МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА LISTERIA Российский патент 1999 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к микробиологическим средам, предназначенным для выращивания или идентификации бактерий рода Listeria, и может быть использовано в пищевой и микробиологической отраслях промышленности.

Известны различные белковые основы, использующиеся для приготовления питательных сред, основными компонентами которых являются мясные бульоны и белковые гидролизаты с различной степенью конверсии белка в смеси олигомеров и аминокислот (Белковые гидролизаты в производстве питательных сред. - М., ВНИИ систем управления, 1990, 50 с.). Основным источником сырья для производства таких гидролизатов является мясо, рыба, боенская кровь, кормовые дрожжи, растительные отходы и т.д.

Наиболее распространенной белковой основой для приготовления питательных сред является пептон, который широко используется как в средах, приготовленных в лабораторных условиях, так и коммерческих дифференциально-диагностических средах. Пептон характеризуется высоким содержанием лейцина, фенилаланина, лизина и аргинина, которые в сумме составляют 50-60% от общего содержания аминокислот.

Наиболее близкой белковой основой к предлагаемому изобретению является мясо-пептонный бульон, а также среды с пептоном, которые готовят добавлением различных компонентов, как это описано для составов сред, применяемых для идентификации бактерий рода Listeria (L. monocytogenes, L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, L. grayi, L. murrayi) (Пат. Франции 2671561, C 012 Q 1/04).

Недостатком микробиологической среды является высокая стоимость, необходимость использования пищевого сырья и непостоянство аминокислотного состава, обуславливаемого различными источниками для получения как самого пептона, так и мясо-пептонного бульона, что приводит к неравномерному росту на таких средах различных микроорганизмов, особенно относящихся к роду Listeria.

Предлагаемая жидкая микробиологическая среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов, кроме того, белковую основу, входящую в среду, получают из непищевого сырья.

В состав жидкой микробиологической среды входят следующие компоненты, мас.%:
Ферментативный гидролизат крови - 0,9-1,1
Натрия хлорид - 0,4-0,6
Мясная вода - 97,4-97,6
Глюкоза - 0,9-1,1
рН среды - 7,2-7,4
Ферментативный гидролизат крови получают путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом. Для ферментативного гидролиза используют остаточные пивные дрожжи рода Saccharomyces carlsberg 12-16 генерации в виде водной суспензии с содержанием сухих веществ 6-10% и содержанием физиологически активных клеток не менее 40%, при этом кровь крупного рогатого скота, отвечающую требованиям ОСТ 49-161-80 и содержащую 15-18% белка, определяемого по методу Лоури. Гидролиз проводят при температуре 55-58^oC в течение 4,5 ч в присутствии 4 об.% плазмолизирующего агента этанола, стабилизирующего реагента цитрата натрия 5,5 об.%, при содержании в смеси крови 30 об.% и суспензии дрожжей 40 об. % с последующей распылительной сумкой гидролизата крови. Выход ферментативного гидролизата крови при этом составлял до 40-50%. Характеристика гидролизата отражена в табл. 1
Ферментативный гидролизат характеризуется:
рН 1%-ного раствора - 6,6
Содержание азота свободных аминогрупп - 1,5%
Содержание общего азота - 5,6%
Содержание хлорида натрия - 4,5%
Содержание золы - 7%
Содержание "условного" белка (метод Кьельдаля) - 67%
Пример 1. Для диагностики бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава (мас.% доли):
Ферментативный гидролизат крови - 0,9
Натрия хлорид - 0,6
Мясная вода - 97,6
Глюкоза - 0,9
рН среды - 7,2
Проводят посев согласно "Методическим рекомендациям по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред" (утв. МСХ СССР 30.12.82), Из исходной взвеси листерий, стерильно готовят 10-кратное разведение путем последовательного переноса 0,5 мл культуры в 8 пробирок с 4,5 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из последних разведений (10⁵-10⁸) по 0,1 мл микробной взвеси вносят в 3 пробирки с 10 мл жидкой питательной средой.

Посевы инкубируют при температуре 30^oC. Учет проводят через 17-19 часов. Результаты представлены в табл. 2.

Пример 2. Для выращивания бактерий рода Listeria берут микробиологическую среду следующего состава (мас.% доли):
Ферментативный гидролизат крови - 1
Натрия хлорид - 0,5
Мясная вода - 97,5
Глюкоза - 1
рН среды - 7,3
Посев Listeria monocytogenes проводят согласно "Методическим рекомендациям по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред" (утв. МСХ СССР 30.12.82). Из исходной взвеси листерий, стерильно готовят 10-кратное разведение путем последовательного переноса 0,5 мл культуры в 8 пробирок с 4,5 мл физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из 4 последних разведений (10⁵-10⁸) по 0,1 мл микробной взвеси вносят в 3 пробирки с 10 мл жидкой питательной средой.

Посевы инкубируют при температуре 30^oC. Учет проводят через 17-19 часов.

Пример 3. Для выращивания бактерий Listeria monocytogenes берут микробиологическую среду следующего состава (мас.% доли):
Ферментативный гидролизат крови - 1,1
Натрия хлорид - 0,4
Мясная вода - 97,4
Глюкоза - 1,1
рН среды - 7,4
Посев и учет роста проводили аналогично примеру 1.

Изобретение касается выращивания или идентификации бактерий рода Listeria и может быть использовано в пищевой и микробиологической областях промышленности. Жидкая микробиологическая среда состоит из ферментативного гидролизата крови 0,9-1,1%, натрий хлорида 0,4-0,6%, мясной воды 97,4-97,6%, глюкозы 0,9-1,1% при pH 7,2-7,4. Среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов. 2 табл.

Микробиологическая среда для выращивания бактерий рода Listeria, содержащая белковый компонент, натрий хлорид и жидкую основу, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу, в качестве белкового компонента содержит ферментативный гидролизат крови, полученный путем двухкратного замораживания с размораживанием боенской крови с последующим ферментативным и кислотным гидролизом, а в качестве жидкой основы - мясную воду при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Ферментативный гидролизат крови - 0,9 - 1,1
Натрий хлорид - 0,4 - 0,6
Мясная вода - 97,4 - 97,6
Глюкоза - 0,9 - 1,1