Штамм бактерий SтарнYLососсUS aUReUS, используемый для изготовления стафилококковых диагностикумов Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 A61K39/85 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов, предназначенных для детекции антител к антигенам микробной клетки.

Цель изобретения - новый штамм Staphylococcus aureus ( 1986, не содержащий протеин А и тем самым повышающий специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции.

Штамм S. aureus tf .1986 выделен от больного хронической пневмонией и депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских оиологических препа- ратоь им. Л.А.Тарасевича под № 182.

Штамм S.aureus ГИСК № 182 имеет следующие морфологические и культу- ральные свойства: при выращивании на мясопептонном агаре образует непрозрачные, желтоватого цвета коло- нии с ровными краями, размером 2 - 4 мм в диаметре, окрашивается положительно по Граму. Штамм обладает ксагулазьой и гемолитической активное 1ью, ферментирует маннитв аэробных и анаэробных условиях, обладает опьеобразугощим фактором, леци- TOBI чазной активностью. Чувствисд

00

со

3

телен к левомицину, мономицину, нфомицину, канамицину.

Биологические свойства. Штамм вирулентен для белых мышей. При внут рибрюшинном введении мышам массой 12-14 г в 0,4%-ном агаре LD5( его составляет 18-10 + 6-Ю7 млрд, микробных клеток. Штамм иммуногенен, обладает слабой аллергенной актив- ностью.

Отличительной особенностью штамма является то, что он не содержит одного из антигенов клеточной стенки стафилококка-протеина А.

Изобретение иллюстрируется еле - дующими примерами.

Пример 1. Определение активности протеина А в штамме производят в реакции диффузии в геле в сравне- нии с другими штаммами S.aureus. Для этого получают гипериммунные антимикробные кроличьи сыворотки к штаммам № 1986, Wood-46 и другим штаммам S.aureus и ставят реакцию против очищенного протеина А. Сыворотки к штамму № 1986 не взаимодействуют с протеином А, сыворотки к штамму food-46 образуют слабые преципитаты,

с сыворотками к другим штаммам ста

филококка, например №К° 1991 и 5 реакция выражена очень сильно. Возможно определение в сыворотках антител к протеину Айв других серологических реакциях, например, в ИФА иммуно- ферментном анализе (ИФА)„

Пример 2. Штамм S. aureus ГИСК № 182 использован для получения антигенных препаратов наряду со

Штаммом Wood-46.

„

Используя методику, предусматривающую депротеинизацию препаратов, из биомассы обоих штаммов выделяют капсульные полисахариды (ПС) и тейкоевые кислоты клеточной стенки (ТК).

45

Выход ТК из биомассы обоих штаммов одинаков (70 мг из 50 г сырой микроб- Ной массы), выход ПС из штамма ГИСК № 182 выше, чем аналогичного препарата из штамма Wood-46 (350 мг против 200 мг).50

Использование выделенных препаратов в ракетном электрофорезе показало, что активность кроличьих сывороток V штамму 1986 (ГИСК № 182) в отношении ТК и ПС обоих штаммов в 4-8 раз выше, чем сывороток к штамму Wood-46 (ана- пиз проводят по величине пиков, образованных преципитатами).

г

п 5

0

5

0

5

0

904

Выделенные антигенные препараты используют в реакции торможения им- муноферментного анализа (ИФА). Результаты ингибирования показывают, ч что 50%-ное торможение ИФА (в системе с ТК) вызывают ТК Wood-46 в концентрации 0,6 мкг/мл, а ТК из штамма ГИСК 182 в концентрации 0,07 мкг/мл. Аналогичное торможение ИФА (в системе с ПС) вызывают ПС Wood-46 в концентрации 0,3 мкг/мл, а ПС штамма ГИСК № 182 - в концентрации 0,015 мкг/мл. Полученные данные свидетельствуют

0том, что антигенные препараты, выделенные из штамма ГИСК № 182, обладают более высокой специфической серологической активностью.

Пример 3. Получение эритро- цитарного диагностикума. Штамм Stap- hylococcus aureus ГИСК № 182 выращивают в матрацах на плотной среде из триптического гидролизата казеина. 18-20-часовую культуру смывают дистиллированной водой, стандартизируют до содержания 40+.10 млрд, микробных клеток в 1 мл и прибавляют солянокислый гидроксиламин из расчета 0,05 мг на

1млрд. клеток. Ставят в термостат при 37 С на 2 сут при помешивании 4-5 раз в 1 сут.Затем лизат центрифугируют, центрифугат подвергают диализу против дистиллированной воды с 6-кратной сменой, затем разливают во флаконы и подвергают лиофильному высушиванию из замороженного состояния. Сухим антигеном сенсибилизируют тан- низированные формалинизированные эритроциты из расчета 10 мг антигена на 100 мл 5% эритроцитов. Готовый диаг- ностикум разводят до 2,5% содержания эритроцитов.

Эритроцитарный диагностикум использован в реакции пассивной гемагглюти- нации (РПГА) для определения стафилококковых антител в сыворотках вакцинированных кроликов и коров.

В табл. 1 и 2 представлены данные сравнительного изучения специфической активности диагностикумов из штаммов Wood-46 и ГИСК №182.

Из данных табл. 1 и 2 видно, что в случае титрования сывороток крови после введения физиологического раствора животным (коровы, кролики) или до введения вакцины с диагностикумом из штамма Wood-46 имели место существенно более высокие титры антител по

сравнению с диагностикумом из штамма ГИСК № 182.

Полученные результаты свидетельств вуют о том, что более специфические результаты получены при использовании диагностикума на основе штамма ГИСК № 182.

1

1578190

Формула изобретения

Штамм бактерий Staphylococcus aureus ГИСК № 182, используемый для изготовления стафилококковых диаг- ностикумов.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления диагностических тест-систем, предназначенных для тестирования антител к антигенам микробной клетки стафилококка. Целью изобретения является новый штамм STAPHY-LOCOCCUS AUREUS N 1986, не содержащий протеин А и тем самым повышающий специфичность и чувствительность препаратов для диагностики стафилококковой инфекции. Штамм ST.AUREUS N 1986 депонирован в коллекции ГНИИСК им.Л.А.Тарасевича под номером 182. При иммунохимическом сравнительном изучении сывороток, полученных к данному штамму и к известному А-дефицитному штамму ST.AUREUS WOOD - 46, только в последних выявлены в небольшом количестве антитела к протеину А. Приготовленные на основе штамма эритроцитарные диагностикумы и тест-системы отличаются большей специфичностью, чем аналогичные препараты, приготовленные из штамма WOOD-46. 2 табл.

Примечание,

1 - срок забора крови до иммунизации, 2 - после иммунизации кроликов стафилококковой вакциной.

758 781 792 794 793 796 561

Таблица 1

Таблица 2

320 320 320 320 320 640 20

15781908

Продолжение табл.2

римечание. 1 - забор крови до иммунизации,

2 - забор крови после иммунизации (при этом коровы привиты стафилококковой вакциной, кролики - клеб- сиеллеэной вакциной).