КОМПЛЕКСНЫЙ ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ "БИФИТРИЛАК" Российский патент 1998 года по МПК A61K35/66 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний в ветеринарии.

Известны биопрепараты, нормализующие микрофлору, например, "Профилактический биопрепарат Субалин" (см. описание изобретения к патенту РФ N 2035185, кл. A 61 K 35/66, опубл. в 1995 г.), включающий живую биомассу Bacillus Subtilis ВКПМ с титром 1•10⁹ - 1•10¹⁰ живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора и наполнитель, в качестве которого могут использоваться сыворотка крови, молоко, сахарозо-желатиновая смесь. Этот препарат характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно патогенных микроорганизмов.

Известен также "Профилактический биопрепарат Споролак" (см. описание изобретения к патенту РФ N 2035186, кл. A 61 K 36/66, опубл. в 1995 г.), содержащий лактобактерин с титром 10⁹ - 10¹¹ живых микробных клеток в одной дозе, бактерин-СЛ с титром 10⁹ - 10¹¹ живых микробных клеток в одной дозе при равном объемном соотношении лактобактерина и бактерина-СЛ. Известный биопрепарат "Споролак" является высокоэффективным средством для профилактики и лечения острых кишечных инфекций, а также дисбактериозов различной этиологии, оказывающим выраженный клинический эффект в ранние сроки лечения.

Однако оба известных препарата обладают одним и тем же недостатком, заключающимся в том, что их лекарственная форма в виде растворов ограничена в сроках хранения.

Известен сухой пробиотический продукт, полученный по способу, описанному в статье Антипова В.А. и др. Применение СБА в качестве ростстимулирующего средства. Всес. конф. "Микроорганизмы - стимуляторы и ингибиторы роста растений и животных". 3-5 окт. 1989, Тез. докл. ч.1, Ташкент, 1989. с. 14, и выбранный в качестве ближайшего аналога.

Известный сухой бактериальный препарат СБА, содержащий L.acidophilum, B. bifidum и S. faecium, получают смешиванием раздельно выращенных на молоке биомасс культур с последующей сушкой их распылением и используют для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных.

Однако в спектр микроорганизмов указанного препарата не входят микроорганизмы, устойчивые к действию антибиотиков, что сужает спектр его лечебно-профилактических свойств, а отсутствие адсорбента снижает и эффективность его действия.

Задача предлагаемого изобретения направлена на создание комплексного пробиотического препарата для животных, позволяющего повысить эффективность его действия за счет содержания в нем адсорбента, а также расширить спектр лечебно-профилактических свойств препарата за счет включения в его состав микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам и позволяющих применять его совместно с антибиотикотерапией при тяжелых формах инфекции.

Поставленная задача достигается тем, что комплексный пробиотический препарат для животных "БИФИТРИЛАК", содержащий микроорганизмы Lactobacillus acidophilus и Bifidobacterium bifidum, дополнительно содержит микроорганизмы Lactobacillus bulgaricus и Laсtobacillus fermentum, а также адсорбент, причем все микроорганизмы взяты в равных соотношениях с титром 0,5 •10⁹ жизнеспособных единиц на 1 г адсорбента, в качестве которого использован вермикулит.

Сущность изобретения заключается в расширении видового спектра микроорганизмов, применяемых в предлагаемом препарате, которые выделены из микрофлоры здоровых животных разных видов, и дополнительном введении адсорбента.

Использование такого комплекса видов микроорганизмов обеспечивает препарату высокую антагонистическую активность в отношении широкой группы болезнетворных микроорганизмов.

Два вида дополнительно введенных микроорганизмов Lactobacillus bulgaricus и Lactobacillus fermentum обладают перекрестной устойчивостью к действию большинства антибиотиков широкого спектра действия, применяемых для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных. Благодаря этим свойствам микроорганизмов предлагаемый препарат может успешно применяться совместно c антибиотикотерапией при тяжелых формах болезни, что в свою очередь приводит к расширению спектра лечебно-профилактических свойств препарата.

Введение в предлагаемый комплексный пробиотический препарат адсорбента, в качестве которого использован природный полимер вермикулит, позволило получить ряд положительных свойств препарата, а именно увеличить срок его хранения до 1 года без потери активности микроорганизмов, а также существенно повысить эффективность действия препарата за счет поглощения вермикулитом токсинов и ядов, выделяемых патогенными микроорганизмами в желудке больного животного.

Проводились исследования нормальной микрофлоры кишечного тракта различных групп животных: свиней, коров, кошек и собак. Среди широкого видового спектра выделенных микробов-антагонистов необходимо было отобрать штаммы, которые бы отвечали всем нижеперечисленным требованиям. Во-первых, штаммы должны были присутствовать в составе нормальной микрофлоры всех исследованных видов животных. Во-вторых, штаммы должны были обладать перекрестной устойчивостью к основным антибиотикам, используемым в ветеринарной практике для лечения желудочно-кишечных инфекций. В результате проделанной работы из 119 выделенных штаммов микроорганизмов для дальнейшей работы было отобрано четыре. Это Lactobacillus bulgaricus K13, Lactobacillus acidofillus K81, Lactobacillus fermentum C79 - штаммы, обладающие устойчивостью к действию таких антибиотиков, как левомицетин, тетрациклины, эритромицин, бензилпенициллин, и являющиеся типичными представителями микробного ценоза пищеварительного тракта взрослых особей свиней, коров, кошек и собак. Был отобран штамм Bifidobacterium bifidum M3, не обладающий антибиотикоустойчивостью, но являющийся наиболее типичным представителем кишечной микрофлоры у молодняка вышеупомянутых видов животных.

Была разработана оригинальная технология выращивания биомассы и получения конечного сухого продукта.

Выращивание посевного материала лактобактерий проводили на стандартной среде с обезжиренным молоком, а бифидумбактерии - на печеночном бульоне при температуре 37-39^oC в течение 36 - 42 ч.

Конечную биомассу выращивали при совместном культивировании всех четырех штаммов микроорганизмов. Для этой цели использовали оригинальную ферментационную среду, в состав которой входили следующие компоненты: соевая мука, гидролизат молочной сыворотки, глюкоза, цитрат аммония, хлорид магния, хлорид марганца, агароза; pH среды 6.6 - 6.8. Выращивание проводили при температуре 37-39^oC в течение 48 - 72 ч. Ферментационную среду засевали 10 об.% отдельно выращенной биомассы бифидумбактерий и по 2 об.% отдельно выращенных биомасс штаммов лактобактерий.

Так как клетки микроорганизмов в культуральной жидкости очень быстро теряют жизнеспособность, а использование лиофильной или распылительной сушки - дорогой и энергоемкий процесс, была предложена оригинальная схема получения сухого препарата.

Полученную после ферментации культуральную жидкость смешивали с мелкой фракцией (0,5 - 1,5 мм) природного минерала вермикулита в таком соотношении, чтобы суммарный титр клеток бифидумбактерий и лактобактерий составлял не менее 2•10⁹ клеток на 1 г вермикулита. Полученную однородную смесь вермикулита высушивали в протоке горячего воздуха при температуре +40^oC для удаления остаточной влаги в течение 2-х суток.

Проведены исследования стабильности препарата при хранении. В течение 6 месяцев наблюдения титр жизнеспособных клеток оставался на исходном уровне, после 12 месяцев наблюдения - исходный титр уменьшился на 5%.

Проведены испытания терапевтических свойств препарата применительно к лечению желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных.

Пример 1. Опыты проводились в производственных условиях совхоза "Шушары" на 30 новорожденных поросятах и 20 новорожденных телятах. Опытной группе поросят, начиная с 14-дневного возраста, добавляли в корм по 0,1 г препарата на голову ежедневно в течение 5 суток. На телятах опыты проводились с 1-3-суточного возраста, в молозиво или молоко добавляли препарат в количестве 0,5 г один раз в сутки в течение 5 дней. Для контроля были отобраны аналогичные группы животных (порода, возраст, пол, вес). Наблюдения продолжались 30 суток.

Результаты исследования показали, что рост, развитие и сохранность поросят и телят в опытных группах были лучшими. Не отмечено ни одного случая смертности в отличие от контрольной группы. Такие показатели, как содержание гемоглобина, количество эритроцитов, гематокритная величина - были выше на 3 - 5 %. Отмечен положительный эффект по предупреждению диспепсии в новорожденных телят и поросят при даче препарата.

Пример 2. Влияние действия препарата "БИФИТРИЛАК" изучали на цыплятах-бройлерах с 2-недельного возраста в течение 10 дней. Были сформированы две группы по 90 голов в каждой: контрольную группу кормили по обычному рациону, опытной группе цыплят к обычному рациону перед кормлением добавляли препарат в количестве 0,004 г на одну голову - 3 дня подряд, раз в сутки.

Оценивались такие показатели, как среднесуточный прирост массы, интенсивность прироста, содержание эритроцитов в крови, содержание альфа-глобулинов в крови, % заболевших кишечными инфекциями. Показатели в опытной группе превышали контрольную группу на 3 - 10%. Не отмечено ни одного случая желудочно-кишечного заболевания цыплят в опытной группе, в то время как в контрольной группе заболеваемость составила 4%.

Пример 3. Клинические испытания препарата проводились в клинике Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины. Для исследования были сформированы две группы животных. Собаки первой группы страдали парвовирусным энтеритом. Применяли комплексное по принятой схеме лечение, но дополнительно внутрь вводили 1/4 чайной ложки препарата на животное 1 раз в день в течение 5 суток.

Собакам второй группы, болевшим гастроэнтеритом чумного происхождения, наряду с общепринятым лечением, препарат давали внутрь в той же дозе, но в течение 7 дней. Общее лечение как в первой, так и во второй группе включало антибиотики, иммуностимуляторы, физиологический раствор, витамины.

Проведенные наблюдения показали, что у собак первой группы нормализация пищеварения наступала на 3-4-е сутки от начала применения препарата, у животных второй группы пищеварение восстанавливалось на 5-7-е сутки от начала применения препарата.

При применении стандартных схем лечения без применения препарата нормализация желудочно-кишечной деятельности наступала на 2-5 суток позднее.

Таким образом, предлагаемый комплексный пробиотический препарат "БИФИТРИЛАК" обладает высокой эффективностью его действия и широким спектром его лечебно-профилактических свойств.

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний в ветеринарии. Сущность изобретения заключается в расширении видового спектра микроорганизмов, применяемых в предлагаемом препарате, которые обладают устойчивостью к действию большинства антибиотиков широкого спектра действия, предназначенных для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных. Препарат содержит микроорганизмы Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus bulgaricus и Lactobacillus fermentum в равных соотношениях с титром 0,5•10⁹ жизнеспособных единиц на 1 г адсорбента. В качестве последнего используют вермикулит. "БИФИТРИЛАК" более устойчив к действию антибиотиков широкого спектра действия, предназначенных для лечения желудочно-кишечных заболеваний. Применяется совместно с антибиотикотерапией при тяжелых формах инфекции.

Комплексный пробиотический препарат для животных, содержащий микроорганизмы Lactobacillus acidophilus и Bifidobacterium bifidum, отличающийся тем, что он дополнительно содержит микроорганизмы Lactobacillus bulqaricus и Lactobacillus fermentum, а также адсорбент, причем все микроорганизмы взяты в равных соотношениях с титром 0,5•10⁹ жизнеспособных единиц на 1 г адсорбента, в качестве которого использован вермикулит.