4-[(БЕНЗО-2,1,3-ТИАДИАЗОЛИЛ-4)АМИНО]-5,6,7,8-ТЕТРАГИДРОБЕНЗОТИЕНО [2,3-D]ПИРИМИДИН, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОГЕЛЬМИНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРИ ЛАРВАЛЬНОМ АЛЬВЕОЛЯРНОМ ЭХИНОКОККОЗЕ Российский патент 1998 года по МПК C07D495/06 C07D417/12 A61K31/41 

Изобретение относится к органической химии, касается нового гетероциклического соединения 4-[(бензо-2,1,3-имадиазолил-4)амино]- 5,6,7,8,-тетрагидробензотиено[2,3-d]пиримидина формулы 1
,
обладающего улучшенной противогельминтной активностью, и может быть использовано в медицине для лечения ларвальных альвеолярного и гидатидозного эхинококкозов.

Задача изобретения - изыскание нового соединения гетероциклического ряда, обладающего повышенной противогельминтной активностью при экспериментальном ларвальном альвеолярном эхонококкозе (хлопковые крысы) и низкой токсичностью.

Прототипом по строению к заявляемому соединению являются производные 1,2,3-тиадиазол [4,5-h] изохинолина, у которых, однако, противогельминтная активность не отмечена [1].

Пример 1. Получение 4-[бензо-2,1,3-тиадиазолил-4)-амино]-5,6,7,8-тетрагидробензотиена [2,3-d]пиримидина (препарат) Г-1697).

Смесь 4,5 г (0,02 моль) 4-хлор-5,6,7,8-тетрагидробензотиено[2,3-d]пиримидина, 2,05 г (0,02 моль) 4-аминобензо (2,1,3) тиадиазола и 25,0 г фенола нагревают при 120-130^oC в течение 4 ч. Реакционную массу охлаждают и выливают в 100 мл 10%-ного водного раствора едкого натра, отфильтровывают выделившийся осадок, промывают водой и сушат. Осадок дважды промывают 30 мл горячего этилацетата, после чего кристаллизируют из дихлорэтана. Выход 2,1 г (62%), т. пл. 235-237^oC. Кристаллы темно-желтого цвета с блеском.

Вычислено,%: C 56,6; H 3,9; N 20,6; S 18,9
C₁₆H₁₃N₅S₂
Найдено,% C 57,3; H 4,1; N 20,4; S 18,4
ИК-спектр препарата Г-1697, снятый на приборе "Спекорд IR 75" в прессовке с KBr, содержит полосу νNH 3413 см^-1.

Пример 2. Исследование острой токсичности препарата Г-1697.

Изучение острой токсичности препарат Г-1697 проведено на аутбредных белых мышах обоего пола массой тела 14-16 г. Препарат растирали в ступке и вводили однократно в желудок в 1%-ном крахмальном геле (вещество нерастворимо в воде) в различных дозах: 0,1 - 0,5 - 0,63 - 0,8 -1,0- 1,6 - 2,5 - 4,0 г/кг. На каждую дозу брали по 10 животных. Максимальную нелетальную дозу (МНДД) определяли непосредственно по данным эксперимента. Наблюдение за состоянием животных проводили в течение двух недель с момента введения препарата. В результате исследования установлено, что животные переносят препарат Г-1697 в дозе 4,0 г/кг без признаков отравления, т.е. препарат Г-1697 относится к малотоксичным соединениям.

Пример 3. Исследование эффективности препарата Г-1697 при экспериментальном ларвальном альвеолярном эхинококкозе хлопковых крыс.

Исследование противогельминтной активности препарата Г-1697 проведены в сравнении в одинаковых условиях эксперимента с известным препаратом мебендазолом [2] , применяемым в клинических условиях для лечения больных ларвальными альвеолярным и гидатидозным эхинококкозами.

Терапевтическую активность препарата Г-1697 оценивали на наиболее устойчивой к химиотерапии экспериментальной модели ларвального альвеолярного эхинококкоза на хлопковых крысах.

В опыте использованы хлопковые крысы-самцы, зараженные в возрасте 1,5-2 мес. внутрибрюшинно протосколексами и ацефалоцистами альвеолярного эхинококка. Каждое животное получило по 500 протосколексов и 100 ацефалоцист диаметром до 300 мкм от экспериментально зараженной хлопковой крысы-донора. Длительность экспериментальной инвазии к моменту начала лечения составляла 7 дней. Исходная масса развившихся к этому сроку паразитных ларвоцист (ПЛ), определенная по данным вскрытия пяти животных, варьировала от 0,07 до 0,42 и составляла в среднем 0,28 ± 0,07 г. Диаметр самой крупной среди выявленных у каждого животного ПЛ достигал 1 мм. В экспериментальных (леченых препаратом Г-1697 и мебендазолом) и контрольной группах было по 8 крыс. Подвергнутые лечению животные получали препараты в смеси с кормом непрерывно в течение трех недель в средней суточной дозе 0,12 г/кг. Всех леченых и контрольных животных вскрывали через 34 дня после заражения; у каждой крысы определяли массу всех выявленных ПЛ с точностью до 0,01 г ан аналитических торсионных весах Сарториус (ФРГ) и диаметр одной наиболее крупной из всех выявленных ПЛ с точностью до 1 мм. Содержимое всех выявленных в нативных препаратах подвергали микроскопическому исследованию при малом увеличении микроскопа на наличие и выраженность деструктивных изменений зародышевых элементов (протосколексов и ацефалоцист) эхинококка. Показателями гибели протосколексов служили уменьшение количества или исчезновение известных телец, сглаженность, помутнение и потемнение структуры паренхимы, деформация короны крючьев или ее отпадение у вывернутых форм, набухание, отслоение и нарушение целостности тегумента. Показателями гибели ацефалоцист являлись сглаженность структуры, потемнение, зернистость герминативной оболочки, ее отслоение от кутикулярной оболочки, нарушение целостности последней, колапс ацефалоцист разной степени выраженности.

Эффективность химиотерапии оценивали с помощью индекса торможения роста ПЛ (ИТРПЛ) в%, который рассчитывали по формуле
ИТРПЛ = (М_к-М_л)/(М_к - М_и) • 100,
где
М_и, М_л и М_к - средние показатели массы ПЛ на 1 животное соответственно исходный у леченых и контрольных крыс.

Результаты испытания показали, что препарат Г-1697 проявил выраженную химиотерапевтическую активность, превышающую таковую мебендазола (таблица).

В леченых и контрольных группах - по 8 крыс (самцы) препараты задавали животным в смеси с кормом с 8 по 28-й дни после заражения в средней суточной дозе действующего вещества 0,12 г/кг (суммарная курсовая доза - 2,47 г/кг), всех животных вскрывали после 34 дня после заражения.

У крыс, леченных препаратом Г-1697 и вскрытых через 34 дня после заражения (через 6 дней после окончания лечения), масса ПЛ на 1 животное варьировалась от 0,28 до 1,69 г и составляла в среднем 0,95 ± 0,21 г. Диаметр наиболее крупных ПЛ достигал 4 мм. Деструкцию всех зародышевых элементов наблюдали примерно у 70-90% ПЛ среди всех выявленных у каждой леченой крысы. У леченых мебендазолом крыс масса ПЛ на 1 животное колебалась в пределах 0,63 - 3,07 г, составляя в среднем 1,86 ± 0,33 г. Диаметр наиболее крупной ПЛ достигал 6 мм. Все выявленные ПЛ были живыми, незрелыми (не содержали юных и зрелых протосколексов), деструктивных изменений у них не наблюдали. У вскрытых к тому же сроку контрольных крыс масса ПЛ на 1 животное варьировалась в пределах 2,94 - 14,72 и составляла в среднем 7,51 ±1,41 г. Максимальный диаметр ПЛ достигал 10 мм. Все ПЛ у контрольных крыс были живыми, не имели деструктивных изменений и среди них преобладали зрелые формы. Выявленные различия средних показателей массы ПЛ у крыс, леченных препаратом Г-1697 (0,95 г) и мебендазолом (1,86 г), были статически существенными (t=2,72; P<0,05). Различия средних показателей массы ПЛ у леченных препаратом Г-1697 и мебендазолом и контрольных животных (7,51 г) характеризовались высокой степенью статистической достоверности (t= 6,03 и 5,35 соответственно; P <0,001).

Таким образом, препарат Г-1697 относится к малотоксичным соединениям (переносится мышами в дозе 4,0 г/кг без признаков отравления) и обеспечивает более интенсивное угнетение роста ларвоцист альвеолярного эхинококка (90,8%) у экспериментально зараженных хлопковых крыс и гибель большинства паразитарных ларвоцист (70-90%) у животных по сравнению с известным специфическим химиотерапевтически препаратом мебендазолом, который в одинаковых условиях эксперимента вызывал лишь торможение роста паразита (78,1%) и не оказывал на него губительного действия.

Новое гетероциклическое соединение - 4-[(бензо-2,1,3-тиадиазолил-4) амино] -5,6,7,8-тетрагидробензотиено[2,3-d] пиримидин, обладающее улучшенной противогельминтной активностью, может быть использовано в медицине для лечения больных ларвальными альвеолярным и гидатидозным эхинококкозами. Соединение обеспечивает большее угнетение роста ларвоцист альвеолярного эхинококка (90,8%) и гибель большинства паразитивных ларвоцист (70-90%) у экспериментально зараженных хлопковых крыс по сравнению с известным противоэхинококковым препаратом мебендазолом. Соединение относится к малотоксичным и переносится мышами в дозе 4,0 г/кг без признаков отравления. 1 табл.

4-[(Бензо-2,1,3-тиадиазолил-4)амино]-5,6,7,8,-тетрагидробензотиено[2,3 - d]пиримидин формулы

обладающий противогельминтной активностью при ларвальном альвеолярном эхинококкозе.