СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОБЛУЧЕННЫХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Российский патент 1998 года по МПК A61K35/407 

Изобретение относится к медицинской радиобиологии и может быть использовано для создания препаратов, обладающих эффективным терапевтическим действием для лечения облученных млекопитающих.

Известно, что препараты, приготовленные из экстракта селезенки, взятой от мышей, показали определенное влияние на выживаемость облученных животных, причем получен противолучевой эффект, выражающийся в увеличении выживаемости леченных облученных животных на 20 - 40% по сравнению с нелеченными. (Олонцева О.И. и др. Влияние экстракта селезенки на облученных животных. Радиобиология, 1977, т.XVII, вып. 4, с. 536 - 540).

Наилучшие результаты были получены при использовании очищенного экстракта селезенки, взятой от мышей 3 - 4 недельного возраста. Биологическую активность экстракта и 1-ой фракции из него оценивали по выживаемости мышей, облученных γ - лучами ⁶⁰Co с мощностью 0,097 - 0,106 Гр/мин в дозах 7,9 - 8,3 Гр. Препарат вводили через 60 мин после воздействия радиации в количестве 5-6 мг белка первичного экстракта или 2,0 - 2,4 мг белка очищенного экстракта на мышь. (Олонцева И.О. и др. Влияние очищенного селезеночного экстракта на выживаемость облученных мышей. Радиобиология, 1980, т. XX, вып. 6, с. 877-880).

Однако, в связи с невысокой радиорезистентностью мышей, для получения устойчивого терапевтического воздействия необходимо введение значительного количества полученного средства (до 6 мг белка).

Задачей настоящего изобретения является создание средства для лечения облученных млекопитающих, обладающего эффективным лечебным действием при сокращении дозы введения в 10-15 раз.

Эта задача достигается тем, что для получения средства для лечения облученных млекопитающих, выделяемого в виде бесклеточного экстракта из кроветворных органов, в качестве исходного сырья для экстрагирования используют печень эмбриона взрослой черепахи Testudo horsfieldi.

Экстракты взрослой и эмбриональной (фетальной) печени черепахи готовят по методу Ellinger (Ellinger F., Proc.Soc. ExpH., Biol. and Med., 1956, v. 92, N 4, p. 670 - 673). Печень замораживают в фарфоровой ступке, помещенной в жидкий азот, затем размельчают до порошкообразного состояния. Экстракцию проводят физиологическим раствором из расчета 170 мг сырой ткани на 1 мл и помещают в холодильник на 24 часа. Затем центрифугируют при 4400 g в течение 30 мин. Затем экстракт очищают и стерилизуют через миллипоровый фильтр (0,4 мкм).

Гемоглобин, липиды и углеводы выделяются из экстракта по методу Куртиса (Curtis F. J., Biochim. Biophis. Acta, 1970, 211, p. 575). Протеин осаждают смесью хлороформ-метанола (2: 1), затем из ресуспензируют с конечной концентрацией 2 мг/мл в 0,9% NaCl. К полученному раствору добавляют смесь хлороформа и метанола из расчета на 1 объем белка - 9 объемов смеси, выдерживают в течение 30 мин. Полученный преципитат отделяют, а жидкость подвергают лиофильной сушке.

После лиофильной сушки экстракт представляет собой белый порошок с содержанием влаги 5±0,2%. Он обладает хорошей растворимостью в воде (без осадка). Содержание белка - 62±1,5% (определялось по методу Lowru), содержание углеводов - 4,0±0,2% (определено по методу Dubois).

При снятии спектра поглощения в диапазоне 190-390 nm, был выявлен максимум поглощения 199, 220, 180 nm.

Токсичность (ЛД - 50) : > 250±2 мг/кг (мыши, внутрибрюшинно).

Полученный экстракт взрослой и фетальной печени черепахи проявляет эффективное противорадиационное действие на облученные организмы, что, по видимому связано с высокой радиорезистентностью организма черепахи. Введение полученных препаратов после радиационного облучения способствует восстановлению гемопоэза и увеличению 30-суточной выживаемости облученных в летальной дозе животных, стимулирует у них кроветворение и образование эндогенных колоний в селезенке. Выживаемость облученных леченных животных при равных дозах и мощности облучения увеличивается в среднем на 30% при введении доз препарата в 10 - 15 раз меньших, по сравнению с животными, которым вводился экстракт селезенки мышей, и на 30-80% по сравнению с нелеченными животными.

Наиболее выраженным эффективным лечебным действием обладает экстракт фетальной печени черепахи.

Благодаря уменьшению вводимой дозы, уменьшается общий расход препарата, кроме этого, в результате уменьшения дозы вводимого чужеродного белка уменьшается риск возникновения нежелательных побочных действий препарата.

На основе полученных экстрактов печени черепахи, согласно изобретению, можно приготавливать различные фармацевтические средства, обладающие противорадиационным действием.

Для исследования эффективности действия препарата, проводилось облучение гамма-лучами ⁶⁰Co мышей весом 18-20 г дозой 8 Гр, крыс весом 200 г дозой 12 Гр. Животные были разделены на группы, и через 2 часа после облучения одним группам мышей и крыс были введены препараты взрослой (S1) и фетальной (S2) печени, в дозах: для мышей - 400 мкг белка в 0,3 мл физ. р-ра, для крыс - 2 мг белка в 0,4 мл физ. р-ра.

В качестве контроля для каждого вида животных одна группа животных была облучена и получила инъекцию только физ. раствора (0,9%-ный раствор NaCl по 0,3 мл на мышь, 0,4 мл на крысу), а другая группа животных не получила ни облучения, ни инъекции (интактные животные).

На 8 и 11 день после облучения были определены следующие параметры у подопытных животных:
1. Количество эндогенных колоний на селезенке. Селезенка извлекается, выдерживается в течение 24 ч в растворе Карнуа. Затем образец помещается в фильтровальную бумагу и под стереоскопом подсчитывается количество колоний.

2. Митотическая активность костного мозга. Выделяется бедренная кость, из нее экстрагируется костный мозг, делается мазок и окрашивается краской Гимза-Романовского. Количество митозов подсчитывается под микроскопом из расчета 1000 клеток.

3. Количество лейкоцитов. Подсчитывается в камере Горяева под микроскопом.

4. Масса селезенки. Селезенка выделяется, переносится на фильтровальную бумагу, взвешивается.

5. Количество клеток крови. Подсчитывается на автоматическом счетчике клеток "PS-4" ("Пикоскаль", Венгрия).

6. 30-суточная выживаемость. Определяется процентное отношение выживших в течение 30 суток животных (количество в группе до облучения - 100%).

В табл. 1 и 2 приведены результаты исследований, причем в табл. 1 приведены результаты введения препаратов S1 и S2 для мышей, а в табл. 2 приведены результаты для крыс.

Результаты, приведенные в таблицах, показывают эффективность экстрактов взрослой и фетальной печени черепахи Testudo horsfieldi для лечения пораженных радиацией животных.

Изобретение относится к медицинской радиобиологии и может быть использовано при лечении облученных млекопитающих. Средство для лечения облученных млекопитающих содержит бесклеточный экстракт печени черепачи Testudo horsfieldi. Использование предлагаемого средства улучшает кроветворные функции организма и увеличивает выживаемость млекопитающих. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Средство для лечения облученных млекопитающих, выделенное в виде бесклеточного экстракта из кроветворных органов, отличающееся тем, что в качестве исходного сырья для экстрагирования использована печень эмбриона и взрослой черепахи Testudo horsfieldi. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит экстракт печени черепахи Testudo horsfieldi.