Способ определения мочевой кислоты Советский патент 1986 года по МПК G01N33/62 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов.

Цель изобретения - повьшение точности способа за счет проведения электролиза в растворе ферроцианида калия.

Способ осуществляется следующим

образом.

Предварительно изготавливают каталитическую мембрану путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг перокси дазы в О,1 мл раствора уриказы (2,4 мг/мл) в 0,1 М боратном бУФере рН 9,0, Смесь обрабатывают 0,01 мл 25%-ного глутарового альдегида и вьтивают на диализную мембрану площадью 3 см. Высушенную мембрану тол щиной 0,05 мм накладьшают на стек- лоуглеродный злектрод и прикрепляют резиновым кольцом.

В предлагаемом способе в качестве рабочего электрода используется стеклоуглерод, в качестве медиатора - ферроцианид калия.Электролиз проводится при нулевом потенциале относительно насьщенного Ag/AgCl электрода сравнения в 0,1 М боратном буфер- ном растворе в интервале рН 8,8-9,2. Изменение рН буферного раствора в этом интервале практически не влияет на ток электрода. Способ применим и в менее щелочной области, однако при переходе к менее щелочной среде уменшается каталитическая активность уриказы. Так, если при рН 8,8 и 0,145 мМ (2,4 мг %) мочевой кислоты ток ячейки равен 3,07 мкА/см, при рН 9,0 - 3,14 мкА/см2, рН 9,25 - 3,17 мкА/см, то при рН 8,0. он равен 2,71 мкА/см, рН 7,0 - 0,78 мкА/см. Таким образом, интервал рН 8,8 - 9,2 является оптимальным для действия системы.

Концентрация мочевой кислоты в исследуемых растворах определяется по данньм калибровочного графика (см. чертеж), построенного на использовании известных концентраций мочевой кислоты, поскольку при нулевом потенциале остаточный ток электрода практически отсутствует (как н чистых, так и в сложных биологи- ческих растворах).

Из графика видно, что зависимость величины стационарного тока от кон

центрации введенной мочевой кислоты линейна до 6 мг %.

Пример 1. При концентрации в ячейке мочевой кислоты 1 мг % (в 19„8 МП буфера вводится 0,2 мл 100 мг % мочевой кислоты) величина стационарного тока равна 1,25 мкА/с а при введении в буфер 0,2 мл исследуемого раствора (например, мочи 0,5 мкА/см. Высчитывается концентрация мочевой кислоты в ячейке.

1 мг % - i,25 мкА/см X1 2г5 мкА/см

X 0,4 мг %

Концентрация мочевой кислоты в исследуемом растворе будет равна 0,4 мг % X 100 (степень разбавления 40 мг %.

Пример 2. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови проводят с помощью стеклоуглеродного электрода, 0,0 В, при концентрации KJFe(CN)j. 1 мМ, 0,1 М боратный буфер-, рН 9,2, п 5. Степень раз- 1бавления сыворотки 50 раз.

В табл. 1 дана зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты

Таблиц

Концентрация мочевой кислоты в сыворотке,

мг %

Ток, нА/см

43

25 зо

40

86

129

25 зо

45

177

12

260

16

347

.Как следует из табл. 1 зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты описывается корреляционной прямой i (21., 74+0,44)х + (-0,22+4,12) с коэффициентом корреляции 0,9999. Следовательно, предложенный способ обладает высокой точностью - коэффициент вариации

при пятикратном определении мочевой кислоты не превышает 2,5%.

Для определения положительного эффекта используют коэффициент вариации, отражающий воспроизводимость и точность результатов:

V

S f 100 Т

где V - коэффициент вариации;

S - среднее квадратическое отклонение;

5с среднее, полученное при параллельном п-кратном измерении.

Чем меньше коэффициент вариации V, тем точнее метод определения.

Коэффициент вариации рассчитывают при п 5 (см. табл. 2). Сопоставление полученных результатов с изве- стными, которые приведены в табл.2, показывает, что точность определения мочевой кислоты предложенным способом почти в 2-4 раза превьппает точность определения известным способом (соответственно величины коэффициентов вариации 2,4 и 4% или 2,5 и 9%) Кроме того, известный способ не пригоден для определения мочевой кислоты в цельной крови.

Составитель Л. Шилина Редактор С. Патрушева Техред Г.Гербер Корректор А. Обручар

Заказ 3084/47 Тираж 778Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород,ул.Проектная, 4

Таблица 2

Формула изобретения

Способ определения мочевой кислоты путем электролиза в щелочном растворе, содержащем исследуемое вещество, с помощью уриказной мембраны с .последующим полярографическим изме- рением концентрации мочевой кислоты, . отличающий-с я тем, что, с целью пошлоения точности способа, электролиз проводят в растворе ферро- цианнда калия в концентрации не менее 1 мМ, а в урнказную ме 4брану дополнительно вводят пероксидазу.

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов. Цель изобретения- повьшение точности способа за счет проведения электролиза в раствор.е ферроцианида калия. Каталитическую мембрану изготавливают путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг перок- сидазы в 0,1 мл раствора уриказы в 0,1 М боратном буфере рН 9,0. Смесь обрабатывают 0,01 мл 25%-ного гпу- тарового альдегида и выпивают на диализную мембрану. Высушенную мембрану накладывают на стеклоуглерод- ный электрод и закрепляют. В качестве рабочего электрода используют стеклоуглерод, в качестве медиатора - ферроцианид калия. Электролиз проводится при нулевом потенщ1але в интервале рН 8,8 - 9,2. Концентрация мочевой кислоты определяется по данным графика. Из графика видно, что зависимость величины стационарного тока от концентрации мочевой кислоты линейна до 6 мл %. 1 ил, 2 табл. с S (Л 4 У, М С//см 2 ffв мочебая кислота, мг%