БЕСКЛЕТОЧНАЯ АНТИСТАФИЛОКОККОВАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/85 

Изобретение относится к области медицины, а именно к вакцинным препаратам.

Цель изобретения. Создание высокоэффективной антистафилококковой вакцины для лечения и профилактики обострений хронической стафилококковой инфекции.

Проблема стафилококковой инфекции на протяжении многих лет является одной из наиболее важных проблем медицинской науки и здравоохранения. Заболевания стафилококковой этиологии многообразны, поражают различные органы и, как правило, носят хронический характер. Удельный вес только хронических заболеваний кожи в разных районах станы составляет от 25 до 63%.

В последние годы с целью лечения и предотвращения рецидивов заболевания при хронических инфекциях применяют вакцинотерапию. Имеющиеся коммерческие стафилококковые препараты для активной иммунотерапии (антифагин, корпускулярная вакцина, анатоксин) не достаточно эффективны. В частности, для лечения хронических пиодермий используется стафилококковая лечебная вакцина (антифагин), представляющая собой фильтрат экстракта убитой нагреванием в течение 1 ч при 100^oC культуры 10-12 штаммов стафилококка, выдержанного и подвергнутого аутолизу в течение 1,5 мес. Полученный жидкий препарат содержит 1,0-1,2% сухого вещества (1).

Недостатком препарата является его невысокая эффективность, что связано, в частности, с наличием в препарате только термостабильных антигенов стафилококка.

Цель данного изобретения достигается получением бесклеточной антистафилококковой антибактериальной вакцины, состоящей из комплекса термолабильных и термостабильных антигенов, обеспечивающих высокую протективную активность препарата.

Цель достигнута: содержанием термолабильных и термостабильных белковополисахаридной природы антигенов клеточной стенки стафилококка, использованием высокоиммуногенных штаммов S.aureus: ЕД₅₀ 20-100 млн. микробных клеток, характеризующихся слабой вирулентностью: ЛД₅₀ 0,5-2,0 млрд. микробных клеток, низким содержанием белка A, слабой аллергенной активностью.

Пример осуществления способа. Для приготовления вакцины используют штаммы S. aureus N 1991 и N 1986 - депонированы в ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича. Штаммы культивируют 10 ч на плотной агаровой среде из триптического гидролизата казеина при температуре 37^oC. Культуру смывают дистиллированной водой, обрабатывают трехкратно тройным объемом ацетона с интервалом 10-18 ч с целью инактивации и высушивания микробной массы. Сухую инактивированную микробную массу подвергают водной экстракции путем добавления стерильной дистиллированной воды из расчета 80 мл на 1 г массы. Экстракцию проводят трехкратно при шюттелировании в течение 1 ч при каждой экстракции. Затем, экстракт центрифугируют при 6000 об/м в течение часа. Собирают декантат и подвергают его лиофильному высушиванию в присутствии стабилизирующих веществ желатозы и аскорбиновой кислоты. Полученный антигенный комплекс характеризуется содержанием 15-20% белка, 10-15% углеводов и дает в электрофорезе со специфической антимикробной сывороткой 3-4 линии преципитации.

Полученный указанным способом препарат был подвергнут доклиническому и клиническому испытанию. Экспериментально была обоснована иммуногенность используемых штаммов на модели септической инфекции кроликов (табл.1).

Дефицитность штамма 1986 по белку A подтверждена в реакциях диффузии в геле и пассивной гемагглютинации в сравнении с эталонным дефицитным по белку A штаммом S.aures Wood-46. Для проведения реакции диффузии в геле получали гипериммунные антимикробные кроличьи сыворотки к штаммам 1986 и Wood-46 и ставили реакцию против очищенного протеина A. Сыворотки к штамму 1986 не взаимодействовали с протеином A. Сыворотки к штамму Wood-46 образовали слабые проципитаты.

В реакции пассивной гемагглютинации эритроцитарный диагностикум приготовленный на основе антигенов из штамма 1986 получен более специфический ответ в сравнении с таковым при использовании антигенов из штамма Wood-46 (табл.2).

В доклинических испытаниях было также установлено, что протективная активность бесклеточной антистафилококковой вакцины была существенно выше протективной активности антифагина (табл.3).

Роль термолябильных антигенов в создании протективной активности бесклеточной стафилококковой вакцины выявлена в экспериментальных исследованиях и представлена в табл. 4.

Клиническая эффективность бесклеточной антистафилококковой вакцины показана в контролируемых государственных испытаниях на примере хронических пиодермий на базе центрального кожно-венерологического института РАМН и дерматологического отделения городской клинической больницы N 4 им. В.Г.Короленко. Исследование проведено на 3-х группах больных: 1 - больные хроническими пиодермиями, получали иммунотерапию бесклеточной антистафилококковой вакциной; 2 - иммунотерапию проводили коммерческим препаратом - антифагином и 3 - больные получали традиционное лечение без иммунотерапии.

Результаты испытания показали, что иммунотерапия бесклеточной антистафилококковой вакциной обусловила клиническое выздоровление и ремиссию от одного до 3-х лет у 72% больных, в то время как лечение антифагином обусловило аналогичный эффект у 23% больных, традиционное лечение - 21% больных (табл. 5 и 6).

Бесклеточная антистафилококковая вакцина хорошо переносилась больными. Общие и местные реакции были зарегистрированы у небольшого числа лиц, в основном, после 1 и 2 прививки. Через 24 часа после вакцинации реакции отмечены только у 3-х больных. Вакцина в отличие от антифагина и традиционного лечения стимулировала существенное повышение специфических антител (табл.7).

Резюмируя полученные результаты, можно констатировать, что бесклеточная антистафилококковая вакцина, разработанная в НИИВС им. И.И.Мечникова, оказалась высокоэффективным и малореактогенным препаратов. По своей эффективности она в 3 раза превосходила коммерческий препарат антифагина. Комитет по медицинским и иммунобиологическим препаратам рассмотрел результаты и рекомендовал вакцину для внедрения в практику (решение КМИП от 23 февраля 1994 г. ).

Изобретение относится к медицине, а именно к вакцинным препаратам, и касается бесклеточной антистафилококковой вакцины для лечения хронической стафилококковой инфекции. Задача изобретения заключается в создании вакцины, состоящей из комплекса термолабильных и термостабильных антигенов, обеспечивающих высокую протективную активность препарата. Сущность изобретения заключается в разработке препарата, представляющего бесклеточную антистофилококковую вакцину, включающую термолабильные и термостабильные антигены белковополисахаридной природы из клеточной стенки S.aureus штаммов N 1991, 1986, характеризующихся иммуногенностью ЕД₅₀ = 20 - 100 млн. Микробных клеток, вирулентностью ЛД₅₀ = 0,5 - 2,0 млрд. Микробных клеток, низким содержанием белка А и слабой аллергенной активностью. Преимущественно изобретения заключается в создании высокоэффективной и малореактогенной вакцины. 7 табл.

Бесклеточная антистафилококковая вакцина для лечения и профилактики хронической стафилококковой инфекции, отличающаяся тем, что содержит термолабильные и термостабильные антигены белковополисахариной природы из клеточной стенки S. aureus штаммов N 1991, 1986, характеризующихся иммуногенностью ЕД₅₀= 20-100 млн/ микробных клеток, вирулентностью ЛД₅₀ 0,5-20 млрд. микробных клеток, низким содержанием белка А и слабой аллергенной активностью.