СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1999 года по МПК A61B10/00 A61K31/115 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (КРС), а более конкретно для эффективной прижизненной диагностики туберкулеза КРС за счет усиления специфичности и активности туберкулиновой пробы.

Известен способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (см. Ветеринарные правила ВП 13.3. 1325-96, утвержденные Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.06.96 г. //В сб. санитарных и ветеринарных правил "Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных". - М.: изд-во Госкомсанэпиднадзор России и Минсельхозпрод России, 1996 г. ), включающий внутрикожное введение туберкулина всем животным, начиная с 2-месячного возраста, и последующий учет реакции через 72 часа. Способ предусматривает многократное введение туберкулина через 45-60 дней в зависимости от эпизоотического состояния хозяйства по туберкулезу КРС.

Однако многократное введение туберкулина ведет к снижению реактивности животного и в связи с этим возникновению неадекватных ответных реакций (гипоэргических), в результате чего достоверность диагностики снижается.

Известен также способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (см. а. с. СССР N 1423113, кл. A 61 B 10/00, опуб. 15.09.88 г.), заключающийся во введении внутрикожно туберкулина вместе с тетрамизолом из расчета 0,8 - 1,0 мг тетрамизола на одну дозу туберкулина и последующем учете через 72 часа кожной реакции. Способ позволяет снимать местную супрессию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у больных туберкулезом животных, находящихся в состоянии анергии, а также исключить ложноположительные реакции ГЗТ у здоровых животных, обеспечивая тем самым повышение специфичности диагностики.

Однако реализация этого способа сложна и требует дополнительных затрат, поскольку предусматривает выполнение специальных действий по приготовлению диагностического препарата: растворение тетрамизола, его стерилизацию в автоклаве, разведение сухого туберкулина полученным раствором тетрамизола. При этом способ исключает использование жидкого туберкулина, являющегося предпочтительнее для использования в практике. Кроме того, способ не может быть использован для снятия общей супрессии ГЗТ у больных животных.

Наиболее близким к заявляемому является способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (М.А.Сафин, 1976, Ученые записки Казанского ордена Ленина Госветинститута им. Н. Э.Баумана, том 117, стр. 80-84), включающий введение животным 10%-ного раствора хлористого кальция в количестве 150 мл 4 дня подряд с последующей через 30-45 дней постановкой внутрикожной туберкулиновой пробы и учетом реакции через 72 часа. При этом интервал в 30-45 дней между введением раствора хлористого кальция и туберкулина выбран в соответствии с Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных, утвержденной Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 4.11.70 г., по которой интервал между туберкулиновыми пробами составляет 30-45 дней.

Многократное введение раствора хлористого кальция позволяет скорректировать иммунный ответ животного путем снижения гиперэргической реакции до нормэргической и таким образом дифференцировать специфические реакции на туберкулин от неспецифических.

Однако область применения способа узка, поскольку он предусматривает проведение диагностики ограниченного числа животных, т.е. только тех, которые при первичном обследовании с помощью туберкулиновой пробы дали положительную реакцию. Кроме этого, способ неэффективен, так как не гарантирует выявление животных с пониженной реактивностью на туберкулин (гипоэргические реакции), которые остаются в стаде разносчиками источника инфекции.

Изобретение направлено на решение задачи повышения эффективности способа диагностики туберкулеза КРС за счет усиления активности и специфичности аллергической реакции на туберкулин.

Задача решается путем использования в способе диагностики туберкулеза КРС, включающем введение иммунокорректирующего средства, постановку внутрикожной туберкулиновой пробы, учет кожной реакции на туберкулин через 72 часа, в качестве иммунокорректирующего средства - препарата, содержащего, мас. %: формальдегид 0,07 - 0,12, хлористый натрий 0,85 - 0,9, дистиллированная вода остальное. При этом препарат вводят внутримышечно в дозе 4-6 мл 2-3 раза с интервалом 6-10 дней.

Постановку внутрикожной туберкулиновой пробы осуществляют спустя 45-60 дней после введения иммунокорректирующего препарата. Интервал между введением препарата и постановкой спустя 45-60 дней туберкулиновой пробы выбран на основе "Ветеринарных правил" ВП 13.3. 1325-96, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18 июня 1996 г. В соответствии с указанными правилами, исследования на туберкулин проводят не чаще, чем через 45-60 дней.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа диагностики туберкулеза КРС, позволяющего эффективно выявлять больных животных среди всего ранее обследованного поголовья за счет усиления специфических и снижения неспецифических аллергических реакций на туберкулин путем использования иммунокорректирующего препарата на основе формальдегида.

Известно использование иммунокорректирующего средства, содержащего 0,22 - 0,4%-ный раствор формалина (соответственно 0,08 - 0,16%-ный раствор формальдегида) для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных (см. патент РФ N 2028804 по кл. A 61 K 31/115, опуб. 20.02.95 г. и патент РФ N 2035190 по кл. A 61 K 39/12, опуб. 20.05.95 г. ). Препарат позволяет повысить специфическую иммунную защиту путем снижения вирулентности возбудителя заболевания непосредственно в организме животных-вирусоносителей. Под действием препарата происходит изменение естественного фона метаболического формальдегида, который оказывает воздействие на возбудителя заболевания.

Известен препарат, содержащий, мас.%: формальдегид 0,07 - 24; хлорид натрия 0,9 - 0,95, дистиллированная вода остальное (см. патент РФ N 2077882 по кл. A 61 K 31/115, опуб. 27.04.97 г.). Препарат используется в качестве модулятора естественной резистентности организма, обеспечивающего саморегуляцию основных систем макроорганизма.

В заявляемом изобретении авторами выявлено неизвестное ранее свойство препарата на основе формальдегида, позволяющего осуществлять диагностику туберкулеза крупного рогатого скота путем усиления специфических реакций у больных туберкулезом животных, особенно у нереагирующих на постановку туберкулиновой пробы, путем активизации иммуноглобулинов преимущественно класса E. Кроме этого, выявленное свойство препарата снижать неспецифические реакции за счет нормализации иммунного статуса организма животного позволило отдифференцировать здоровых животных от больных.

Таким образом, неизвестность использования в способе диагностики туберкулеза КРС препарата на основе формальдегида, приводящего к усилению специфических реакций у больных туберкулезом животных и к снижению неспецифических реакций у здоровых животных, позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом способе "изобретательского уровня".

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве иммунокорректирующего средства используют препарат, изготовленный в соответствии с ТУ 9336-231-00494 189-97, содержащий, мас.%: формальдегид 0,07, хлорид натрия 0,9, дистиллированная вода остальное. В соответствии с техническими условиями, препарат использовался в ветеринарии в качестве иммуномодулирующего средства только для лечения инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных и не был предназначен для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.

Для осуществления диагностики туберкулеза препарат вводят внутримышечно всем животным, в том числе и молодняку (начиная с 2-месячного возраста), как предварительно исследованным с помощью туберкулиновой пробы, так и не исследованным ранее на туберкулин.

Препарат вводят в дозе 4-6 мл 2-3 раза с интервалом 6-10 дней.

Спустя 45-60 дней после последней инъекции препарата животных исследуют внутрикожной туберкулиновой пробой и производят учет кожной реакции через 72 часа.

По учету количества реагирующих на туберкулин до введения иммунокорректора и после оценивают активность способа диагностики. Специфичность способа оценивают путем диагностического убоя реагирующих животных с последующим лабораторным исследованием.

Ниже приведены примеры (пример 1 и пример 2) влияния введения препарата за 45-60 дней до постановки туберкулиновой пробы на эффективность диагностики туберкулеза.

Пример 1.

В опыте использовано 1000 голов коров и нетелей. Все животные были подвергнуты плановым аллергическим исследованиям на туберкулин, по результатам которых реагирующих животных не выявлено. Всем животным, независимо от сроков, прошедших с момента учета кожных реакций, вводили иммунокорректирующий препарат в дозе 5 мл на голову 2 раза с интервалом 7 дней.

Через 60 дней после последней инъекции препарата провели постановку внутрикожной туберкулиновой пробы в соответствии с Ветеринарными правилами.

При учете кожной реакции через 72 часа выявлено 21 положительно реагирующее животное.

Был произведен диагностический убой реагирующих животных. Патологоанатомические исследования и результаты лабораторной диагностики подтвердили наличие диагноза на туберкулез.

Пример 2.

В опыте использовано 800 коров и нетелей.

При плановых аллергических исследованиях на туберкулин выявлено 16 реагирующих животных.

У подвергнутых убою реагирующих животных патологоанатомические исследования и результаты лабораторной диагностики не подтвердили наличие туберкулеза.

Всем остальным животным вводили иммунокорректирующий препарат в дозе 5 мл 3 раза с интервалом 10 дней.

Спустя 60 дней после третьей инъекции препарата животным вводили внутрикожно туберкулин и производили учет кожной реакции через 72 часа. В результате было выявлено 39 реагирующих животных.

Проведенные лабораторные исследования подтвердили у этих животных туберкулез.

Таким образом, приведенные примеры подтверждают проявление усиления специфических реакций у больных туберкулезом животных при воздействии на организм животных иммунокорректирующего препарата на основе формальдегида.

Процентное содержание активного вещества препарата - формальдегида подобрано экспериментальным путем.

Готовили препарат путем разведения 37-40%-ного медицинского раствора формальдегида стерильным 0,85 - 0,9%-ным раствором хлорида натрия до получения заданных концентраций раствора формальдегида. Например, берут 0,2 мл 37%-ного раствора формальдегида, добавляют его в 99,8 мл стерильного 0,85%-ного (или 0,9%-ного) раствора хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают. Конечная концентрация формальдегида в полученном препарате будет составлять 0,074 мас.%.

Приготовленный таким образом препарат с различными концентрациями формальдегида вводили группам животных (1-й группе - препарат с содержанием формальдегида 0,06 мас. %; 2-й группе - 0,07 - 0,12 мас.%; 3-й - выше 0,12 мас.%).

Выявлено, что введение препарата с содержанием формальдегида менее 0,07 мас.% и более 0,12 мас.% не приводило к повышению эффективности диагностических мероприятий.

Таким образом, проведенные эксперименты позволили сделать вывод, что концентрация формальдегида в пределах 0,07 - 0,12% усиливает специфическую реакцию организма животных на туберкулез.

Доза введения препарата, его кратность и интервал между инъекциями также подобраны экспериментально.

Установлено, что введение препарата в дозе менее 4 мл не приводит к решению поставленной задачи, а именно - к эффективной диагностике.

Использование препарата в дозе более 6 мл нецелесообразно с экономической точки зрения.

Введение препарата менее двух раз не позволяет усилить специфические реакции на туберкулез у больных животных и снизить неспецифические у здоровых. Многократное введение препарата (более 3-х раз) приводит к неоправданным расходам препарата, никак не влияя при этом на эффективность диагностических мероприятий.

Временной интервал между инъекциями 6-10 дней обусловлен сложившимися в ветеринарной практике требованиями к проведению вакцинаций животных.

Общеизвестно, что наивысший пик иммунных реакций наступает к 11-14 дню. Во избежание анафилактических реакций организма повторное введение иммуномодуляторов (иммуностимуляторов), как правило, проводят не позднее, чем на 11-12 день.

Таким образом, заявленный в качестве изобретения способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота позволяет эффективно выявлять больных животных, производить быстро и качественно дифференциацию больных животных от здоровых, обеспечивая в итоге сохранность поголовья путем исключения неоправданной выбраковки здоровых животных.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. Изобретение направлено на решение задачи повышения эффективности способа диагностики туберкулеза за счет усиления активности и специфичности аллергической реакции на туберкулин. Задача решается путем введения до постановки туберкулиновой пробы иммунокорректирующего состава. В качестве иммунокорректирующего средства используют препарат, содержащий, мас. %: формальдегид 0,07; хлорид натрия 0,9; дистиллированная вода остальное. Препарат вводят внутримышечно всем животным, в том числе и молодняку (начиная с 2-месячного возраста), как предварительно исследованным с помощью туберкулиновой пробы, так и не исследованным ранее на туберкулин. Препарат вводят в дозе 4-6 мл 2-3 раза с интервалом 6-10 дней. Спустя 45-60 дней после последней инъекции препарата животных исследуют внутрикожной туберкулиновой пробой и производят учет кожной реакции через 72 часа. Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота позволяет эффективно выявлять больных животных, производить быстро и качественно дифференциацию больных животных от здоровых, обеспечивая в итоге сохранность поголовья путем исключения неоправданной выбраковки здоровых животных. 1 з.п. ф-лы.

1. Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, включающий введение иммунокорректирующего средства, постановку внутрикожной пробы с туберкулином и учет кожной реакции, отличающийся тем, что в качестве иммунокорректирующего средства используют препарат, содержащий, мас.%: формальдегид 0,07 - 0,12; хлорид натрия 0,85 - 0,9 и дистиллированная вода остальное, при этом препарат вводят внутримышечно в дозе 4 - 6 мл 2 - 3 раза с интервалом 6 - 10 дней. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что постановку внутрикожной пробы с туберкулином осуществляют не ранее 45 - 60 дней после последнего введения иммунокорректирующего средства.