СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ Российский патент 2003 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/385 

Изобретение относится к микробиологии, в частности, к разработке питательной среды для выращивания синегнойной палочки, пригодной для использования в биологической промышленности при получении антигенных и вакцинных препаратов.

В микробиологической практике для культивирования синегнойной палочки используют питательные среды, основой которых являются животные белковые продукты - мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) (Зудилин В. А. Иммуногенные свойства вакцины против псевдомоноза крупного рогатого скота. - М., 1983. Труды ВИЭВ, т.57, с. 133-135). Вследствие наличия в данных средах большого количества белков мяса, пептона конечный вакцинный продукт, получаемый после выращивания микробов, содержит в своем составе балластные белковые вещества среды, что снижает его специфичность, увеличивает реактогенность и требует применения метода очистки. В этой связи разработка синтетической питательной среды для выращивания синегнойной палочки позволила бы получать вакцинные и антигенные препараты, не отягощенные баластными белковыми веществами и пептоном. Кроме того, в отличие от питательных сред, основой которых являются белковые продукты, синтетические легко стандартизируются по составу и наиболее пригодны для использования в биологической промышленности.

За прототип взята среда для выращивания стафилококков (Евглевский А.А. Патент 2132382, МПК С 12 N 1/20).

Состав вышеуказанной среды содержит ингредиенты в граммах на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислый магний 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; сернокислый цинк 0,08-0,09; аспарагин 0,9-1,0; гликокол 0,9-1,0; глицерин 2,0-3,0 мл.

Однако попытки использовать для выращивания синегнойной палочки данную питательную среду не имели нужного эффективного результата, так как в отдельных пробирках, флаконах, колбах рост биомассы составлял от 7 до 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Это требовало проведения поисковых исследований по подбору оптимального соотношения ингредиентов с учетом отличительных особенностей выращивания синегнойной палочки.

Были приготовлены и испытаны многочисленные варианты синтетической среды с разным содержанием хлористого натрия, с включением в состав среды глюкозы и, наоборот, исключением из ее состава гликокола, сернокислого цинка.

Опыты показали, что при добавлении в питательную среду 0,5-0,7-0,9-1,0-1,1 г/литр глюкозы обеспечивалось накопление биомассы синегнойной палочки соответственно до 7-8; 8-9; 9-10; 10-11: 10-11 млрд. микробных тел в 1 мл. Дальнейшее увеличение глюкозы в питательной среде не сопровождалось увеличением накопления биомассы.

Последовательное уменьшение содержания в среде хлористого натрия с 5 г/литр до 4-3-2-1 способствовало еще более обильному и равномерному росту биомассы микробов соответственно до концентрации 11-12; 12-13; 13-14; 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл культуральной жидкости. Однако дальнейшее уменьшение содержания в питательной среде хлористого натрия до 0,8 и 0,5 г/л снизило накопление биомасс до 13-14 и 12 млрд. микробных тел/мл. Следовательно, оптимальное содержание хлористого натрия в среде должно составлять 0,9-1,0 г/литр.

Следует отметить, что в ходе поисковых опытов авторами не отмечено влияние на рост синегнойной палочки сернокислого цинка и гликокола, в связи с чем они были исключены из компонентов разработанной среды.

Таким образом, путем устранения вышеперечисленных недостатков предлагается среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая в своем составе лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин, глюкозу и глицерин. Новым является то, что среда содержит глюкозу и новое соотношение компонентов в г на 1 литр дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл.

Способ приготовления среды включает одномоментное или последовательное растворение в дистиллированной воде перечисленных компонентов с последующей нейтрализацией повышенной кислотности аммиаком до рН 7,0-7,1. Расфасовывают питательную среду в пробирки, во флаконы, в биобутыли, в которых объем количества среды должно составлять ¹/₂ часть объема, после чего подвергают стерилизации автоклавированием. При плотности посева 90-100 млн. микробных тел на 1 мл среды конечное накопление биомассы в культуральной жидкости находится на уровне 14-15 млрд. микробных тел в 1 мл.

Преимущество данной среды перед МПА и МПБ состоит в том, что для выращивания синегнойной палочки не требуются дефицитные и дорогостоящие продукты животного происхождения и пептон. Получаемый конечный продукт не отягощен балластными белковыми веществами среды и пептоном.

Изобретение относится к микробиологии. Среда для выращивания синегнойной палочки содержит лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин при соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: лимонная кислота 4,9-5,0; хлористый натрий 0,9-1,0; сернокислый магний 4,9-5,0; фосфорнокислый калий двухзамещенный 4,9-5,0; сернокислое железо 0,04-0,05; аспарагин 0,9-1,0; глюкоза 0,9-1,0; глицерин 2,9-3,0 мл. Среда дешевле и при ее использовании получают вакцинный препарат, не отягощенной балластными белковыми веществами.

Среда для выращивания синегнойной палочки, содержащая лимонную кислоту, хлористый натрий, фосфорнокислый калий двухзамещенный, сернокислый магний, сернокислое железо, аспарагин и глицерин, отличающаяся тем, что дополнительно содержит глюкозу при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Лимонная кислота - 4,9-5,0
Хлористый натрий - 0,9-1,0
Сернокислый магний - 4,9-5,0
Фосфорнокислый калий двухзамещенный - 4,9-5,0
Сернокислое железо - 0,04-0,05
Аспарагин - 0,9-1,0
Глюкоза - 0,9-1,0
Глицерин, мл - 2,9-3,0