РАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЖИВЫХ БАКТЕРИЙНЫХ ВАКЦИН Российский патент 1998 года по МПК A61K39/00 C12N1/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин против листериоза животных, сальмонеллезов, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др.

Сухие бактерийные вакцины содержат взвесь живых микроорганизмов, высушенных в защитной среде. Перед использованием вакцину необходимо растворить, причем процесс растворения (регидратации) оказывает на бактерии повреждающее действие и делает необходимым применение эффективного растворителя (разбавителя) для сохранения исходной активности разведенной вакцины в течение всего периода вакцинации.

При анализе патентной документации и научно-технической литературы не обнаружено достаточно эффективного разбавителя для живых бактерийных вакцин.

Известен растворитель для живых бактерийных вакцин, принятый за прототип. К числу недостатков данного растворителя, обнаруженных в процессе применения при вакцинации, относятся следующие: реактогенность, связанная с высоким содержанием пептона (2 - 5%) и отрицательным воздействием трилона Б на жизнеспособность бактерий, сложность и дороговизна изготовления.

Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава и упрощение технологии его изготовления.

Поставленная цель достигается за счет того, что в качестве стабилизирующего вещества растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор (КФБ) при следующем соотношении компонентов, мас.%: пептон 0,25 - 1,00; КФБ - остальное до 100.

Для изготовления растворителя навеску пептона (ГОСТ 13805-76) из расчета его концентрации 0,25 - 1,00% растворяют в КФБ (0,925 г KH₂PO₄ и 5,4 г K₂HPO₄ на 1 л дистиллированной воды) и устанавливают величину pH 7,2 - 7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм (120^oC), стерильный растворитель расфасовывают по 100, 200 или 500 см³ в стерильные флаконы, закрывают стерильными резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.

Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, создающий изотоническую среду, обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемость микробных тел (листерий, сальмонелл, бактерий рожи, пастерелл, бруцелл и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение всего времени вакцинации животных.

Входящие в состав разбавителя компоненты - пептон и фосфаты калия - физиологически индифферентные вещества, хорошо растворимые в воде, стерилизуются автоклавированием, не оказывают токсического действия на людей и животных, не обладают антигенностью.

Влияние концентрации пептона в растворителе на жизнеспособность бактерий в вакцине поясняется следующими примерами.

Пример 1. Растворитель с минимальным количеством пептона 0,25% в КФБ.

Сухую вакцину растворяют в данном растворителе и выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18^oC, после чего делают высевы на мясо-пептонный агар для определения количества жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и употребляемый для этих целей физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 1, показывают, что жизнеспособность бактерий при содержании 0,25% пептона в растворителе выше, чем при использовании прототипа и физиологического раствора.

Пример 2. Растворитель с оптимальным количеством пептона 0,5% в КФБ.

Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18^oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 2, показали, что содержание в растворителе 0,5% пептона значительно повышает жизнеспособность бактерий по сравнению с прототипом и физиологическим раствором.

Пример 3. Растворитель с максимальным количеством пептона 1,0% в КФБ.

Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18^oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 3, показывают, что при содержании в растворителе 1,0% пептона жизнеспособность бактерий выше, чем в прототипе и физиологическом растворе.

Пример 4. Растворитель с количеством пептона ниже минимального 0,1% в КФБ.

Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18^oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения использовали известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 4, показывают, что при содержании в растворителе 0,1% пептона жизнеспособность бактерий падает и приравнивается к жизнеспособности в физиологическом растворе.

Пример 5. Растворитель с количеством пептона выше максимального 1,5% в КФБ.

Сухую вакцину растворяют в данном растворителе, выдерживают в течение 0,5 ч при температуре 18^oC, после чего определяют количество жизнеспособных клеток. Для сравнения используют известный растворитель и физиологический раствор. Результаты исследований, приведенные в табл. 5, показывают, что при содержании в растворителе 1,5% пептона жизнеспособность бактерий становится ниже, чем в прототипе и физиологическом растворе.

Предлагаемый растворитель технологичнее, дешевле, более стандартен по сравнению с существующим, не требует использования ценного пищевого сырья при изготовлении и не вызывает реактогенных реакций у животных, а самое главное, повышает жизнеспособность бактерий.

Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против листериоза животных, сальмоноллеза, рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота и др.) перед применением. Входящий в состав растворителя пептон, взятый в оптимальных концентрациях, и буферный компонент, содержащий изотоническую среду, обеспечивают близкую к стопроцентной выживаемость микроорганизмов как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии. Для изготовления растворителя навеску пептона концентрацией 0, 25-1,00% растворяют в калий-фосфатном буферном растворе рН 7,2-7,5 и стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. 5 табл.

Растворитель для живых бактерийных вакцин, содержащий стабилизатор и буферный компонент, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора растворитель содержит пептон, а в качестве буферного компонента - калий-фосфатный буферный раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пептон - 0,25 - 1,00
Калий-фосфатный буферный раствор - Остальное до 100