СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1999 года по МПК A61K39/112 A61K39/02 C12N1/00 C12N1/20 C12N1/00 C12R1/42 

Описание патента на изобретение RU2129016C1

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных.

Известен способ получения сухой живой вакцины против сальмонеллеза свиней (патент РФ N 1577116 A 61 K 39/112, С 12 N 1/20, 14.09.98).

Существующий способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных обладает рядом недостатков: процесс культивирования довольно продолжителен (12-14 ч), не позволяет использовать современное оборудование и приборы, защитная среда для лиофильного высушивания не обеспечивает стабильности вакцины при длительном хранении, что сказывается на качестве препарата, а также на эффективности производства.

При анализе патентной документации и научно-технической литературы нами не обнаружено достаточно эффективного способа изготовления живых сухих вакцин против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, приближающегося к современному уровню производства биопрепаратов.

Целью заявляемого изобретения является сокращение времени выращивания культуры, снижение себестоимости препарата, а также повышение качества, стабильности в процессе хранения и стандартности биологических свойств вакцины.

Поставленная цель достигается за счет того, что периодическое глубинное культивирование сальмонелл проводят в питательной среде в течение 6-8 ч в соответствии с разработанным алгоритмом управления процессом, концентрируют полученную культуру, бактериальную массу ресуспендируют в разработанной защитной среде и высушивают.

Способ осуществляется следующим образом.

В стерильный ферментер загружают жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Питательную среду в ферментере засевают культурой сальмонелл (Salmonella choleralsuis или Salmonella dublin), выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и выращивают при температуре (37±1)oC в течение 6-8 часов.

После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до (-110) - (-130) мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и при минимальной скорости вращения мешалки, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15-25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости регулируют 10%-ным раствором NaOH, поддерживают на уровне 7,6 - 7,8 ед. pH, дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05 - 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при постоянных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Полученную культуру концентрируют, разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калий-фосфатном буферном растворе, фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Пример 1. Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров.

Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)o в течение 6 часов. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -110 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости на уровне 7,6 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 составляет 22.6 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 8,0
Желатин - 0,4
Тиомочевина - 0,4
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,4
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 15,0 млрд, после сушки - 7,3 млрд, через 12 мес. хранения - 2,9 млрд.

Пример 2. Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров.

Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 7 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -120 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 20% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,7 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,1% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 40,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 10,0
Желатин - 0,5
Тиомочевина - 05
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,5
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,17
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 30,0 млрд, после сушки - 28,0 млрд, через 12 мес. хранения - 24,0 млрд.

Пример 3. Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров.

Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 8 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -130 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,8 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 25,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 12,0
Желатин - 0,6
Тиомочевина - 0,6
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,6
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,2
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 20,0 млрд, после сушки - 14,0 млрд через 12 мес. хранения - 8,0 млрд.

Пример 4. Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных.

Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при (37±1)oC в течение 5 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до - 100 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 10% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,5 ед. pH с помощью подачи 10%-ного раствора NaOH, а подачу глюкозы не осуществляют. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 1,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 6,0
Желатин - 0,3
Тиомочевина - 0,3
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,3
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,11
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 2,0 млрд, после сушки - 0,9 млрд, через 12 мес. хранения - 0,03 млрд.

Пример 5. Способ изготовления вакцины со значениями параметров выше максимальных.

Для культивирования сальмонелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера.

Среду засевают культурой сальмонелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при температуре (37±1)oC в течение 9 ч. После засева ферментера окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -140 мВ путем выдержки культуры без подачи воздуха на аэрацию и выключенной мешалке, после чего до конца процесса культивирования с помощью изменений расхода воздуха и скорости вращения мешалки поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 30% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,9 ед. pH с помощью 10%-ного раствора NaOH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,20% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, характеризующемся резким повышением pO2 при неизменных расходе воздуха и оборотах мешалки и прекращением снижения pH культуральной жидкости. Накопление биомассы в 1 см3 среды составляет 10,0 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной средой на калийфосфатном буферном растворе, приготовленной по следующей прописи, мас.%:
Сахароза - 14,0
Желатин - 0,7
Тиомочевина - 0,7
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,7
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,23
Вода дистиллированная - До 100,0
Разведенную культуру фасуют во флаконы и лиофильно высушивают.

Количество живых клеток в вакцине до сушки в 1 см3 составляет 5,0 млрд, после сушки - 1,8 млрд, через 12 мес. Хранения - 0,2 млрд.

Технологические параметры изготовления сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, указанные в примерах, приведены в табл.

Преимущества заявленного способа перед известным:
1. Применение интенсифицированного способа культивирования позволяет повысить накопление жизнеспособных бактерий при сокращении времени выращивания с 12- 14 до 6-8 часов.

2. Вакцина, полученная этим способом, более стабильна по биологическим свойствам, в том числе и по иммуногенности.

Похожие патенты RU2129016C1

название год авторы номер документа
ВАКЦИНА ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ 2021
  • Школьников Ефим Эмануилович
  • Анисимова Любовь Викторовна
  • Павленко Игорь Викторович
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Коротеева Людмила Александровна
  • Матвеева Ирина Николаевна
RU2764118C1
ВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ГИДРООКИСЬАЛЮМИНИЕВАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ ПНЕВМОНИИ И САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ 2003
  • Сидоров М.А.
  • Раевский А.А.
  • Самуйленко А.Я.
  • Субботин В.В.
  • Анисимова Л.В.
  • Кудрявцев В.В.
  • Бушуева Н.Б.
  • Скородумов Д.И.
  • Шегидевич Э.А.
  • Малик Е.В.
  • Коротеева Л.А.
RU2246316C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ 1995
  • Белоусов В.И.
  • Малахов Ю.А.
  • Ситьков В.И.
  • Соболева Г.Л.
  • Усольцев В.М.
RU2088258C1
ВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ГИДРООКИСЬАЛЮМИНИЕВАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННЫХ ПНЕВМОНИЙ СВИНЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ И СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ 2000
  • Раевский А.А.
  • Сидоров М.А.
  • Ярцев М.Я.
  • Самуйленко А.Я.
  • Анисимова Л.В.
  • Бушуева Н.Б.
  • Скородумов Д.И.
  • Субботин В.В.
  • Коротеева Л.А.
RU2191598C2
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ 1997
  • Ярцев М.Я.(Ru)
  • Доценко Виктор Васильевич
RU2124366C1
АССОЦИИРОВАННАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА, КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА, САЛЬМОНЕЛЛЕЗА И ЛЕПТОСПИРОЗА МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА 1994
  • Белоусов В.И.
  • Караваев Ю.Д.
  • Малахов Ю.А.
  • Лучко М.А.
  • Иренков И.П.
  • Елисеев А.К.
  • Усольцев В.М.
  • Соболева Г.Л.
RU2086259C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИМБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ Escherichia coli VL-613 2010
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Эрнст Лев Константинович
  • Школьников Ефим Эмануилович
  • Раевский Александр Андреевич
  • Эрнст Константин Львович
  • Анисимова Любовь Викторовна
  • Коротеева Людмила Александровна
  • Павленко Игорь Викторович
  • Чеботарев Иван Изотович
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Бондарева Наталья Анатольевна
RU2450051C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ АЭРОМОНОЗА РЫБ 2010
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Школьников Ефим Эмануилович
  • Раевский Александр Андреевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Анисимова Любовь Викторовна
  • Коротеева Людмила Александровна
  • Коломнина Галина Федоровна
  • Юхименко Людмила Николаевна
  • Климов Антон Викторович
  • Еремец Владимир Иванович
  • Беро Иван Леонтьевич
RU2431664C1
Способ получения нативного симбиотического препарата 2017
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Школьников Ефим Эмануилович
  • Павленко Игорь Викторович
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Нежута Александр Александрович
  • Анисимова Любовь Викторовна
  • Коротеева Людмила Александровна
  • Гаврилов Владимир Андреевич
  • Серба Елена Михайловна
RU2662949C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ 1997
  • Раевский А.А.
  • Ярцев М.Я.
  • Анисимова Л.В.
RU2129015C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 129 016 C1

Реферат патента 1999 года СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в промышленном производстве сухой живой вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных. Для этого глубинное культивирование проводят в течение 6-8 ч при (37±1)oС со снижением окислительно-восстановительного потенциала среды после засева, поддержанием парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода и дозированной подачей глюкозы при лимитировании роста сальмонелл глюкозой. Полученную культуру концентрируют, разводят сахарозо-желатиновой с тиомочевиной защитной средой на калийфосфатном буферном растворе, фасуют во флаконы и лиофильно высушивают. Использование данного режима культивирования сальмонелл и защитной среды позволяет удешевить вакцину и повысить накопление жизнеспособных бактерий, качество, стабильность и стандартность биологических свойств вакцины. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 129 016 C1

Способ изготовления вакцины против сальмонеллеза сельскохозяйственных животных, включающий засев вакцинного штамма сальмонелл, культивирование в жидкой питательной среде на основе перевара Хоттингера с дробной подачей глюкозы с последующим концентрированием и лиофилизацией полученной бактериальной суспензии в защитной среде, содержащей сахарозу и желатин, отличающийся тем, что культивирование проводят в течение 6 - 8 ч, причем после засева окислительно-восстановительный потенциал снижают до (-110) - (-130) мВ, после чего до окончания процесса культивирования поддерживают парциальное давление растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 15 - 25% от насыщения кислородом воздуха, pH культуральной жидкости поддерживают на уровне 7,6 - 7,8 ед. pH, а дробную подачу глюкозы осуществляют дозами до концентрации 0,05 - 0,15% при лимитировании роста сальмонелл глюкозой, лиофильное высушивание ведут в защитной среде, дополнительно содержащей тиомочевину, калий фосфорнокислый однозамещенный и калий фосфорнокислый двузамещенный, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Сахароза - 8,0 - 12,0
Желатин - 0,40 - 0,60
Тиомочевина - 0,40 - 0,60
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,40 - 0,60
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,14 - 0,20
Вода дистиллированная - До 100,0

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1999 года RU2129016C1

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ СУХОЙ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАРАТИФА СВИНЕЙ 0
SU172961A1
ВАКЦИНА ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ, СПОСОБ ЕЕ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ 1988
  • Шустер Б.Ю.
  • Малахов Ю.А.
  • Колесников А.Я.
  • Гараев И.М.
  • Седов В.А.
  • Самохвалов А.П.
  • Панов В.С.
  • Кириллова В.В.
RU1577116C
Способ получения живой брюшнотифозной вакцины 1971
  • Лиходед Владимир Гаврилович
  • Шустер Борис Юльевич
  • Сергеев Василий Васильевич
SU549470A1
PCT 8909063 A1, 05.10.89.

RU 2 129 016 C1

Авторы

Ярцев М.Я.

Раевский А.А.

Анисимова Л.В.

Павленко И.В.

Александрова М.Л.

Даты

1999-04-20Публикация

1996-10-01Подача