ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/17/ПЕРТ/95/29 (Н1N1) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ Российский патент 2000 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди взрослых живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/17/Перт/95/29 (H1N1).

Известный вакцинный штамм А/17/Техас/91/1/3 (H1N1) - прототип [1] - утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом, аналогичным вирусу гриппа А/Перт/13/95 (H1N1).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Перт/13/95 (H1N1).

Вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Перт/13/95 (H1N1) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) - донором аттенуации - с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/17/57 (H2N2). Донор аттенуации - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Ленинград/134/17/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин для взрослых [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки (РВ1, РВ2, PA, NP, М, NS) от донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и 2 гена, кодирующих поверхностные белки - НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) - от эпидемического вируса А/Перт/13/95 (H1N1). Гемагглютинин в РТГА идентичен вирусу А/Перт/13/95 (H1N1), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 40^oC составляет 8.0 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 25^oC - 3.5 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Перт/13/95 (H1N1), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика штамма
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 34^oC в течение 48 ч - 8,0 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:256.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Сведения о вакцинном штамме А/17/Перт/95/29 (H1N1) приведены ниже в паспорте.

Паспорт штамма
1. Название штамма - А/17/Перт/95/29 (H1N1).

2. Серия - серия 1.

3. Метод получения и характеристика родительских вирусов при представлении рекомбинантного штамма: рекомбинация
а) эпидемический вирус - А/Перт/13/95 (H1N1);
б) донор аттенуации - А/Ленинград/134/17/57 (H2N2).

4. Количество пассажей - 5 в процессе рекомбинации.

5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а) оптимальные условия репродукции - 34^oC, 48 ч;
б) гемагглютинирующая активность - 1:256;
в) инфекционная активность - 8.0 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл;
г) чувствительность к ингибиторам - ингибиторочувствительный;
д) разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 40^oC - 8.0 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл;
е) разность в показателях инфекционной активности при 34^oC и 25^oC - 3.5 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл.

ж) структура генома рекомбинанта:
- гены от эпидемического вируса - HA, NA;
- гены от донора аттенуации - PA, PB1, PB2, NP, М, NS.

6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а) дата лиофилизации - 2 июля 1997 года;
б) объем материала в ампуле - 1 мл;
в) количество доз в серии - 3;
г) инфекционная активность - 7.5 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл;
д) гемагглютинирующая активность - 1:256.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации - 1:3.

8. Антигенная специфичность:
а) гемагглютинина в РТГА - идентичен вирусу А/Перт/13/95 (H1N1), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется;
б) нейраминидазы - идентична вирусу А/Перт/13/95 (H1N1) по данным рестрикционного анализа ДНК копий генов.

9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении - безвреден.

10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала: дата проведения - 23 июня 1997 года, результат - стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.

Штамм вируса гриппа А/17/Перт/95/29 (H1N1) ареактогенен и иммуногенен для взрослого контингента.

Пример 1. При вакцинации 82 взрослых лиц интраназально распылителем РДЖ-4М рекомбинантным вакцинным штаммом А/17/Перт/95/29 (H1N1) с инфекционной активностью 7,5 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл в разведении 1:2 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oC и средних реакций с повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oC не наблюдалось. Слабые температурные реакции до 37,5^oC отмечены у трех привитых (3,6%). Показатель реактогенности (разница в проценте слабых температурных реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составил 0%.

В контрольной группе из 50 лиц, получивших плацебо, сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5^oC и средних реакций с повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oC не наблюдалось. Слабые температурные реакции до 37,5^oC отмечены у двух лиц контрольной группы (4,0%) (таблица 1).

Таким образом, вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым Фармакопейной статьей ФС 42-299 ВС-89 к вакцинным штаммам на живую гриппозную вакцину для интраназального применения для взрослых.

Список литературы
1. Штамм А/17/Техас/91/1/3 (H1N1) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Патент РФ 2084524 от 20.07.97. Опубликован в бюллетене изобретений N 20 от 20.07.97.

2 Александрова Г. И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. - СПб.: Наука. - 1994. - 151 с.

Изобретение предназначено для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Вакцинный штамм А/17/Перт/95/29(Н1N1) - реассортант. Он получен путем скрещивания эпидемического вируса А/Перт/13/95(Н1N1) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2N2). Штамм А/17/ Перт/95/29(H1N1) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 34^oС, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм соответствует по антигенным свойствам штамму вируса А/Перт/13/95. Штамм А/17/Перт/95/29(Н1N1) ареактогенен для взрослых при интраназальном введении и удовлетворяет показателям иммуногенности. Вакцинный штамм А/17/Перт/95/29 (H1N1) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей ФС 42-299 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения для взрослых. 1 табл.

Штамм вируса гриппа А/17/Перт/95/29 (Н1N1) ГИСК N 104 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых.