как бактериальные или протозойные и, в частности, микобактериальные инфекции.

Было высказано предположение, что психические заболевания, такие, как шизофрения и маниакально-депрессивный психоз, сопровождаются аутоиммунными реакциями, развивающимися в результате предшествующей или текущей криптогенной инфекции.

Доказательством тому являются наблюдаемые при шизофрении аномалии в функционировании T и B лимфоцитов, связанные со снижением T клеток, увеличением B клеток и изменением уровня супрессорных клеток (см., например, P. Sirota, Israel J., Med. Sci, 1990, 26, 694-697; Knight, Meth and Find ExptlI Clin; Pharmacol. , 1984, 64, 395-403; H.H. Fudenberg et al., Biomedicine & Pharmacotherapy, 1984, 38, 285-290; F. Villemain et al, Annal, N.Y. Acad. Sci. , 1987, 496, 669-675; и Ganguli et al, Annal. N.Y. Acad. Sci., 1987, 496, 675-685).

Доказательством этого предположения является также тот факт, что практически никогда у одного и того же пациента не встречаются одновременно шизофрения и ревматоидный артрит (T.D. Spector, J. Silman, Brit. J. Rhuematology, 1987, 26, 307-310).

Мы полагаем, что шизофрения и ревматоидный артрит могут развиваться как результат генетически определенных взаимно исключающих реакций организма на криптогенную инфекцию и, вероятно, в том числе, на микобактериальную инфекцию. В небольшом по масштабу исследовании мы показали существенное улучшение у трех из трех пациентов, страдающих от шизофрении, в случае их лечения M. vaccae.

В этой связи мы считаем что M. vaccae может быть полезен при лечении психических заболеваний, связанных с аутоиммунной реакцией. Мы обнаружили также, что M. vaccae эффективен в лечение иммунологически опосредованных последствий хронических инфекций. Болезнь Шагаса (Американский Трипаносомоз) представляет собой пример болезни, связанной с протозойной инфекцией, поздним проявлением которой является миокард, который очень часто приводит к смерти пациента. Лечение с помощью M. vaccae может снизить частоту встречаемости миокардита.

Другим примером такой болезни является синдром Такаясу, связанный с туберкулезом, который вызывается микобактериальной инфекцией. Мы полагаем, что для профилактики и лечения этого заболевания и других обструктивных сосудистых состояний, связанных с изменением иммунологических реакций, может использоваться M. vaccae.

Считается также, что M. vaccae может эффективно использоваться для профилактики и лечения имеющих иммунологическую природу осложнений диабета.

В соответствии с этим в настоящем изобретении предлагается метод для лечения психических заболеваний, сопровождающихся аутоиммунными реакциями, для лечения последствий болезни Шагаса, имеющих иммунологическую природу, а также для профилактики или лечения сосудистых заболеваний или иммунологически опосредованных осложнений, например, в случае туберкулеза или сахарного диабета, который включает введение страдающим от таких состояний пациентам эффективных количеств терапевтической композиции, включающей антигенный и иммунорегуляторный материал, полученный из Mycobacterium vaccae.

Кроме того, настоящее изобретение относится к антигенному и иммунорегуляторному материалу, полученному из M. vaccae, который используется для производства терапевтического средства с целью его применения в лечении психических болезней, связанных с аутоиммунными реакциями, которые могли развиться в результате инфекции, для лечения иммунологически опосредованных последствий болезни Шагаса, а также для профилактики, для лечения сосудистых заболеваний или осложнений, имеющих иммунологическую природу, возникающих, в частности, в случае туберкулеза или диабета.

Настоящее изобретение относится, в первую очередь, к лечению бактериальных или протозойных инфекций, например, микобактериальных инфекций.

Антигенный или иммунорегуляторный материал используется преимущественно для лечения психических болезней, сопровождающихся аутоиммунными реакциями, вызванными инфекциями, и, в частности, такой, как микобактериальная инфекция. Такой инфекцией может быть прошлая инфекция в прошлом, которая инициировала аутоиммунную реакцию. Аутоиммунный ответ может быть вызван также и текущей инфекцией, такой, как криптогенная микобактериальная инфекция, т.е. дремлющая, не сразу обнаруживаемая инфекция.

Терапевтическое средство включает предпочтительно мертвые клетки M. vaccae, убитые в предпочтительно автоклавированием или облучением. В обычном случае терапевтическое средство включает более 10⁸ микроорганизмов на мл разбавителя, а преимущество от 10⁸ до 10¹¹ микроорганизмов M. vaccae на мл разбавителя.

Разбавителем может быть физиологический раствор сам по себе, свободный от пирогенов, или боратный буфер, имеющий pH 8,0. Разбавитель должен быть стерильным. Подходящий боратный буфер имеет следующий состав:
Na₂B₄O₇ • 10 H₂O - 3,63 г
H₃BO₃ - 5,25 г
NaCl - 16,19
Твин 80 - 0,0005%
Дистиллированная вода - До 1 л
Предпочтительным штаммом M. vaccae является штамм, обозначенный R877R, который извлечен из грязевых образцов в районе Ланго в Центральной Уганде (J.L. Stanford и R.C. Paul, Ann. Soc. Belge Med, Trop. 1973, 53, 141-389).

Штамм представляет собой стабильный вариант, принадлежащий к подвиду aurum. Его принадлежность к M. vaccae может быть идентифицирована по биохимическим и антигенным критериям. (R. Bonicke, S.E. Juhasz., Zentr albl. Bakteriol. Parasitenkd. Infection akr. Hyg. Abt. I, Orig., 1964, 192, 133).

Штамм R877R был депонирован в соответствии с Будапештской Конвенцией в Национальной Коллекции Типов Культур (NCTC) Центральной Лаборатории Здравоохранения, Колиндал Авеню, Лондон NW9 5HT, Соединенное Королевство 13 февраля 1984 под номером NCTC 11659.

Для приготовления терапевтического средства микроорганизм M. vaccae выращивается на походящей твердой среде. Предпочтительна жидкая среда Саутона (S. V. Boyden и E. Sorkin., J. Immune, 1955, 75, 15), в которую для затвердевания добавлен агар. Как правило, твердые среды содержат 1,3% агара.

В среду инокулируются микроорганизмы, которые далее инкубируются в аэробных условиях, способствующих их росту, в общем случае при 32^oC в течение 28 дней. Далее организмы собираются, взвешиваются и суспендируются в разбавителе. В качестве разбавителя может использоваться незабуференный физиологический раствор, однако предпочтительно применение боратного буфера, содержащего поверхностно активные вещества, такие, как, например, Твин 80, приведенный выше в прописи буферного раствора.

Суспензия разбавляется до содержания 100 мг микроорганизмов/мл. Далее с помощью забуференного боратсодержащего физиологического раствора суспензия разбавляется до конечного содержания микроорганизмов в количестве 10 мг сырого веса/мл в ампулах, содержащих много доз средства.

Микроорганизмы в ампулах могут быть убиты облучением с помощью, например ⁶⁰Кобальта в дозе 2,5 мегарад или другими методами, например, химическими, однако предпочтительно осуществлять этот процесс автоклавированием, например, при давлении в 15 фунтов на кв. дюйм (103,5 КПа) в течение 15 минут (115-125^oC). Показано, что в результате автоклавирования получается более эффективный препарат, чем в случае применения облучения.

Терапевтическое средство вводится в основном в виде инъекции объемом от 0,1 до 0,2 мл, предпочтительно 0,1 мл, внутрикожно.

Единичная доза содержит обычно от 10⁷ до 10¹⁰ убитых микроорганизмов M. vaccae. Предпочтительно вводить пациентам единичную дозу, содержащую от 10⁸ до 10⁹ убитых клеток M. vaccae. В зависимости от состояния больного может вводиться либо единичная доза, либо указанная доза может быть повторена.

Несмотря на то, что терапевтическое средство вводится преимущественно в виде внутрикожных инъекций, могут использоваться и другие способы его введения, например, пероральный.

Возможно использование более, чем одного штамма M. vaccae, настоящее изобретение относится также и к этому аспекту, и/или введение в состав антигенного или иммунорегуляторного материала иных близких видов микобактерий, таких, как M. nonchr omogenicum или M. chitae. В состав средства может быть также включен туберкулин.

Терапевтическое средство может содержать и другие ингредиенты, например, адъюванты, консерванты, стабилизаторы и др. Он может изготавливаться в виде стерильных форм, готовых для инъекций, или в виде стерильных форм, высушенных замораживанием, нуждающихся в специальной подготовке перед применением.

По настоящему изобретению для приготовления лекарственного средства, содержащего M. vaccae, данный микроорганизм может быть использован сам по себе, либо в виде экстракта, либо в виде определенной фракции микроорганизмов. Приведенный ниже пример иллюстрирует настоящее изобретение.

Пример.

M. vaccae NCTC 11659 выращивается на твердой среде, которая представляет собой модифицированную среду Саутона, содержащую 1,3% агар. В среду инокулируются микроорганизмы, которые инкубируются в течение 28 дней при температуре 32^oC для роста и созревания микроорганизмов.

Затем микроорганизмы осторожно соскребаются с поверхности агара, взвешиваются (без высушивания) и суспендируются в M/15 забуференном боратом физиологическом растворе при pH 8,0 с образованием 10 мг микроорганизмов/мл физиологического раствора. Суспензия помещается в 5-мл ампулы и далее автоклавируется в течение 15 минут при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (103,5 КПа) с целью получения убитых клеток микроорганизмов.

После охлаждения полученное таким образом терапевтическое средство хранится, до его применения, при 4^oC. Единичная доза включает 0,1 мл суспензии, содержащей 1 мг сырого веса M. vaccae, непосредственно перед применением содержимое ампулы необходимо хорошо перемешать. В обычном случае доза вводится внутрикожно над левой дельтовидной мышцей.

Изобретение предназначено для лечения психических заболеваний, сопровождающихся аутоиммунными реакциями, инициированными инфекцией, а также последствий хронических инфекций, имеющих иммунологическую природу (иных, нежели увеит). Известное фармацевтическое средство представляет собой антигенный и/или иммунорегуляторный материал , полученный из Mycobacterium vaccae, ранее препарат применяли для иммунотерапии туберкулеза, лепры и ряда аутоиммунных болезней, например, ревматоидного артрита. Технический результат изобретения заключается в способности М. vaccae эффективно лечить множество других заболеваний, вызванных различными инфекциями, а также психических заболеваний, таких, как шизофрения и маниакально-депрессивный психоз. 2 с. и 5 з.п.ф-лы.

1. Применение антигенного и/или иммунорегулирующего материала, полученного из Mycobacterium vaccae для лечения психического заболевания, связанного с аутоиммунной реакцией, вызванной инфекцией. 2. Применение антигенного и/или иммунорегулирующего материала, полученного из Mycobacterium vaccae для профилактики или лечения сосудистых заболеваний или их осложнений, иммунологически опосредованных туберкулезом или диабетом. 3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что антигенный или иммунорегулирующий материал, выделенный из M.vaccae, включает мертвые клетки M. vaccae. 4. Применение по п.3, отличающееся тем, что клетки M. vaccae убивают автоклавированием. 5. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что материал, выделенный из M.vaccae, получают из штамма, депонированного в национальной коллекции типов культур (NCTC) центральной лаборатории здравоохранения Великобритании 13 февраля 1984 г. под номером NCTC 11659. 6. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что материал представлен в форме фармацевтического средства, которое дополнительно содержит фармацевтически приемлемый растворитель. 7. Применение по п.6, отличающееся тем, что фармацевтическое средство содержит 10⁷ - 10¹⁰ микроорганизмов M.vaccae на одну дозу антигенного и/или иммунорегулирующего материала.