СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА К МИКРОБАМ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/569 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения индивидуальной величины неспецифической защиты организма к микробам, для контроля и прогнозирования эффективности лечения средствами, повышающими уровень устойчивости организма к микробам.

В настоящее время в медицине для оценки иммунного статуса применяются, в основном, способы, основанные на исследовании или количества, или активности факторов иммунитета, циркулирующих в крови. Однако абсолютное большинство этих способов отличается трудоемкостью, недостаточной точностью. При этом необходимо соблюдение стерильных условий, имеется возможность инфицирования СПИДом и другими инфекциями, требуются дорогостоящие реактивы, сложная аппаратура. В связи с этим внимание иммунологов привлекают те способы, которые позволяют оценить величину неспецифической защиты организма по активности и количеству факторов слюны, участвующих в иммунитете. В частности, с этой целью применяются способы исследования активности лизоцима слюны (Бухарин О.В. , Васильев Н.В., 1974), β -лизинов (Gelhard 1982). Однако они также отличаются трудоемкостью, а для их проведения требуются дорогостоящие реактивы.

Прототипом предлагаемого способа является способ определения в слюне и сыворотке крови иммуноглобулина A, M, G, для чего чаще всего используют способ радиарной иммунодиффузии по Манчини (Шляхов Э.Н., Андриеш Л.П. Иммунология, - Справочное пособие, - Кишинев, Штиинца, 1985, с. 107). Однако этот способ имеет ряд недостатков. К ним относятся: высокая трудоемкость, недостаточная точность способа, необходимость использования при исследовании дорогостоящих сывороток к иммуноглобулинам, дефицитных агаров, специальных пластинок, камер и т.д.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение при высокой точности, экономичность и безопасность определения неспецифической защиты организма к микробам, особенно при массовых обследованиях.

Решение задачи достигается путем определения титра антител в слюне в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) к дизентерийной группе микробов и при величине титра антител ниже 16 определяют низкую степень защиты.

Новизна способа заключается в том, что неспецифическую защиту организма к микробам определяют по титрам антител в слюне с использованием РПГА к дизентерийной группе микробов.

Способ осуществляют следующим образом: у обследуемого забирают слюну в пробирку в количестве 0,6 - 1,5 мл, дозатором переносят ее в объеме 0,5 мл в лунку первого ряда планшета для постановки РПГА. Добавляют в первую и последующие лунки по 0,5 мл физиологического раствора и раститровывают дозатором путем последовательного двукратного разведения в объеме 0,5 мл. В каждую лунку приливают по 0,2 мл 1%-ной взвеси эритроцитов антигенного диагностикума к шигеллам Зонне, Ньюкестла или Флекснера. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при t 10 - 20^o в течение 18 - 24 ч, затем оценивают результаты. Титром антител слюны считают максимальное ее разведение, в котором гемагглютинация оценивается не менее, чем в три креста, и при титре антител ниже 16 определяют низкую степень защиты, выше 16 - среднюю и высокую.

Результаты исследований о возможности использования предлагаемого способа для определения индивидуальной и групповой величины устойчивости организма к микробам, контроля и прогнозирования эффективности лечения, отбора лиц для лечения средствами, повышающими устойчивость организма к микробам, изложена в нижеописанных примерах.

Пример 1. Исследование величины неспецифической защиты организма к микробам у лиц, страдающих острыми респираторными заболеваниями.

Проведены исследования слюны у 44 рабочих и служащих Пермского завода "Минераловатных изделий". Одновременно путем опроса (анкетирования) устанавливали частоту острых респираторных заболеваний за последний год. По количеству перенесенных заболеваний всех обследованных делили на четыре группы: в первую группу отнесли лиц, перенесших острые респираторные заболевания не более одного раза в год; во вторую - 1 - 2 раза в год; в третью - 2 - 4 раза в год; в четвертую - 4 - 12 раз в год. Большие вариации частоты заболеваний связаны с результатами анкетирования.

Величину неспецифической защиты организма к микробам оценивали по пяти группам: у первой группы, как очень низкую при титрах антител 2 и ниже; у второй - низкую 4 - 16; у третьей - среднюю 16 - 64; у четвертой - высокую 64 - 256; у пятой - очень высокую 256 - 512 и выше. Такое деление по группам сохранено и в других примерах.

Результаты исследований представлены в табл. 1.

У редко болеющих лиц (I группа) средний титр антител составляет 60, а наименьший - у обследованных III и IV групп, которые болели от 2 до 12 раз в год, и равен соответственно 8 и 4, т.е. ниже 16. Статистическая обработка результатов исследований свидетельствует о высокой корреляции между средними величинами титров антител в слюне у обследованных лиц и частотой их заболеваний (r = 1,00 ± 0,008; P < 0,001).

Результаты этих исследований подтверждают возможность использования предлагаемого способа для оценки индивидуальной и групповой величины иммунного статуса, выявления лиц с низким уровнем неспецифической защиты организма от микробов для последующего лечения средствами, повышающими активность факторов иммунитета.

Пример 2. Определение величины неспецифической защиты организма к микробам у лиц, страдающих хроническими заболеваниями.

Исследования проведены со слюной 39 лиц в возрасте от 26 до 59 лет, из них 15 человек страдают хроническими заболеваниями: бронхитом, ринитом, тонзилитом, фурункулезом. Известно, что в патогенезе этих заболеваний ведущую роль играет снижение уровня активности факторов иммунитета. Контрольная группа обследованных работает на Пермском заводе "Минераловатных изделий" в одинаковых условиях с лицами, страдающими хроническими заболеваниями.

Результаты исследований представлены в табл. 2.

Как видно из таблицы, величина среднего титра антител у 39 обследованных равна 34, индивидуальные величины колеблются от 1 до 256. У лиц с хроническими заболеваниями средний титр антител равен 8, следовательно, степень защиты низкая, у лиц контрольной группы - 94 (1 - 256). Таким образом, средняя величина титра антител у лиц с хроническими заболеваниями в сравнении с контрольной групповой ниже последней в 11,7 раза.

Результаты, представленные в примере 2, также подтверждают возможность использования предлагаемого способа для оценки индивидуальной и групповой величины устойчивости организма к микробам как здоровых, так и больных, также для отбора лиц при лечении средствами, повышающими устойчивость организма к микробам.

Пример 3. Исследование связи между величиной титра антител слюны и количеством гуморальных факторов иммунитета крови.

Для установления связи между величиной титра антител в слюне, количеством и активностью факторов иммунитета крови проведено дне серии исследований. В первой серии излучали связь между титрами антител в слюне и концентрацией иммуноглобулинов в сыворотке крови, которые определяли по Манчини. Исследования слюны и сыворотки крови проведены одновременно у 34 детей и подростков в возрасте от 5 до 15 лет, страдающих аллергическими заболеваниями: бронхиальной астмой, бронхитом с астмоидным компонентом, аллергодерматозом и хронической пневмонией.

Результаты исследований представлены в табл. 3.

Как видно из таблицы, средний титр антител в слюне равен 1 - 125, индивидуальные колебания его - от 2 до 1024, концентрация иммуноглобулина M составляет 2,14 г/л (0,90 - 3,40 г/л), иммуноглобулина G - 13,6 г/л (7,6 - 22,0 г/л), иммуноглобулина A - 1,10 г/л (0,39 - 2,60 г/л). Несмотря на существенные колебания концентрации гуморальных факторов в слюне и сыворотке крови наблюдается прямая корреляционная связь между средними величинами титров антител пяти групп обследованных и концентрацией иммуноглобулинов класса M в сыворотке крови (r = +0,70 ± 0,26, P < 0,05). Однако прослеживается и обратная корреляция между титрами антител в слюне и концентрацией иммуноглобулина G и A (r соответственно = -0,70 ± 0,26; P < 0,05; -0,80 ± 0,16; P < 0,01).

Результаты этих исследований свидетельствует о том, что предлагаемый способ отражает как уровень местного иммунитета в ротовой полости, так и величину неспецифической гуморальной защиты организма к микробам в целом.

Пример 4. Исследование связи между величиной титра антител в слюне и количеством Т-лимфоцитов крови.

Одновременно проводили исследования слюны и крови у 36 детей в возрасте от 5 до 15 лет, страдающих различными видами аллергических заболеваний: бронхиальной астмой, хроническим бронхитом с астмоидным компонентом и др. В слюне определяли титр антител к шигеллам Зонне, в крови - количество Т-лимфоцитов в реакции розеткообразования.

Результаты исследования представлены в табл. 4.

Как видно из таблицы, средний титр антител в слюне равен 119, индивидуальные величины колеблются от 2 до 1024, количество Т-лимфоцитов равняется 63% (42 - 82%), Т-хелперов - 49 (16 - 77), Т-супрессоров - 14% (2 - 21%). В то же время несмотря на значительные вариации индивидуальных величин факторов иммунитета, наблюдается прямая корреляция между средними величинами титров антител пяти групп обследованных и общим количеством Т-лимфоцитов и Т-хелперов (r = +0,87 ± 0,13; P < 0,01) и +0,90 ± 10,0; P < 0,01). Однако отмечается склонность к обратной корреляции между величинами титров антител в слюне и количеством Т-супрессоров (r = -0,61 ± 0,32; P > 0,05). Особенно ярко обратная зависимость выявляется у лиц I и V групп, титры антител которых составляют 2 и 640, а Т-супрессоров - 18% и 12%.

Выявленные результаты исследований свидетельствуют о высокой информативности предлагаемого способа, позволяющего оценить величину как гуморального, так и клеточного иммунитета.

Использование РПГА для определения величины титра антител к дизентерийной группе микробов в слюне основано на результатах исследований, в которых нами установлены высокая прямая корреляционная связь между титрами антител к шигеллам Зонне, Ньюкестла и Флекснера. У лиц с низкой исходной величиной титра антител к шигеллам Зонне отмечается высокий аналогичный показатель в слюне к шигеллам Ньюкестла и Флекснера и, наоборот, у обследованных с высоким титром антител к шигеллам Зонне определяется высокая концентрация антител в слюне к другим видам микробов.

Приведенные выше данные свидетельствуют о значительных преимуществах предлагаемого способа в сравнении с прототипом, которые заключаются прежде всего в том, что предлагаемый способ отличается простотой исполнения, высокой точностью, экономичностью и безопасностью для обследуемых лиц. В серийных исследованиях для определения титра антител в РПГА требуется не более 5 - 7 мин. Высокая точность исследования: процент ошибки в различных сериях опытов составляет 1 - 3%; стопроцентная воспроизводимость способа связана с тем, что титр антител в слюне определяется в РПГА с использованием коммерческих антигенных эритроцитарных диагностикумов. Экономичность способа основана на том, что не требуется стерильная посуда и инструменты для взятия крови, а также дорогостоящие дефицитные препараты, сыворотки к иммуноглобулинам, агары и стерильные условия для постановки опытов. В связи с этим способ можно использовать для исследования уровня устойчивости организма к микробам по месту работы или учебы обследуемых.

Дополнительным преимуществом предлагаемого способа является его безопасность для обследуемых лиц, что является очень важным в связи с широким распространением различных инфекций среди населения, в том числе СПИДа.

С учетом вышеизложенного, предлагаемый способ можно рекомендовать для широкого использования при исследовании индивидуальной и групповой величин неспецифической защиты организма к микробам, определения иммунодефицитных состояний, контроля и прогнозирования эффективности лечебно-оздоровительных мероприятий, отбора пациентов для лечения средствами, повышающими устойчивость организма к микробам, а также в других областях медицины.

Способ предназначен для определения неспецифической защиты организма к микробам путем исследования слюны. В пробе слюны определяют титр антител к дизентирийной группе микробов в реакции пассивной гемагглютинации. При титре антител ниже 1: 16 определяют низкую степень защиты. Способ прост, точен, экономичен и безопасен 4 табл.

Способ определения неспецифической защиты организма к микробам путем исследования слюны, отличающийся тем, что оценку неспецифической защиты организма к микробам проводят по титрам антител слюны к дизентерийной группе микробов в реакции пассивной гемагглютинации и при титре антител ниже 16 определяют низкую степень защиты.