СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БИЛИКУЛЬТУР К БЕТА-ЛАКТАМНЫМ АНТИБИОТИКАМ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения чувствительности биликультур к бета-лактамным антибиотикам для проведения этиотропной антибактериальной терапии при воспалительных заболеваниях билиарной системы.

Высокая частота встречаемости бактериохолии обусловила широкое применение антимикробных препаратов, среди которых преобладают бета-лактамные антибиотики, при воспалительных заболеваниях желчных путей с профилактической и лечебной целями. В настоящее время доминирует эмпирический подход к использованию антибиотиков. Однако, даже назначение современных препаратов широкого спектра не обеспечивает эффективности во всех случаях в связи с высокой частотой встречаемости полирезистентных штаммов.

Наиболее обоснованным является этиотропное применение антибиотика на основании оценки чувствительности к нему культур микроорганизмов. Необходимо также учитывать влияние желчи на активность антимикробных препаратов.

Известен способ определения чувствительности биликультур к антибиотикам в присутствии желчи (Веселов А.Я. Изменение чувствительности микробов к антибиотикам под влиянием желчи \\ Хирургия.-1985.-N 8.-С.66-67). Основным недостатком прототипа является его длительность (5-7 суток), что существенно ограничивает возможности использования полученных результатов в практической деятельности, особенно при ургентных состояниях.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощения и ускорения способа определения чувствительности биликультур к β-лактамным антибиотикам.

Решение данной задачи достигается тем, что для определения чувствительности микроорганизмов желчи к бета-лактамным антибиотикам оценивают изменение оптической плотности растворов в диапазоне 230-242 нм после совместного инкубирования образцов желчи больного с исследуемыми бета-лактамными антибиотиками при температурных режимах 0^oC и 37^oC в течение 3-5 часов. При снижении оптической плотности пробы, инкубированной в термостате, на любом участке исследованного диапазона длин волн менее чем на 0,08 ед. оптической плотности устанавливают чувствительность биликультур к бета-лактамному антибиотику.

Новизна способа заключается в том, что у больного во время хирургического вмешательства или при дренировании желчных путей в послеоперационном периоде забирают желчь, в которой спектрофотометрическим методом при различных температурных режимах инкубации определяют активность бета- лактамаз микроорганизмов в отношении конкретного бета-лактамного антибиотика.

Методика осуществления способа представлена в конце текста.

Пример 1. Больная Е., 63 года, история болезни N 10339. Госпитализирована в экстренном порядке через трое суток от появления болей в животе. При поступлении - состояние средней тяжести, живот мягкий, болезненный в правом подреберье, желчный пузырь не пальпируется. Температура тела 38,3^oC, лейкоцитоз 10,2 • 10⁹/л. Оперирована в экстренном порядке через три часа от поступления в связи с неэффективностью консервативной терапии. Во время операции обнаружен флегмонозно-измененный желчный пузырь. Произведена холецистэктомия, дренирование брюшной полости.

После инкубации пузырной желчи с пенициллином, карбенициллином и цефазолином обнаружили снижение оптической плотности растворов, находящихся в термостате, более чем на 0,08 ед. оптической плотности в исследованном диапазоне длин волн. После инкубации с ампициллином и цефоперазоном снижение оптической плотности проб, находящихся в термостате, не превышало 0,08 ед. оптической плотности.

Больной назначен ампициллин 1,0 через 6 часов внутримышечно.

При бактериологическом исследовании желчи обнаружили рост Е. coli, чувствительной к ампициллину и цефоперазону и резистентной к пенициллину, карбенициллину и цефазолину.

Послеоперационное течение гладкое, выписана на 10-е сутки после операции.

Пример 2. Больная П., 58 лет, история болезни N 12680. Госпитализирована в экстренном порядке через 10 часов от появления болей в животе. При поступлении состояние удовлетворительное, температура тела 36,7^oC, лейкоцитоз 12,7 • 10⁹/л. Живот мягкий, болезненный в правом подреберье, желчный пузырь не пальпируется. Болевой синдром купирован введением спазмолитиков. При сонографическом исследовании обнаружены конкременты в желчном пузыре. Оперирована в отсроченном порядке. Выполнена лапаротомия по Кохеру, в брюшной полости выпота нет. Желчный пузырь увеличен в размерах, стенка его утолщена, сероза гиперемирована. Произведена холецистэктомия, дренирование брюшной полости. Диагноз после операции - острый флегмонозный калькулезный холецистит.

При исследовании пузырной желчи обнаружили снижение оптической плотности проб, инкубированных в термостате, в исследованном диапазоне длин волн менее чем на 0,08 ед. оптической плотности для аугментина и цефоперазона. Изменения оптической плотности растворов желчи с ампициллином, цефтриаксоном и цефазолином превышали 0,08 ед. оптической плотности.

Больной назначен аугментин 600 мг 3 раза в сутки внутримышечно.

При бактериологическом исследовании из желчи выделили Enterococcus faecalis, чувствительный к аугментину и Е. coli, чувствительную к аугментину и цефоперазону.

Послеоперационное течение гладкое. Выздоровление.

Пример 3. Больная P., 62 лет, история болезни N 12610. Диагноз: желчнокаменная болезнь, острый флегмонозный калькулезный холецистит, холедохолитиаз, механическая желтуха, ограниченный желчный перитонит.

Госпитализирована в экстренном порядке. При поступлении состояние тяжелое, температура тела 39,1^oC, кожные покровы желтушные. Живот болезненный в правом подреберье, где определяется умеренная мышечная ригидность. Лейкоцитоз 14,0 • 10⁹/л, общий билирубин - 134,3 мкмоль/л. Через 3 часа от поступления больной выполнена лапароскопия, чреспеченочное дренирование желчного пузыря. Через 18 часов после вмешательства выявлены признаки несостоятельности холецистостомы - по страховочному дренажу из брюшной полости поступает желчь. Оперирована в экстренном порядке. Произведена холецистэктомия, холедохолитотомия, дренирование холедоха и подпеченочного пространства.

Обнаружили снижение оптической плотности в исследованном диапазоне длин волн менее чем на 0,08 ед. оптической плотности после инкубации пузырной желчи с карбенициллином, цефуроксимом и цефтриаксоном.

Назначен карбенициллин 1,0 4 раза в сутки внутримышечно.

При бактериологическом исследовании обнаружили рост Е. coli, чувствительной к карбенициллину, цефуроксиму и цефтриаксону.

На 5-е сутки после операции больному выполнили фистульную холангиографию, на которой выявили рубцовый стеноз большого дуоденального сосочка 3 степени. Для коррекции нарушения оттока желчи больному произвели эндоскопическую папиллотомию. Через сутки после папиллотомии состояние больного ухудшилось, появились боли в правом подреберье, гипертермия до 39,0^oC. Холедохостома функционирует, по дренажу за сутки выделилось до 100,0 мл макроскопически неизмененной желчи. При биохимическом исследовании активность каталазы в желчи составила 9,84 мкмоль/мл-мин, что свидетельствовало о наличии острого воспалительного процесса в желчных путях.

Обнаружили снижение оптической плотности растворов желчи в исследованном диапазоне длин волн менее, чем на 0,08 ед. оптической плотности после инкубации с цефтриаксоном. Произведена коррекция антибактериальной терапии, назначен цефтриаксон 1,0 2 раза в сутки внутривенно. В динамике состояние больного улучшилось, температура нормализовалась на 3-и сутки после начала этиотропной терапии.

При бактериологическом исследовании из желчи выделили Citrobacter spp., чувствительный к цефтриаксону и ципрофлоксацину.

Дренаж холедоха удален на 14-е сутки после операции. Выздоровление.

Положительный эффект.

Предлагаемый способ определения чувствительности микроорганизмов в желчи к действию бета-лактамных антибиотиков значительно проще и быстрее классических методов исследования.

Факт чувствительности биликультур к бета-лактамным антибиотикам устанавливают в течение 3-5 часов после забора материала по сравнению с 5-7 сутками в случае определения антибиотикочувствительности традиционным способом.

Использование: в медицине, в частности в лабораторной диагностике, и обеспечивает ускорение и упрощение исследования при высокой точности определения чувствительности. Желчь больного смешивают с бета-лактамными антибиотиками, растворы инкубируют при t 0°C и 37°С в течение 3-5 ч, оценивают их оптическую плотность в диапазоне 230-242 нм и при снижении оптической плотности пробы, инкубированной в термостате менее чем на 0,08 ед. оптической плотности на любом участке исследованного диапазона длин волн определяют чувствительность биликультур к исследуемым антибиотикам. 1 табл.

Способ определения чувствительности биликультур к бета-лактамным антибиотикам путем исследования желчи, отличающийся тем, что смешивают желчь больного с бета-лактамными антибиотиками, растворы инкубируют при температуре 0 и 37^oС в течение 3 - 5 ч, оценивают их оптическую плотность в диапазоне 230 - 242 нм и при снижении оптической плотности пробы, инкубированный в термостате, менее чем на 0,08 единиц оптической плотности на любом участке исследованного диапазона длин волн определяют чувствительность биликультур к исследуемым бета-лактамным антибиотикам.