СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХОЛАНГИТА, ВЫЗВАННОГО УРАЗОПРОДУЦИРУЮЩИМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/62 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления холангита, вызванного уреазопродуцирующими микроорганизмами.

Известен способ диагностики холангита путем биохимического исследования желчи. Новым в способе является то, что определяют активность каталазы в желчи и при ее уровне более 3,5 мкмоль/мл-мин диагностируют холангит (Положительное решение о выдаче патента от 26.08.97 г. по заявке N 95116612/14).

К недостаткам способа следует отнести его недостаточно высокую специфичность, что не позволяет определить этиологическую природу воспалительного процесса в желчных путях.

Изобретение направлено на решение задачи повышения специфичности диагностики - выявление холангитов, вызываемых микроорганизмами, продуцирующими уреазу.

Указанная задача решается путем исследования содержания мочевины в параллельных образцах сыворотки крови и желчи. При снижении концентрации мочевины в желчи более чем на 10% от ее исходного уровня в сыворотке крови диагностируют холангит, вызванный микроорганизмами, продуцирующими уреазу.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого пациента, с наружным дренированием желчных путей, параллельно берут кровь и желчь, оттекающую по дренажу. Для исследования достаточно небольшого объема биологического материала (0,5 мл). Кровь и желчь помещают на 3 часа в термостат с температурой 37^oC. После инкубации проводят исследование концентрации мочевины унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом, модифицированном нами для определения мочевины в желчи.

Реактивы:
1. 10%-ный альбумин, готовят из сухого альбумина;
2. 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ);
3. 10%-ный р-р серной кислоты (H₂SO₄)
4. реактив ДАМ, содержащий диацетилмонооксим, из набора реактивов набора "Urea-450" производства фирмы LaChema
5. эталон мочевины из набора реактивов набора "Urea-450" производства фирмы LaChema
Расчет концентрации мочевины в крови и желчи проводится по формуле:
С опыт = (E опыт : E эталон) • С эталон
где С - концентрация мочевины в ммоль/л,
E - оптические плотности растворов.

Учитывая, что коэффициент воспроизводимости данного метода составляет 5%, холангит диагностируют при снижении концентрации мочевины в желчи более чем на 10% от исходной ее концентрации в сыворотке крови.

Например, содержание мочевины в желчи 5,78 ммоль/л, а в сыворотке крови 6,99 ммоль/л. Разница составляет 6,99-5,78= 1,21 ммоль/л, что составляет 17,31% от 6,99 [расчет = 1,21 • 100/6,99], т. е. различие не является случайным (см. таблицу).

Примеры конкретного выполнения:
Пример 1. Больной Ш., 38 лет, история болезни N 10241. Диагноз: желчнокаменная болезнь, хронический калькулезный холецистит, холедохолитиаз. Стеноз большого дуоденального соска III степени. Гнойный холангит. Механическая желтуха. Вторичный билиарный гепатит. Хронический панкреатит. Госпитализирован в экстренном порядке с жалобами на слабость, повышение температуры тела до 38^oC, умеренные боли в правом подреберье. При поступлении состояние средней тяжести. Склеры субиктеричны. Лейкоцитоз 9,8•10⁹/литр. В биохимическом анализе крови: белок 80 г/л; общий билирубин 39,6, связанный - 29,4, свободный - 10,2 мкмоль/л. При ультразвуковом обследовании желчный пузырь размером 4 х 3 х 3 см, стенки утолщены, содержит камни; холедох диаметром 1,4 см, в нем визуализируются конкременты; отмечено увеличение в размерах головки поджелудочной железы. Заключение по данным УЗИ: калькулезный холецистит, холедохолитиаз, хронический панкреатит. Выполнить эндоскопическую папиллотомию не удалось в связи с наличием парафатериального дивертикула. После проведения предоперационной подготовки больной оперирован в экстренном порядке. Произведена холецистэктомия, холедохолитотомия, супрадуоденальная холедоходуоденостомия, дренирование холедоха. Во время операции активность каталазы в желчи повышена - 73 мкмоль/мин•мл, что позволило диагностировать холангит. При этом концентрация мочевины в сыворотке крови 9,18 ммоль/л, в желчи - 7,51 ммоль/л, что составило 18,2% от ее содержания в крови. Полученные данные позволили определить этиологическую природу воспаления - инфицирование уреазопродуцирующими микроорганизмами и назначить этиотропную антибактериальную терапию. Результат подтвержден при бактериологическом исследовании - из желчи выделен Proteus mirabilis 10⁸ микробных тел/мл. При исследовании на 12 сутки после операции активность каталазы в желчи нормализовалась до 1,24 мкмоль/мл-мин, концентрация мочевины в крови составила 7,94 ммоль/л; в желчи - 7,87 ммоль/л, при этом различие 0,88%, что не является достоверным, следовательно, воспалительного процесса в желчных путях нет. Выздоровление.

Пример 2. Больная В., 72 года, история болезни N 12064. Госпитализирована в экстренном порядке через 3 суток от появления болей в правом подреберье. Состояние тяжелое, обусловленное эндогенной интоксикацией. Кожные покровы желтушны. Язык сухой, живот умеренно вздут, резко болезненный по правому фланку, где определяются положительные симптомы раздражения брюшины. В биохимическом анализе крови: белок 67,2 г/л; мочевина 10,4 ммоль/л; общий билирубин 104,7 , связанный - 57,2, свободный - 47,5 мкмоль/л. Оперирована в экстренном порядке. Произведена холецистэктомия, холедохолитотомия, дренирование холедоха и брюшной полости. В желчном пузыре и холедохе обнаружены камни пигментного типа. Диагноз после операции: желчнокаменная болезнь, острый гангренозный, калькулезный холецистит, холедохолитиаз. Холангит. Ограниченный фибринозно-гнойный перитонит. Активность каталазы в желчи 12,54 мкмоль/мл-мин, что подтверждает наличие холангита. При бактериологическом исследовании желчи обнаружены Bacteroides melaninogenicus и Sts. faecalis 10⁹ микробных тел/мл. Данные микроорганизмы не продуцируют желчь, поэтому тест на уреазную активность был отрицательным, при этом мочевина в сыворотке крови - 10,4 ммоль/л, в желчи 10,18 ммоль/л, различие между ними 2,1%, что не является достоверным.

Проводилась инфузионная, антибактериальная терапия, эндохоледохеальное лазерное облучение. Дренаж холедоха удален на 12 сутки. Выписана в удовлетворительном состоянии.

Пример 3. Больная Т., 58 лет, история болезни N 10017. Диагноз: желчнокаменная болезнь, обострение хронического калькулезного холецистита, рубцовый стеноз большого дуоденального соска III степени. Хронический гепатит. Сахарный диабет II типа. Ожирение III степени. Бронхиальная астма, гормональнозависимая. Госпитализирована в экстренном порядке с приступом "печеночной колики". При поступлении состояние средней тяжести. Язык влажный. Живот увеличен в размерах за счет подкожножирового слоя, мягкий, болезненный в правом подреберье, где пальпируется увеличенный желчный пузырь. Больной проведена инфузионная терапия, введены спазмолитики. Через 4 часа в связи с сохраняющимся болевым синдромом больной выполнена лапароскопия, произведено чрезпеченочное дренирование желчного пузыря. На фистульной холецистохолангиографии - желчный пузырь содержит множество мелких конкрементов, холедох до 1,0 см в диаметре, контраст в двенадцатиперстную кишку не поступает. После дополнительного обследования и проведения предоперационной подготовки больная оперирована на 7 сутки от поступления. Произведена холецистэктомия, трансдуоденальная папиллосфинктеропластика, дренирование холедоха. Активность каталазы в желчи составила 6,65 мкмоль/мл-мин, что позволило установить диагноз холангит. При этом уменьшения содержания мочевины не выявлено ни в исходной желчи ни после ее инкубации в термостате (мочевина в крови - 7,89 ммоль/л, в желчи 8,01 ммоль/л, различие в пределах ошибки метода).

При бактериологическом исследовании в желчи обнаружена Pseudomonas aeruginosa 10⁵микробных тел/мл., - микроорганизм, который не продуцирует уреазу.

Послеоперационный период протекал тяжело, на 8 сутки послеоперационного периода состояние ухудшилось, усилились боли в правом подреберье, увеличилась температура до 38^oC. По холедохостоме оттекание светлой желчи, до 80 мл в сутки. Активность каталазы в желчи составила 9,31 мкмоль/мл-мин, что свидетельствовало о наличии воспалительного процесса в желчных путях. Концентрация мочевины в крови - 6,53 ммоль/л, в желчи - 5,87 ммоль/л, различие достоверно и составило 10,1%. Заподозрено инфицирование желчных путей уразопродуцирующим штаммами микроорганизмов. Произведена коррекция антибактериальной терапии, назначен цефоперазон - препарат, обладающий активностью в отношении микроорганизмов, продуцирующих уреазу. При бактериологическом исследовании обнаружен рост Citrobacter 10⁷ микробных тел/мл, чувствительный к цефоперазону. В дальнейшем состояние улучшилось. При лабораторном исследовании активность каталазы в желчи снизилась до 2,56 мкмоль/мл-мин, концентрация мочевины в сыворотке крови 6,54 ммоль/л, а в желчи 6,6 ммоль/л (различие не являлось достоверным), т.е. холангита нет. При бактериологическом исследовании роста микроорганизмов не обнаружено. Дренаж холедоха удален на 17 сутки.

Данные наблюдения свидетельствуют о том, что при инфицировании желчных путей микроорганизмами, продуцирующими уреазу, происходит снижении концентрации мочевины в желчи по отношению к ее уровню в сыворотке крови. Это свидетельствует о специфичности метода, позволяющего установить этиологическую природу холангита.

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в лабораторной диагностике для выявления холангита. Исследуют содержание мочевины в параллельных образцах сыворотки крови и желчи. При снижении концентрации мочевины в желчи более чем на 10% от ее исходного уровня в сыворотке крови диагностируют холангит, вызванный микроорганизмами, продуцирующими уреазу. Способ повышает специфичность диагностики. 1 табл.

Способ диагностики холангита, вызванного уреазопродуцирующими микроорганизмами, путем биохимического анализа желчи, отличающийся тем, что в параллельных образцах сыворотки крови и желчи исследуют содержание мочевины и при снижении ее уровня в желчи более чем на 10% по сравнению с исходной концентрацией в крови диагностируют холангит.