Способ получения живой брюшнотифозной вакцины Советский патент 1977 года по МПК C12K5/00 

Изобретение относится к медицине.

Известен способ получения живой брюшнотифозной вакцины на основе мутанта Salmonella typhi, зависимого по стрептомицину.

Однако вакцина, полученная известным способом, недостаточно эффективна и реактогенна.

С целью получения высокоиммуногенной и нереактогенной вакцины используют мутант Salmonella typhi, обладаюпдий дополнительно зависимостью по пурину.

Способ получения живой брюшнотифозной вакцины осуществляют следующим образом.

Используют мутанты бактерий Salmonella typhi, зависимые по пурину (pur. В ) и стрептомицину (str-d). Мутанты по пурину получают пенициллиновым методом. Для получения стрентомицинзазисимых мутантов исходный щтамм высевают на 1,5%-ный мясо-пептонный агар Хоттингера, содержащий стрептомицин в концентрации 300 ед/мл. Выращенные колонии подращивают в мясо-пептонном бульоне Хоттингера в течение 3 ч, после чего высевают их на твердую агаровую среду с антибиотиком и без него. Колонии, выросшие только на среде с антибиотиком, являются стрептомицинзависимыми.

Вирулентные свойства мутантов и их ревертантов изучают на белых мыщах путем

внутрибрюшного введения кз ьтypы в физиологическом растворе. Тифозные бактерии вводят в полужидком агаре. LDso вычисляют по методу Кербера в модификации Ашмарина

и Воробьева.

При мутации к пурин- и стрептомицинзависимости сальмонеллы разных видов становятся авирулентными: их показатель LDsj в миллионы раз больше, чем этот же показатель у исходных штаммов.

При изучении вирулентных свойств ревертантов str-d мутантов сальмонелл устанавливается расщепление этого свойства. 80- 85% :ревертантов остаются авирулентными,

остальные же ревертанты в той или иной степени восстанавливают вирулентные свойства. Ревертанты из пуринзависимого штамма S. typhi М-7 риг. Б- в 100% остаются вирулентными

Чтобы получить живую брюшнотифозную вакцину, безопасную в практическом использовании, применяют двойной мутант 8. typhi, зависимый по пурину и стрептомицину. В качестве исходного штамма используют пуринзависимый мутант S. typhi М-71 риг. В, из которого отселекционировали стрептомицинзависимый мутант.

Частота реверсии двойного мунтанта по ПЗФИНУ составляет 2. 10, а по стрептомицину - 4- 10. Одномоментной реверсии по двум признакам двойного мутанта при посеве его в количестве 1 10 микробных клеток на минимальный агар без стрептомицина не установлено. Вирулентные свойства двойного мутанта и ревертантов но одному из признаков изучают на белых мышах. Ревертанты, выделенные из двойного мутанта, по одному из признаков по пурину или стрептомицину остаются авирулентными со значением LD микробных клеток. Отсутствие одномоментной реверсии по двум признакам, авнрулентность ревертантов по одному из признаков обуславливает безо пасность практического применения живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе мутанта, зависимого но пурину и стрептомицину. Иммуногенные свойства вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта S. typhi М-71 риг. В- str-d, проверяют на белых мышах по методу Луипольда. Группы мышей, по 10 штук в каждой, иммунизируют энтерально различными дозами вакцины и разрешают вирулентной культурой в 0,4%-ном полужидком агаре S. typhi Т 5501 в дозе 10 LDso. В качестве контроля используют гретую вакцину, приготовленную из вирулентной культуры S. typhi Т 5501. Иммуногенные свойства живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта, при энтеральном способе применения в 5 раз выше по сравнению с иммуногенными свойствами гретой вакцины. Формула изобретения Способ получения живой брюшнотифозной вакцины путем вырашивания стрептомицинзависимого штамма Salmonella typhi в питательной среде с носледуюшим отделением культуры и лиофилизацией, отличаюш,ийс я тем, что, с целью получения высокоиммуногенной н нереактогенной вакцины, используют мутант Salmonella typhi, обладаюш,ий дополнительно зависимостью по пурину.