СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ ИНТЕРФЕРОНА В МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ Российский патент 1998 года по МПК A61K38/21 G01N33/15 

Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способа определения противовирусной активности интерферона (ИФН) в мягких лекарственных формах, изготовленных на гидрофобных основах.

Известен способ содержания интерферона в мази, включающий обработку ее липазой с последующим определением активности интерферона путем выявления противовирусной активности на клеточных культурах (Гребенюк В.Н и др. Испытание безвредности реактогенности и лечебной эффективности мази, содержащей свиной лейкоцитарный интерферон. Антибиотики N 3, 1981, с.145-149).

Недостатками данного способа являются низкая точность и высокая стоимость определения содержания интерферона.

Наиболее близким аналогом к предлагаемому решению является способ определения содержания интерферона в мягких лекарственных формах, включающий экстрагирование интерферона дистиллированной водой и определение его противовирусной активности в водной фазе (Авторское свидетельство СССР N 1789217, кл.A 61 K 37/66, 1993).

Недостатками известного способа являются использование его только в гидрофильных основах и малый процент выхода противовирусной активности интерферона из мягких лекарственных форм, изготовленных на гидрофобных основах.

Задачей предлагаемого решения является извлечение противовирусной активности интерферона из мягких лекарственных форм, а именно свечей, содержащих очищенный, концентрированный интерферон, и решается растворением гексаном гидрофобных основ при pH 7,0 с последующим экстрагированием интерферона 0,9%-ным раствором натрия хлорида в течение 3 ч.

Технический результат заключается в определении противовирусной активности интерферона в мягких лекарственных формах, изготовленных на гидрофобных основах, с высокой точностью.

Существенные признаки, характеризующие изобретение, заключаются в следующем. Ограничительные признаки: выделение интерферона и контроль его активности в водной фазе. Отличительные признаки: интерферон из лекарственной формы экстрагируют в течение 3 ч в гексане с добавлением 0,9%-ного раствора натрия хлорида с pH 7,0.

Из изученного широкого ряда растворителей (эфир, хлороформ, среда 199, дистиллированная вода и т.д.) только гексан при температуре 15 ± 5^oC способен растворить гидрофобную основу, содержащую интерферон, что обеспечивает максимальный выход (100%) противовирусной активности интерферона в водную фракцию.

Экстрагирование проводят в течение 3 ч с помощью 0,9%-ного раствора хлорида натрия с pH 7,0 до полного извлечения противовирусной активности ИФН из гидрофобной основы в водную фракцию.

Существо способа заключается в том, что к мягкой лекарственной форме, изготовленной на гидрофобной основе и содержащей интерферон (мазь, свечи, пессарии и др.), добавляют гексан и после полного растворения основы добавляют 0,9%-ный раствор хлорида натрия (NaCl). Затем после 3 ч экстрагирования водную фазу собирают, проверяют на стерильность и определяют активность интерферона.

Опыты проводились с использованием свечей с человеческим лейкоцитарным интерфероном (ЧЛИ) с противовирусной активностью 20000, 40000, 50000, 100000 МЕ в свече при комнатной температуре.

В качестве наполнителей использована основа из твердого кондитерского жира с эмульгатором Т-2.

Способ поясняется следующим примером.

Было изготовлено по 10 серий препарата с исходным содержанием интерферона 20000, 40000, 50000, 100000 МЕ в свече.

Каждую свечу помещали во флакон, прибавляли 3 мл гексана и встряхивали до полного растворения гидрофобной основы. После растворения во флакон добавляли 9 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида с определенным значением pH и экстрагировали ИФН в водную фазу при периодическом взбалтывании в течение 3 ч. После окончания экстрагирования снимали верхний жировой слой, собирали водную фазу, которую центрифугировали и стерилизовали, а затем определяли содержание (титры) интерферона. Результаты определения приведены в таблице 1.

Исследования велись по трем направлениям: влияние природы растворителя, времени экстрагирования, pH экстрагирующего раствора на выход активности ИФН.

Результаты представлены в таблице 2, 3.

Из полученных результатов следует, что полное высвобождение ИФН из свечи (100%) было достигнуто в опыте со следующими условиями: растворитель - гексан, экстрагирующий раствор - 0,9%-ный раствор натрия хлорида с pH 7,0, время экстрагирования - 3 ч.

Изобретение относится к медицине. Проводят растворение лекарственной формы в гексане и осуществляют экстракцию его в течение 3 ч 0,9%-ным раствором NaСl при рН 7,0. Способ позволяет определять активность интерферона в гидрофобных основах с высокой точностью. 3 табл.

Способ определения противовирусной активности интерферона в мягких лекарственных формах, включающий его выделение и контроль его активности в водной фазе, отличающийся тем, что интерферон из лекарственной формы экстрагируют в течение 3 ч в гексане с добавлением 0,9%-ного раствора натрия хлорида с pH 7,0.