СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОЙ ЛУЧЕВОЙ БОЛЕЗНИ Российский патент 2010 года по МПК A61K36/00 A61N5/00 

Изобретение относится к радиобиологии, в частности к лечению острой лучевой болезни животных, и может быть использовано при разработке комплекса противолучевых мероприятий применительно к условиям массового облучения (аварии на АЭС и т.п.) в дозах, вызывающих проявления костномозгового синдрома.

Известно применение для профилактики и лечения острой лучевой болезни биологически активных веществ природного происхождения.

Витаминный препарат АММИВИТ (комплекс витаминов группы «В»), обладающий радиопротектерными своийствами, при введении с кормом мышам линии Balb/C в объемах 0,15-0,60 мг/кг массы после облучения в дозе 5 Гр способствует увеличению их выживаемости на 15-25%. При облучении дозой 7 Гр введение АММИВИТА отдаляет сроки гибели мышей на 1-2 суток [1].

Содержание мышей линии СВА на рационе, обогащенном бета-каротином (1 мг/день/мышь) оказывает умеренное влияние на их радиорезистентность. Выживаемость мышей, находящихся на лечебно-профилактическом или лечебном рационе, при облучении в дозе 9,5 Гр увеличивается с 30 до 75 и 65%. При облучении в дозе 9,7 Гр увеличение выживаемости с 25 до 65% отмечено при лечебном применении бета-каротина. При облучении в дозе 9,9 Гр добавление к рациону бета-каротина не оказало эффекта на выживаемость облученных животных. При обогащении витаминного рациона мышам после введения изотопа ²³⁹Pu бета-каротином через 6 и 9 месяцев происходит увеличение содержания колониеобразующих элементов в костном мозге, а также антителообразующих клеток в селезенке - через 6 месяцев [2].

Противолучевая эффективность бадана толстолистного и водного препарата экстракта хвои пихты сибирской при их использовании крысам до и после облучения в дозе 7,5 Гр составляет 34% и 37% соответственно при абсолютной летальности в контроле [3].

Применение белым крысам в течение 15 суток до и 30 суток после облучения дозами 7, 8, 9 Гр водных настоев из плодов барбариса амурского, корейского и обыкновенного, плодов боярышника обыкновенного, корня солодки уральской, сока черноплодной рябины, настойки корня женьшеня, а также чайного напитка «Карагод» из расчета 25 мг/кг массы тела увеличивает продолжительность жизни облученных животных до 30% [4].

Известны способы применения и других противолучевых природных веществ, однако необходимость их использования до и после облучения животных, трудоемкость изготовления конечного продукта существенно снижают возможности проведения противолучевых мероприятий.

Наиболее близким к предлагаемому является способ лечения острой лучевой болезни с помощью экдистерона. Препарат относится к классу полидигидроксилированных стероидных соединений, содержащихся в растениях. Экдистерон получают из растения Rhaponticum carthamoides (левзеи сафлоровидной), он является основным по массовой доле действующим веществом, составляя свыше 95% долевого участия от суммы фитоэкдистероидов. Способ получения экдистена и аналогов на основе химически чистых экдистероидов включает: измельчение сырья (корней и корневищ), экстракцию, упаривание экстракта, разбавление водой, фильтрование, реэкстракция гидрофобных сопутствующих веществ углеводородным растворителем, осаждение балластных соединений, экстракция фитоэкдистероидов из водного слоя с упариванием, хроматографическая очистка на колонке с оксидом алюминия, упаривание элюата, селективное элюирование экдистероидов с сорбента растворителем и концентрирование полученных фракций, перекристаллизация и вакуумная сушка после растворения продукта в метаноле с последующим упариванием [5].

При облучении белых беспородных мышей - самцов дозой 4,5 Гр и пероральном введении эксдистерона (разовая доза 0,5 мг/100 г массы животного) в течение 10 дней после облучения выживаемость мышей повышается на 15% (30% в контрольной группе, получавшей вместо препарата воду, 45% в опытной) [6].

Недостатки данного способа - сложность в получении используемого в данном способе препарата, необходимость его применения в течение 10 дней, низкий процент выживаемости животных при облучении в дозе 4,5 Гр.

Целью изобретения является разработка более эффективного способа лечения острой лучевой болезни животных при использовании растительного сырья.

Поставленная цель достигается тем, что готовят экстракт из высушенных соцветий кипрея узколистного (Chamaenerion angustifolium) и вводят облученным дозами 8-10 Гр животным перорально вместо питьевой воды в первые 4-8 суток в эффективном количестве.

Растение Chamaenerion angustifolium в своем составе содержит дубильные вещества (10-20%), алкалоиды неизученного строения (до 0,1%), флавоноиды (кверцетин и кемпферол), слизь (до 15%), витамин С и др. В цветах идентифицированы флавоноиды, таннины, фитогемагглютенины, микроэлементы (железа, меди, марганца), стимулирующие кроветворение. Улучшает процесс кроветворения и повышает защитные функции организма. Препарат из растения Chamaenerion angustifolium обладает антиоксидантной активностью, которая составляет относительно кверцитина 1,58 мг/мл, что является возможным механизмом активации «критических» систем клеток стволового типа [7, 8].

Листья и цветы Chamaenerion angustifolium собирают во время цветения (июнь-август) и высушивают в затемненном месте. Приготовление препарата осуществляется на каждый прием путем экстракции 2 г высушенных соцветий 100 мл кипятка в течение 20 мин и последующего доведения до комнатной температуры.

Препарат нетоксичен: после перорального введения препарата, полученного из растения Chamaenerion angustifolium в течение 10 суток, у мышей отклонений от физиологической нормы не наблюдалось.

Пример 1.

Изучение лечебных свойств растительного препарата проведены на 85 белых беспородных мышах массой 20-22 г, разделенных на 10 групп по принципу аналогов, по 5-10 голов в каждой. Экстракт растительного препарата выпаивают животным в течение 4, 6 и 8 суток. Внешнее общее γ-облучение животных осуществляют на установке ГУС-4000, заряженной ¹³⁷Cs, дозами от 8 до 12 Гр, при мощности дозы излучения 1,8 Гр/ч и равномерности поля облучения животных ±10%. Наблюдение за животными осуществляют в течение 30 суток.

Применение препарата из Chamaenerion angustifolium в течение 4 сут повышает процент выживаемости облученных мышей в дозе 8 Гр по отношению к контролю на 40%, в течение 8 сут - на 60%. После облучения в дозе 10 Гр выживаемость леченных в течение 4 сут мышей увеличивается на 20%, а леченных 8 сут - на 30% по сравнению с контролем облучения (табл.1).

Таким образом, препарат обладает выраженным противолучевым лечебным действием: выживаемость облученных дозой 8 Гр и леченных растительным препаратом животных составляет 100% при гибели 60% только облученных животных.

Пример 2. Радиозащитную эффективность полученного препарата оценивали также по показателям ЛД_50/30 по методу Кербера и фактору уменьшения дозы.

Показатель ЛД_50/30 облученных мышей составляет 9,2 Гр, облученных и леченных 4 суток - 9,8 Гр (ФУД - 1,10), облученных и леченных 8 суток - 10,2 Гр (ФУД - 1,11).

ЛД_50/30 облученных крыс составляет 7,2 Гр, а при введении препарата в течение 4 суток 9,6 Гр (ФУД - 1,30).

Таким образом, фактор уменьшения дозы имеет диапазон от 1,10 до 1,30, что свидетельствует о радиозащитном свойстве растительного препарата.

Пример 3. Изучение гемопоэзстимулирующих свойств препарата из Chamaenerion angustifolium проведено на 70 белых беспородных мышах массой 20-22 г, разделенных на 7 групп, по 10 голов в каждой.

После облучения животных дозой 10 Гр замену питьевой воды экстрактом растительного препарата производили в течение 4, 6 и 8 суток. Исследования по изучению общего числа лейкоцитов, клеточности костного мозга и селезенки осуществляли на следующий день после окончания поения - на 5-, 7- и 9-е сутки.

После γ-облучения наблюдали резко выраженную убыль клеток в радиочувствительных органах (табл.2). На 5-е сут исследования показатели лейкоцитов, клеточности костного мозга и селезенки у леченых мышей были по отношению к нелеченым находятся на достоверно более высоком уровне, и темп восстановления показателей заметно выше.

Таким образом, растительный препарат оказывает благоприятное влияние на кроветворение в облученном организме, стимулирует восстановление и пролиферацию клеток кроветворных органов.

Пример 4. Для изучения устойчивости мышей, выживших после облучения в дозах 8,0 и 9,0 Гр, к физической нагрузке использовали плавание животных с грузом в 5% от массы тела. Оценивали продолжительность их выдерживания нагрузки (табл.3).

Из материалов табл.3 видно, что облучение в дозах 8,0 и 9,0 Гр приводило к снижению продолжительности плавания выживших мышей. После введения экстракта Ch.angustifolium в течение 4 и 8 суток выносливость облученных и леченых животных по сравнению с нелеченными от облучения повышалась, с достоверностью различий между 4-й и 2-й группой (р<0,05).

Технико-экономические преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что препарат из Ch.angustifolium при наличии сходной противолучевой эффективности со многими лечебными природными препаратами отличается тем, что используемый в данном способе растительный препарат является безвредным, для его приготовления используется возобновляемое сырье, метод применения препарата групповой пероральный.

Источники информации

1. Золотарева Н.Н., Романенко Е.В., Соколов В.Е. Действие комплекса витаминов группы «В» (АММИВИТ) на выживаемость облученных мышей линии Balb/C // Тез. докл. Третьего съезда по радиационным исследованиям, М., 14-17 октября 1997 г., стр.180-181.

2. Лемберг В.К., Кириллова Е.Н., Рогачева В.А. и др. Профилактическое противоопухолевое и радиозащитное действие бета-каротина // Проблемы нормирования ионизирующих излучений в условиях воздействия модифицирующих факторов / Сб. науч. трудов под ред. акад. АМН Л.А.Булдакова и д.м.н. B.C.Калистратовой, М., 1991, стр.127-130.

3. Костеша Н.Я., Лицкевич Л.А., Гулик Е.С. и др. Противолучевые свойства некоторых растений Сибирского региона // IV съезд по радиационным исследованиям (Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), Тезисы докладов, Москва, 20-24 ноября 2001 г., с.445.

4. Лобанок Л.М., Русяев Р.А., Чаховский А.А. Радиомодифицирующие свойства биологически активных соединений некоторых представителей семейств аралиевых, барбарисовых, бобовых, розоцветных // Проблемы противолучевой защиты, Москва, 16-17 ноября 1998, с.96.

5. Левзея сафлоровидная и ее действующие вещества - экдистероиды. [Электронный ресурс] Режим доступа: http://content.mail.ru/arch/22318/1651498.html.

6. Гулик Е.С. Противолучевое действие экдистерона. IV съезд по радиационным исследованиям (Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность), Тезисы докладов, Москва, 20-24 ноября 2001 г., с.445.

7. Кьосев П.А. Полный справочник лекарственных растений. - М.: ЭКСМО-Пресс, 2001. - 992 с.

8. Пахомов В.П., Яшин Я.И., Яшин А.Я. и др. Способ определения суммарной антиоксидантной активности биологически активных соединений. Решение о выдаче патента на изобретение № 2003123072/15(024964). Дата подачи заявки 25.07.2003 г.

Таблица 1 Выживаемость мышей при воздействии различными дозами γ-облучения и лечении Ch.angustifolium Группа Условия опыта Количество животных Всего Погибло 1 5,0 Гр контроль 5 0 2 5,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 5 0 3 5,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 5 0 4 8,0 Гр контроль 5 3 5 8,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 5 1 6 8,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 5 0 7 9,0 Гр контроль 10 7 8 9,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 10 5 9 9,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 10 4 10 10,0 Гр контроль 10 9 11 10,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 10 7 12 10,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 10 9

Таблица 2 Показатели общего числа лейкоцитов венозной крови и клеточности костного мозга и селезенки при γ-облучении и лечении мышей препаратом из растения Ch.angustifolium Срок исследований, сут Группа Лейкоциты, 10⁹/л Клеточность органов Костный мозг, на весь орган, кл·10⁷ Селезенка, на весь орган, кл·10⁸ Исход Интактные 7,20±0,40 1,70±0,10 2,60±1,20 5 Контрольная 0,25±0,03 0,06±0,01 0,18±0,02 Подопытная 1,23±0,21* 0,30±0,03* 0,56±0,05* 7 Контрольная 0,37±0,09 0,18±0,01 0,08±0,01 Подопытная 1,84±0,15* 0,34±0,04* 0,59±0,03* 9 Контрольная 0,25±0,01 0,14±0,01 0,06±0,01 Подопытная 2,1±0,04* 0,44±0,02* 0,68±0,01* *Р≤0,05 по сравнению с контрольными группами.

Таблица 3 Влияние экстракта Ch.angustifolium на выносливость мышей при физической нагрузке через 30 суток после облучения Группа Количество животных Условия опыта Продолжительность плавания, сек % к контролю % к интактным 1 5 Интактные 280±31 n=5 - 100 2 4 8,0 Гр 205±37 n=4 100 73 3 4 8,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 341±118 n=4 166 122 4 5 8,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 413±40* n=4 201 148 5 3 9,0 Гр 179±92 n=3 100 64 6 9 9,0 Гр + Ch.angustifolium 4 сут 267±13 n=5 149 95 7 6 9,0 Гр + Ch.angustifolium 8 сут 249±44 n=6 139 89

Изобретение относится к радиобиологии. Способ заключается в том, что облученным дозами 8-10 Гр животным перорально вводят водный экстракт из высушенных соцветий Chamaenerion angustifolium вместо питьевой воды в первые 4-8 суток в эффективном количестве. Способ стимулирует увеличение числа клеток костного мозга, селезенки и суммарного числа лейкоцитов в венозной крови. 3 табл.

Способ лечения острой лучевой болезни, заключающийся в пероральном введении животным водного экстракта, отличающийся тем, что водный экстракт готовят из высушенных соцветий Chamaenerion angustifolium и вводят облученным дозами 8-10 Гр животным вместо питьевой воды в первые 4-8 сут в эффективном количестве.