Способ диагностики гнойно-септических заболеваний Советский патент 1993 года по МПК G01N33/549 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано в клинической диагностике сепсиса, остеомиелита и других гнойно-септических заболеваний.

Цель изобретения - ускорение способа.

Это выполняется тем, что кровь смешивают со специфической сывороткой, содержащей антитела против микробов возбудителя гнойных заболеваний, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном супернатанте определяют содержание калия и при повышении его концентрации на 7% и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание.

В отличие от известного способа диагностики путем бактериологического длительного метода исследования предложенный способ является иммунохи- мическим и основан на взаимодействии микробных антигенов с антителами сыворотки на поверхности клеток крови, отражающее специфический иммунологический механизм процессов антиген-антитело с высвобождением из разрушенных клеток внутриклеточного микроэлемента.

Это позволяет сократить время диагностики и повысить точность способа.

Способ осуществляют следующим образом: 0,08 мл крови из пальца смешивают с 0,02 мл антимикробной сыворотки, разведенной на 5% цитрате натрия в титрр, определенном опытным путем, Например, для антистафилококковой сыворотки - титр 1:100 (табл. 1).

Параллельно проводят контрольную пробу: 0,08 мл крови смешивают с 0,02 мл 5% цитрата натрия. Кровь инкубируют 2 часа при 37°С. Во все пробирки добавляют по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, смесь взбалтывают и центрифугируют 10 мин, при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают и определяют в ней содержание ионов калия пламенной фотою

С

00

го

ел

00

со

метрией или другим чувствительным способом. Результат рассчитывают по формуле

% -- . 100,

где О - содержание калия в опытной пробе;

К - содержание калия в контрольной пробе.

При значениях результата 7% и выше диагносцируют гнойно-септическое заболевание.

Способ испытан при диагностике гнойно-септических заболеваний с подтвержденнойбактериологическистафилококковой этиологией

В табл. 2 приведены результаты испытания метода. Для сопоставления метод выполнялся с антигенами стафилококка и кишечной палочки, а также с антисывороткой против кишечной палочки.

В результате выявлено, что разница в пределах интервала между средними минимальными и максимальными значениями показателей повреждения клеток при сепсисе и остеомиелите и средними значениями показателей повреждения клеток здоровых людей равна при сепсисе: (14,36 - 4,41) - (2,40 + 0,80) - 6,75

при остеомиелите: (14,07 5,69) - (2,40 - 0,80)6,78 При округлении этих величин 7%.

При испытании данного метода положительные результаты были получены у 7 из 10 больных сепсисом (70%). Рекция была положительной также у половины больных острым гематогенным остеомиелитом. У здоровых доноров реакция была положительной у 2 из 18 человек (11 %). При применении антисыворотки против кишечной палочки получены более низкие значения, что свидетельствует о возможности ориентированного выявления этиологии заболевания.

Пример. Больная Б., 14 лет, поступила в хирургическое отделение 30.09.89 г. с диai нозом. сепсис. Кровь нзяга на анализ 01.10.89 г. Из крови ныявпен Staphylococcus aureus.

По 0 08 мл крови из пальца смешали с 0,02 мл антистафилококковой сыворотки, разведенной на 5% цигра е натрия в титре 1:100. Дня контроля 0,08 мл крови смешали с 0,02 мл 5% цитрат-) натрия Инкубирование опып они контрольной проб проводили при 37°С в течение чисив Зотим в обе пробирки добавили по 0,9 мл исотоническо- го раствора хлористо о натрия, CMSCLозбол- гали и oi центрифуг ,и 10 мин при скорости 1500 В надосадочной жидкости с помощью пламенною фотометра определили содержание ионов калия.

Реэулыягы rutrjM ни о Л фотометрии

контрольная проба 17,5

опытнач проба 19.5

показатель повреждения клеток 11,4%

Таким образом, весь процесс постановки реакции и учет полученных данных занимает около 3-х часов Это сокращает сроки

постановки диагноза на 4 суток по сравнению с известным способом лабораторной диагностики гнойно-септических заболеваний, так как отпадает изобходимость в посеве крови на г.шзтельные среды,

получении чистой культуры и ре идентификации ромс того, упргмц стья -роведение исследования и умьн. финансовые затраты на один зналит

Формулам обретения

Способ диагно гики гнойно-септиче CKIIA заболеваний путем исследования крови, от ичающийсч тем, что исследуемую кровь смешивают со специфической сыворепкой, сэдс-ржащей антитела против возбудителя гнойного заболевания, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном супернатанте определяют содержание калия и при превышении его концентрации на

7% и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание

Использование: медицина, иммунология, диагностика сепсиса, остеомиелита и других гнойно-септических заболеваний. Сущность изобретения: кровь смешивают со специфической сывороткой, содержащей антитела против микробов возбудителя гнойных заболеваний, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном су- пернатанте определяют содержание калия и при повышении его концентрации на 7% и более по сравнению с контролем диагнос- цируют гнойно-септическое заболевание. 2 табл.

Титрование антистафилококковой сыворотки

50

Таблица 1

Примечание: 1- результаты пламенной фотометрии, 2- показатель повреждения клеток (%)

Таблица 2

Результаты ускоренного метода диагностики гнойно-септического состояния стафилоккоковой этиологии

Продолжение табл.1