СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ОСТРОЙ ЛУЧЕВОЙ БОЛЕЗНИ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1998 года по МПК A61K35/16 A61K35/26 A61K35/28 A61K35/407 

Изобретение относится к радиобиологии и ветеринарной биотехнологии, в частности к способу профилактики острой лучевой болезни животных, и может быть использовано при разработке комплекса противолучевых мероприятий в животноводстве применительно к условиям массового облучения ионизирующим излучением (аварии на АЭС и т.п.).

В литературных источниках имеются данные о применении биологически активных веществ из тканей животного происхождения, обладающих противолучевыми свойствами.

Очищенный экстракт из селезенки телят с мол. массой 50 - 75 кД, введенный подкожно летально облученным мышам и хомячкам, способствует восстановлению гемопоэза и увеличению выживаемости животных (Олонцева О.Н. Очищенный селезеночный экстракт - средство лечения лучевой болезни в эксперименте. //Лучевые повреждения организма и пути их коррекции /НИИ биологии и биофизики при Томском государственном университете, Томск, 1991, 28 - 31).

Иммунокоррегирующий препарат из костного мозга при введении подкожно облученным гамма-лучами в дозах 6 и 6,5 Гр мышам увеличивал их выживаемость, что обусловлено способностью препарата ускорять процессы дифференцировки предшественников кроветворных и иммунокомпетентых клеток в костном мозге (Влияние иммунокоррегирующего препарата миелопида на отдельные показатели кроветворения и иммунной системы при экспериментальной острой лучевой болезни (Степаненко Р.Н., Баджинян С.А., Мороз Б.Б. и др.// Иммунология, 1993, N 3, с. 25 - 28).

Установлен противолучевой эффект вилозена и тимогена (оба препарата из тимуса животных) при различных схемах их введения (Барабой В.А., Ялкут С.И., Зорин В.В. Низкомолекулярные факторы тимуса, как средства профилактики и ранней патогенетической терапии лучевых поражений // Радиобиологический съезд, Киев, 25 сент., 1993: Тезисы докладов, т. 2, Пущино, 1993, с. 80 - 81). Двукратное введение вилозена внутрибрюшинно через 2 и 24 ч после облучения увеличивало выживаемость мышей от 22 до 85%, ускоряя восстановление количества лейкоцитов в периферической крови.

Известны низкомолекулярные вещества, массой 10 кД (спленопептиды), выделенные из селезенки свиней, убитых через 3 - 5 суток после облучения в дозах 3,0-5,0 Гр (Корытный В.С. Патофизиологическое обоснование некоторых путей целенаправленного поиска фармакологических средств противорадиационной защиты: Автореф. дис. д-ра биол. наук. Обнинск, 1989). Спленопептиды, выделенные из селезенки облученных свиней, при подкожном введении мышам за 1 - 3 суток до облучения приводили к достоверному повышению выживаемости животных по сравнению с контролем облучения, что связано с благоприятным влиянием на восстановление гемопоэза.

Известны способы применения и других противолучевых биологически активных средств, представляющих собой различные пептиды и относящихся к классу активных регуляторов гемопоэза.

Однако ограниченность применения биопрепаратов этого класса в узком временном периоде по отношению к времени облучения существенно снижает возможности проведения противолучевых мероприятий.

Предлагаемый способ использования тканевого препарата устраняет эти недостатки.

Задача изобретения - способ профилактики острой лучевой болезни животных тканевым противолучевым препаратом.

Сущность предлагаемого способа заключается во введении животным подкожно в дозе 1,0 мг/кг дважды за 30 и 14 сут до острого радиационного воздействия тканевого препарата с концентрацией 10 мг/мл белка, полученного при осветлении гомогената тканей печени, селезенки, лимфатических узлов и сыворотки свиней, овец и других животных, убитых через 3 - 7 сут после облучения их в дозе, вызывающей острую лучевую болезнь тяжелой степени.

Для получения тканевого препарата используют животных (свиней, овец и др. ). Общее равномерное гамма-облучение животных производят на гамма-установках лучами Cs-137, однократно в дозах LD 50-100/30 (0,9 - 1,8 • 10^-3 Кл/кг) при мощности дозы излучения 0,9 - 1,4 Р/мин (3,8 - 6,0 • 10^-6 Кл/(кгс) и равномерности поля облучения ±10%. Равномерность облучения обеспечивают путем перемещения платформы с животными с постоянной скоростью между источниками.

После облучения на 3 - 5 сут у животных отбирают кровь для получения сыворотки и после убоя извлекают печень, селезенку и лимфатические узлы. Последующие этапы работы по приготовлению комплекса лучевых антигенов проводят с соблюдением условий стерильности.

Отмывают навлеченные органы от крови физиологическим раствором. Ткань отобранных органов ножницами разрезают на небольшие кусочки, затем измельчают с помощью электрического измельчителя и гомогенизируют с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:3 в гомогенизаторе. Гомогенат центрифугируют в рефрежираторной центрифуге при 15000 оборотов в течение 30 мин. К полученному супернатанту органов добавляют сыворотку и определяют в смеси содержание белка. Физиологическим раствором доводят до конечной концентрации 10 мг/мл, разливают во флаконы по 5 - 10 мл и замораживают при -40^oC. Для более длительного хранения материал подвергают лиофильному высушиванию: замораживают материал при -50^oC в течение 3 ч, выдерживают при температуре от -50^oC до 0^oC в течение 50 ч. Затем доводят температуру до 20±1^oC в течение 3 ч и досушивают 3 ч. Хранят при 8 - 10^oC.

Высушенные препараты имеют вид пористой сухой массы желтовато-серого цвета.

Стерильность определяется на всех этапах производства биологического препарата путем посева на МПБ, МПА и среду Сабуро.

Специфичность и активность препаратов проверяют в кольцепреципитации, РДП и ИЭОФ с использованием сывороток, полученных от свиней, гипеиммунизированных тканевым противолучевым препаратом. В качестве контроля используют аналогичные препараты, полученные из тканей интактных животных.

Препарат имеет титр 1:512 в реакции кольцепреципитации, а при определении специфичности в РДП 1:8 с перекрестной раститровкой с двукратным разведением антигенов и гипериммунной сыворотки, полученной от иммунизированных свиней 1:8.

Стимулирующая активность препарата, оцениваемая в реакции селезеночного колониеобразования, составляет не менее 1,8 (P<0,05).

Препарат нетоксичен: при введении 0,1 мл мышам и 0,5 мл крысам не наблюдается отклонений от физиологической нормы в течение 10 сут.

Препарат обладает выраженным защитным противолучевым действием: выживаемость облученных животных составляет 100% при гибели 60 - 67% только облученных животных.

Пример 1. Опыты проведены на 38 беспородных крысах массой 180 - 200 г. Крысы были разделены на 4 группы (табл. 1):
1-я группа - препарат вводили дважды - за 30 и 14 сут до облучения - подкожно по 5 мг на крысу;
2-я группа - препарат вводили за 7 сут до облучения однократно подкожно по 5 мг на крысу;
3-я группа - служила контролем облучения;
4-я группа - биологический контроль (не подвергалась облучению).

Облучение проводили гамма-лучами цезия-137 в дозе 700 Р с мощностью дозы 1,41 Р/мин.

Наблюдение за животными осуществляли в течение 60 сут.

После введения препарата крысам не наблюдали отклонений в общем состоянии, гибели животных не отмечено в течение месяца. Применение препарата за 30 сут с повторным введением через 2 недели позволило защитить 100%, за 7 сут - 75%, при гибели 60% крыс в группе контроля облучения.

Пример 2. Опыты проведены на 26 белых беспородных мышах массой 18 - 20 г, разделенных на 3 группы (табл. 2):
1-я группа - препарат вводили дважды (за 30 сут до облучения с последующим введением через 14 сут) по 1 мг на мышь подкожно;
2-я группа - служила контролем облучения;
3-я группа - биологический контроль (облучению не подвергалась).

Облучение животных проводили гамма-лучами цезия-137 с мощностью дозы 1,4 Р/мин в дозе 700 Р.

Наблюдение за животными осуществляли в течение 60 сут.

При введении препарата мышам в течение месяца не наблюдали отклонений в общем состоянии, гибели животных. Изучаемый препарат позволил защитить до 100% мышей при гибели 66,6% животных в группе контроля облучения.

Пример 3. Опыты проведены на 6 свиньях породы крупная белая массой 20 - 25 кг, разделенных на 2 группы (табл. 3):
1-я группа - препарат вводили дважды - за 30 и 14 сут до облучения - подкожно по 1 мг/кг;
2-я группа - служила контролем облучения.

Облучение животных проводили гамма-лучами цезия-137 с мощностью дозы 1,21 P/мин в дозе 400 Р.

Наблюдение за животными осуществляли в течение 75 сут.

После введения препарата отклонений в общем состоянии свиней не отмечено. Препарат позволил сохранить всех взятых в опыт животных, при гибели 2 свиней из 3 в контрольной группе.

Препарат оказывал благоприятное влияние на течение лучевой болезни клинические признаки были менее выражены, в меньшей степени по сравнению с животными контрольной группы, отмечено снижение количества лейкоцитов, лимфоцитов и их популяций.

Изобретение может быть использовано для профилактики острой лучевой болезни животных.

Способ относится к радиобиологии и ветеринарной биотехнологии и предназначен для профилактики острой лучевой болезни животных. Сущность способа: во введении животным подкожно в дозе 1,0 мг/кг дважды за 30 и 14 суток до острого радиационного воздействия тканевого препарата с концентрацией 10 мг/мл белка, полученного при осветлении гомогената тканей печени, селезенки, лимфатических узлов и сыворотки крови свиней, овец и других животных, убитых через 3 - 7 суток после облучения их дозой радиации, вызывающей острую лучевую болезнь тяжелой степени. 3 табл.

Способ профилактики острой лучевой болезни животных, включающий введение препарата, полученного от облученных животных, отличающийся тем, что, с целью профилактики острой лучевой болезни, используют тканевый противолучевой препарат, состоящий из осветленного гомогената смеси тканей органов печени, селезенки, лимфатических узлов и сыворотки крови облученных животных, с концентрацией белка 10 мг/мл, который вводят подкожно в дозе 1,0 мг/кг двукратно за 30 и 14 сут. до радиационного воздействия.