МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ И ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИЙ РОДА LISTERIA Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 C12N1/00 C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в пищевой промышленности, а именно к микробиологическим средам, для выращивания бактерий рода Listeria.

Известны различные белковые основы, использующиеся для приготовления питательных сред, основными компонентами которых являются мясные бульоны и белковые гидролизаты с различной степенью конверсии белка в смеси олигомеров и аминокислот (Белковые гидролизаты в производстве питательных сред. - М.: ВНИИ систем управления, 1990, 50 с.). Основным источником сырья для производства таких гидролизатов является мясо, рыба, боенская кровь, кормовые дрожжи, растительные отходы и т.д.

Наиболее близкой микробиологической средой является среда для выращивания бактерий рода Listeria, состоящая из белкового компонента, в качестве которого используют мясопептонный бульон, натрия хлорид и вода (патент Франции N 2671561, кл. C 12 Q 1/04).

Недостатком микробиологической среды является высокая стоимость, необходимость использования пищевого сырья и непостоянство аминокислотного состава, обуславливаемого различными источниками для получения как самого пептона, так и мясопептонного бульона, что приводит к неравномерному росту на таких средах различных микроорганизмов, особенно относящихся к роду Listeria.

Предлагаемая плотная микробиологическая среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов, белковую основу, входящую в среду, получают из непищевого сырья.

В состав плотной микробиологической среды входят следующие компоненты, мас.%:
Ферментативный гидролизат крови - 0,8 - 1,2
Натрия хлорид - 0,4 - 0,6
Мясная вода - 96,3 - 96,7
Глюкоза - 0,8 - 1,2
Агар микробиологический - 0,7 - 1,3
pH среды - 7,2 - 7,4
Ферментативный гидролизат крови получают путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом. Для ферментативного гидролиза используют остаточные пивные дрожжи рода Saccharomyces carlsberg 12 - 16 генерации в виде водной суспензии с содержанием сухих веществ 6 - 10% и содержанием физиологически активных клеток не менее 40%, при этом кровь крупного рогатого скота, отвечающая требованиям ОСТ 49-161-80 и содержащая 15 - 18% белка, определяемого по методу Лоури. Гидролиз проводят при температуре 55 - 58^oC в течение 4,5 ч в присутствии 4 об.% плазмолизирующего агента этанола, стабилизирующего реагента цитрата натрия - 5,5 об.% при содержании в смеси крови - 30 об.% и суспензии дрожжей - 40 об.% с последующей распылительной сумкой гидролизата крови. Выход ферментативного гидролизата крови при этом составлял до 40 - 50%. (См. табл. 1 и 2).

Ферментативный гидролизат характеризуется:
pH 1%-ного раствора - 6,6,
Содержание азота свободных аминогрупп - 1,5%
Содержание общего азота - 5,6%
Содержание хлорида натрия - 4,5%
Содержание золы - 7%
Пример 1. Для диагностики бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:
Агар микробиологический - 0,7
Ферментативный гидролизат крови - 1,2
Натрия хлорид - 0,6
Мясная вода - 96,7
Глюкоза - 0,8
pH среды - 7,2
Проводят посев согласно "Методическим рекомендациям по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред" (утв. МСХ СССР 30.12.82) из исходной взвеси листерий, стерильно готовят 10-кратное разведение путем последовательного переноса 0,5 мл культуры в 8 пробирок с 4,5 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из 4 последних разведений (10⁵ - 10⁸) по 0,1 мл микробной взвеси вносят в 3 подсушенные чашки с плотной питательной средой. При посевах взвесь культуры распределяют по поверхности среды шпателем.

Посевы инкубируют при температуре +30^oC. Учет проводят через 12 - 24 - 48 ч.

Пример 2. Для диагностики бактерий рода Listeria берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:
Агар микробиологический - 1
Ферментативный гидролизат крови - 1
Натрия хлорид - 0,5
Мясная вода - 96,5
Глюкоза - 1
pH среды - 7,3
Посев и учет роста Listeria monocytogenes проводили аналогично примеру 1.

Пример 3. Для выращивания бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава, мас.%:
Агар микробиологический - 1,3
Ферментативный гидролизат крови - 0,8
Натрия хлорид - 0,4
Мясная вода - 96,3
Глюкоза - 1,2
pH среды - 1,4
Посев и учет проводили аналогично примеру 1.

Изобретение относится к микробиологической и пищевой промышленности, а именно к микробиологическим средам для выращивания и диагностики бактерий рода Listeria. Микробиологическая среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов. Плотная микробиологическая среда состоит из ферментативного гидролизата крови 8 - 1,2%, натрия хлорида 0,4 - 0,6%, мясной воды 96,3 - 96,7%, глюкозы 0,8 - 1,2%, агара микробиологического - 0,7 - 1,3%, при рН среды 7,2 - 7,4. 2 табл.

\\\1 Микробиологическая среда для выращивания и диагностики бактерий рода Listeria, включающая белковый компонент, натрия хлорид, воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу, а в качестве белкового компонента используют ферментативный гидролизат крови, полученный путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом, при этом используют мясную воду и агар микробиологический при следующем соотношении, мас.%: \\\3 Ферментативный гидролизат крови \ \ \7 0,8 - 1,2 \\\3 Натрия хлорид \\\7 0,4 - 0,6 \\\3 Мясная вода \\\7 96,3 - 96,7 \\\3 Агар микробиологический \\\7 0,7 - 1,3 \\\3 Глюкоза \\\7 0,8 - 1,2