СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕАКТИВНОЙ ФОРМЫ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 1998 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, а именно к методам клинических лабораторных исследований.

Известен способ исследования нейтрофилов в мазке крови с помощью люминесцентной цитохимической реакции акридинового оранжевого (Руководство по клинической лабораторной диагностике. Под ред. В. В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1982, с. 43 - 44).

Описанный в качестве прототипа способ сложен, требует значительных затрат времени. Его чувствительность недостаточна для диагностики легких форм заболеваний, например неактивного туберкулеза. Поскольку известный способ основан на получении витальной реакции, он не позволяет получать стабильные результаты, требует проведения исследования сразу же после взятия крови, что затрудняет его использование при массовом обследовании лиц, например при медицинских осмотрах.

Цель изобретения - упрощение, убыстрение способа, повышение его чувствительности, получение стабильных результатов.

Поставленная цель достигается обработкой мазков периферической крови 0,05%-ным спиртовым раствором хлортетрациклина.

Отличие предлагаемого изобретения от известного решения заключается в том, что мазок одновременно фиксируется и флуорохромируется путем его выдерживания в течение 30 с в 0,05%-ном спиртовом растворе хлортетрациклина.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, что привело к достижению нового положительного решения. Впервые в клинических лабораторных исследованиях применяется флуорохромирование мазков крови хлортетрациклином.

Экспериментально установлено, что наилучшие результаты получаются в случае использования 0,05%-ного спиртового раствора хлортетрациклина и времени выдерживания в нем мазков в течение 30 с. С учетом изложенного следует считать заявляемое решение соответствующим критерию "существенные отличия".

Пример 1. Мазок периферической крови взрослого здорового человека погружается на 30 с в 0,05%-ный спиртовый раствор хлортетрациклина, затем слегка подсушивается на воздухе и исследуется в люминесцентном микроскопе. Для возбуждения люминесценции применяется светофильтр ФС-1, в качестве защитного (окулярного, запирающего) - светофильтр из стекла ЖС-18. На окрашенном препарате нейтрофилы выявляются по яркой желто-зеленой люминесценции цитоплазмы. Для оценки интенсивности цитохимической реакции применяется полуколичественный способ: за один балл принимается слабоположительная, два балла - умеренная по интенсивности реакция, три балла - выраженная реакция. Средний показатель высчитывается на основании исследования 100 клеток. В норме этот показатель составляет 1,8±0,07 (см. таблицу).

Пример 2. В флуорохромированном, как описано выше, мазке периферической крови взрослого больного неактивной формой туберкулеза свечение нейтрофилов слабее, чем в норме. Интенсивность цитохимической реакции в этих клетках у больных с неактивной формой туберкулеза в среднем составляет 1,6±0,10 (p<0,05) (см. таблицу).

Обоснование преимуществ предлагаемого способа:
1. Предлагаемый способ позволяет одновременно фиксировать и окрашивать нейтрофилы, в то время как известный способ основан на применении витальной окраски со всеми ее недостатками (нестабильность получаемых результатов, необходимость проведения исследования сразу же после взятия крови и др.).

2. Предлагаемый способ отличается чрезвычайной простотой и быстротой: мазок погружается на 30 с в раствор флуорохрома и готов к исследованию.

3. Благодаря высокой чувствительности люминесцентная реакция хлортетрациклина, в отличие от такой же реакции акридинового оранжевого, может применяться в диагностике легких форм заболевания, например, при неактивном туберкулезе (см. таблицу).

Как видно из приведенной таблицы, интенсивность цитохимической реакции хлортетрациклина у больных с неактивной формой туберкулеза существенно отличается (p<0,05) от таковой у здоровых лиц, в то время как различия интенсивности реакции акридинового оранжевого в двух группах обследованных лиц несущественны.

Использование: в области медицины, в частности в клинике внутренних болезней. Сущность изобретения: мазок периферической крови больного одновременно фиксируют и флуорохромируют в 0,05%-ном спиртовом растворе хлортетрациклина в течение 30 с, после чего определяют в люминесцентном микроскопе интенсивность свечения нейтрофилов и при ее снижении на 10% и более относительно нормы диагностируют неактивную форму туберкулеза. Способ позволяет повысить точность диагностики. 1 табл.

Способ диагностики неактивной формы туберкулеза путем цитохимического исследования нейтрофилов в мазке периферической крови, отличающийся тем, что мазок одновременно фиксируют и флуорохромируют в 0,05%-ном спиртовом растворе хлортетрациклина в течение 30 с, затем определяют в люминесцентном микроскопе интенсивность свечения нейтрофилов и при ее снижении на 10% и более относительно нормы диагностируют неактивную форму туберкулеза.