СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ СЫВОРОТКИ КРОВИ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/16 A61K39/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к способам концентрирования антител в сыворотке крови животных.

Известен способ получения аллогенной иммунной сыворотки крови свиней (АИСС) путем свертывания и отстаивания крови до осаждения сгустка, отделения сгустка крови, осветления сыворотки центрифугированием, стерилизующей фильтрации (Аллогенная иммунная сыворотка свиней: Технические условия 46-12-1452-83; Утвержд. МСХ СССР, М. , МСХ СССР, 1983, с. 3) Однако АИСС имеет невысокое содержание специфических антител к патогенной микрофлоре конкретной свинофермы и невысокую биологическую активность.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что для повышения биологической активности сыворотки и увеличения степени концентрирования антител в единице объема сыворотки крови при получении сыворотки из крови убойных свиней путем свертывания и отстаивания крови до осаждения сгустка, отделения сгустка крови, осветления сыворотки центрифугированием и стерилизующей фильтрации, сыворотку дополнительно подвергают медленному замораживанию со скоростью 1-10^oC/ч в течение 3-24 часов и оттаиванию при комнатной температуре 18-20^o, достигая увеличения концентрации антител в 2 раза, а при повторном замораживании и оттаивании в 4-6 раз.

Предлагаемый способ получения концентрированной сыворотки крови (КСК) позволяет в 2 раза увеличить концентрацию специфических антител в патогенной микрофлоре конкретного свинарника и повысить биологическую активность препарата.

Предлагаемое изобретение осуществляется следующим образом.

Кровь получают при убое клинически здоровых взрослых свиней, специально отобранных и подвергнутых клиническому осмотру с обязательной термометрией. Кровь поступает в банки из нержавеющей стали, после чего кровь свертывают, удаляют сгусток, центрифугируют сыворотку, консервируют 5%-ным раствором фенола до 0,5% концентрации, затем подготовленную таким образом сыворотку помещают в пластиковой посуде в рефрижератор и подвергают медленному замораживанию со скоростью 1-10^oC/ч в течение 3-24 часов и оттаиванию при комнатной температуре 18-20^oC. Степень концентрации контролируют рефрактометрически по общему белку. Уровень концентрации зависит от времени оттаивания. Первые порции сыворотки наиболее концентрированные, по мере оттаивания кристаллов льда концентрации постепенно уменьшается.

Пример 1.

100 мл приготовленной сыворотки крови в пластмассовой посуде поместили в рефрижератор и подвергали замораживанию при скорости охлаждения 10^oC/ч в течение 3 ч до температуры - 4-6^oC. Сосуд с замороженной сывороткой вынули и в перевернутом состоянии подвергали размораживанию до половины первоначального объема сыворотки /до 50 мл/. При помощи рефрактометра определяли общий белок, при помощи электрофореза в геле агарозы определили количество антител в концентрате и с помощью реакции агглютинации определили максимальный титр антител к штаммам E coli, выделенных от животных данной свинофермы. В концентрате установлено содержание антител 24,4 г/л и титр агглютинирующих антител в (PA) 1:50. В исходной сыворотке содержалось антител - 22,2 г/л и титр агглютинирующих антител 1:50 (табл.).

Пример 2.

100 мл сыворотки крови в пластмассовой посуде поместили в рефрижератор и подвергли замораживанию со скоростью охлаждения 5^oC/ч в течение 5 часов до температуры - 4-6^oC. Затем сосуд с сывороткой вынули и в перевернутом состоянии подвергли размораживанию при комнатной температуре до половины первоначального объема /до 50 мл/. При помощи электрофореза в геле агарозы определили количество антител в концентрате и с помощью реакции агглютинации определили максимальный титр антител к штаммам E coli, выделенных от животных данной свинофермы. Содержание антител в концентрате 31,1 г/л; а в исходной сыворотке - 22,2 г/л и титр агглютинирующих антител 1:200 в концентрате и 1: 50 - в исходной сыворотке (табл.).

Пример 3.

100 мл сыворотки крови пластмассовой посуде поместили в рефрижератор и подвергли замораживанию при скорости охлаждения 1^oC в час в течение 24 часов до температуры - 4-6^oC. Затем сосуд в перевернутом виде разморозили при комнатной температуре до половины первоначального объема (до 50 мл). Установлено, что в КСК содержание антител 46,6 г/л титр, агглютинирующих антител /агглютинации/ 1: 800. В исходной сыворотке крови содержалось антител 22,2 г/л и титр агглютинирующих антител к E coli; 1:50 (табл.).

Из таблицы видно, что на степень концентрации антител в сыворотке крови влияет режим охлаждения. Минимальная степень концентрации в 1,1 раза достигается при скорости 10^oC/ч, максимальная в 2,1 раза при скорости 1^oC/ч.

Чем медленнее процесс охлаждения исходной сыворотки, тем крупнее в ней образуются кристаллы льда, между которыми располагаются компоненты сыворотки. При размораживании сыворотки эти компоненты стекают первыми, обеспечивая повышение концентрации антител в препарате, причем первые порции препарата, наиболее концентрированные, постепенно разбавляются водой по мере дальнейшего оттаивания. Быстрое замораживание (10^oC/ч за 3 часа) приводит к образованию мелких кристаллов льда, препятствующих стеканию компонентов, включая антитела.

Предлагаемый способ получения концентрированной сыворотки крови путем свертывания, отстаивания крови до осаждения сгустка, отделения сгустка крови, осветления сыворотки крови центрифугированием с последующим медленным замораживанием со скоростью 1-10^oC в час в течение 3-24 часов и оттаиванием при комнатной температуре и стерилизующей фильтрации повышает степень концентрирования специфических антител в 2,1 раз, увеличивает биологическую активность препарата.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и предназначено для концентрирования антител в сыворотке крови животных. Способ получения концентрированной сыворотки крови включает свертывание и отстаивание крови до осаждения сгустка, отделение сгустка, осветление сыворотки центрифугированием, медленное замораживание со скоростью охлаждения 1-10^oС/ч в течение 3-24 ч с последующим оттаиванием при комнатной температуре и стерилизующую фильтрацию. Способ повышает биологическую активность сыворотки, увеличивает в 2 раза концентрацию специфических антител. 1 табл.

Способ получения концентрированной сыворотки крови путем свертывания и отстаивания крови, отделения сгустка, осветления и стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что после осветления сыворотку подвергают медленному замораживанию со скоростью 1 - 10^oС/ч в течение 3 - 24 ч с последующим оттаиванием при комнатной температуре.