РАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЖИВЫХ БАКТЕРИЙНЫХ ВАКЦИН Советский патент 1994 года по МПК A61K39/00 C12N1/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарной практике для растворения сухих бактерийных вакцин, например, против рожи свиней, пастереллеза птиц и бруцеллеза крупного рогатого скота.

Целью изобретения является повышение стабилизирующей эффективности растворителя, стандартизация его состава, упрощение технологии его изготовления и замена ценного пищевого сырья на непищевое.

П р и м е р 1. Для изготовления растворителя пептон и трилон Б растворяют в калийфосфатном буферном растворе (0,925 г КН₂РО₄ и 5,4 г К₂НРО на 1 л дистиллированной воды) и определяют величину рН, которая должна быть в пределах 7,2-7,5. Приготовленный растворитель стерилизуют автоклавированием, расфасовывают во флаконы, закрывают резиновыми пробками, откатывают металлическими колпачками и этикетируют.

Пептон и буферный компонент создают изотоническую среду и обеспечивают близкую к 100%-ной выживаемости микробных тел (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.) как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение времени, необходимого для вакцинации (1-3 ч).

Введение в состав растворителя трилона Б предотвращает образование осадка фосфорнокислых солей при изготовлении и хранении растворителя за счет образования водорастворимых комплексов трилона Б - катионы металлов, образующих нерастворимые соли фосфатов, увеличивает буферную емкость растворителя.

П р и м е р 2. Для оценки эффективности действия растворителя приведены результаты исследования сохраняемости живых микробных тел в вакцине против рожи свиней (штамм ВР-2), разведенной растворителем на калийфосфатном буфере с концентрацией пептона и трилона Б соответственно 1, 2, 3, 4, 5 и 6% и 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6% и выдержанной 45 мин при 20±2^оС (см. табл.1).

Из табл.1 видно, что при возрастании содержания в составе растворителя пептона в пределах 1-3% и трилона Б в пределах 0,1-0,3% возрастает концентрация живых бактерий рожи в разведенной вакцине и при концентрации пептона выше 3%, трилона Б выше 0,3% остается практически постоянной, поэтому концентрация пептона 3% и трилона Б 0,3% является оптимальной.

П р и м е р 3. Исследована сохраняемость количества живых микробных тел в вакцинах против рожи свиней и пастереллеза птиц, растворенных в растворителе, содержащем 3% пептона, 0,3% трилона Б и КФБ. Разведенные вакцины выдерживают при 20±2^оС в течение 0,5-1; 1,5; 2 ч. Определяют через каждые 0,5 ч количество живых микробных тел. Предлагаемый растворитель сравнивают с физиологическим раствором NaCl (ФР) и растворителем, содержащим МПБ.

Результаты исследований (см. табл.2 и 3) показывают, что МПБ и растворитель на основе пептона обеспечивают практически одинаковую сохраняемость живых микробных тел в растворенной вакцине против пастереллеза птиц в интервале 0,5-2 ч и в вакцине против рожи свиней в интервале 0-4 ч, что существенно превышает сохраняемость живых микробных тел в вакцинах, разведенных физиологическим раствором.

Наряду с практически одинаковой выживаемостью микробных клеток в растворителях на основе МПБ и пептона с трилоном Б последний растворитель имеет ряд преимуществ: технологичнее, дешевле, более стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья.

П р и м е р 4. Для подтверждения возможности использования предлагаемого растворителя для других сухих бактерийных вакцин исследована его эффективность для живой сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота (штамм 82 и 19). Вакцину растворяют в физиологическом растворе и в предлагаемом растворителе.

Результаты исследований (см. табл.4) свидетельствуют об эффективности предлагаемого растворителя для сухой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота и возможности его применения для целого ряда сухих бактерийных вакцин.

П р и м е р 5. Для подтверждения стандартности состава предлагаемого растворителя исследованы 3 серии растворителя, изготовленные с трилоном Б и без него, на содержание общего и аминного азота, величину сухого остатка и буферной емкости. Результаты исследований (см. табл.5) показывают стандартность состава растворителя, что обеспечивается введением в состав растворителя трилона Б.

П р и м е р 6. Безвредность растворителя для животных испытывают на цыплятах суточного и 15-суточного возраста и белых мышах массой 18-20 г. Цыплятам растворитель вводят внутримышечно и интраназально (в дозе 0,5 и 0,2 см³ соответственно), белым мышам - по 0,5 см³ растворителя подкожно в область спины. Контролем служит физиологический раствор. В течение 10-суточного наблюдения цыплята и мыши остаются клинически здоровыми, и на месте введения растворителя не наблюдается местной реакции, абсцессов и некрозов, что свидетельствует о безвредности предлагаемого растворителя.

Таким образом, растворитель для сухих живых бактерийных вакцин обеспечивает хорошую выживаемость микробных клеток, является стандартным, более дешевым и безвредным.

Изобретение относится к биологической промышленности и может быть использовано в ветеринарной практике. Растворитель предназначен для растворения сухих живых бактерийных вакцин (против рожи свиней, пастереллеза птиц, бруцеллеза крупного рогатого скота) перед их применением. Цель изобретения - повышение жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления. Растворитель позволяет отказаться от используемого в практике физиологического раствора - хлористого натрия -, не обеспечивающего сохраняемости необходимого для успешной вакцинации количества живых микробных тел, а также позволяет заменить мясо-пептонный бульон на пептон, трилон Б и буферный компонент. Для изготовления растворителя навески пептона в концентрации 2 - 5% и трилона в концентрации 0,2 - 0,5% растворяют в калийфосфорном буферном растворе с pH 7,2 - 7,5. Стерилизуют автоклавированием в течение 30 мин под давлением 1 атм. Новый растворитель обеспечивает близкую к 100%-ной выживаемость микроорганизмов (пастерелл, бруцелл, бактерий рожи и др.), как при растворении сухих вакцин, так и в регидратированном состоянии в течение 3 ч. Растворитель технологичен, стандартен и не требует использования при его изготовлении ценного пищевого сырья. 5 табл.

РАСТВОРИТЕЛЬ ДЛЯ ЖИВЫХ БАКТЕРИЙНЫХ ВАКЦИН, содержащий стабилизатор на основе пептона и фосфатный буферный раствор, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности микроорганизмов, стандартизации состава растворителя, упрощения технологии его изготовления, стабилизатор дополнительно содержит трилон Б при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пептон 2 - 5
Трилон Б 0,2 - 0,5
Фосфатный буферный раствор Остальное