СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА Российский патент 1999 года по МПК A61K31/28 

Изобретение относится к медицине и касается способов коррекции лучевого и цитостатического иммунодефицита.

Возникновение лучевого иммунодефицита связано с хроническим лучевым воздействием в условиях работы на АЭС при проведении радио- и рентгенотерапии [1,2] . Однако, несмотря на острую потребность, в настоящее время арсенал фармакологических средств для терапии и профилактики лучевого иммунодефицита чрезвычайно скуден и включает в себя, по сути дела, всего препарат - цистамин (производное аминотиолов) и батилол (5- метокситриптамин), действие которых обусловлено их химической структурой соединений-ловушек свободных радикалов [7]. При этом они эффективны только как профилактические средства.

Цитостатический иммунодефицит связан с использованием цитостатиков, в частности циклофосфана, и является одним из грозных осложнений в онкологической практике при проведении цитостатической терапии [6]. Введение таких иммуностимуляторов, как тималин, нуклеинат натрия, продигнозан, обычно не дают желаемого эффекта и по витальным показаниям цитостатическая терапия либо отменяется, либо осуществляется корректировка доз цитостатика, что неизбежно снижает общую эффективность терапии [3].

Сущность изобретения состоит в том, что в качестве лекарственного средства используют эфазол в дозах 15-50 мг/кг экспериментального животного, а введение осуществляют - при лучевом иммунодефиците через 15-20 минут после облучения, а при цитостатическом - через сутки после введения цитостатика.

Эфазол представляет собой катионно-анионно-комплекс тетрохлорпалладита с протонированным 1-фенил 2-метил-аминопропанолом в качестве катиона и принадлежит к классу соединений палладия с производными ароматических аминов (Патент РФ N 2022968. C 07 F 15/00).

Для раскрытия сущности изобретения ниже приведены результаты экспериментального изучения заявленного способа. Было проведено 2 серии экспериментов. В первой серии опыты были проведены на мышах-самцах линии C57/B1 весом 16-20 г. В течение трех дней животных облучали один раз в день на установке Co₆₀ ("Хизотрон). Дозы облучения: 1 день -60 P, 2 день -70 P, 3 день - 70 Р. Суммарная активность составила 200 Р. Такая доза была выбрана, чтобы получить значительное снижение иммунологической реактивности и вместе с тем избежать летальности, поскольку известно, что доза в 400 P является сублетальной для мышей [7].

Через 15 минут после каждого облучения мышам вводили эфазол в дозе 15 мг/кг или левамизол (препарат сравнения) в дозе 2,5 мг/кг внутрибрюшинно. На следующий, после последнего облучения, день мышей иммунизировали внутрибрюшинно 3% взвесью эритроцитов барана (0,5 мл). Еще через 5 дней производили разрешающую инъекцию 0,05 мл 12% взвеси эритроцитов барана в подушечку левой задней лапы. В контрлатеральную лапу вводили такое же количество физиологического раствора. В течение всего опыта животные содержались в стандартных условиях вивария, получая брикетированный комбикорм. Животных забивали через сутки декапитацией. Иммунологический ответ оценивали с помощью реакции гемагглютинации с эритроцитами барана и реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) [4].

Во второй серии экспериментов исследовали влияние эфазола в тех же дозах на уровень гуморального и клеточного иммунного ответа на фоне вторичного иммунодефицита, вызванного с помощью внутрибрюшинного введения циклофосфана в дозе 200 мг/кг. Эфазол в дозах 15 и 50 мг/кг вводили внутрибрюшинно через сутки после введения циклофосфана. В этот же день животных иммунизировали бараньими эритроцитами. Остальные процедуры производились по такой же схеме, как и в первой серии опытов.

Результаты экспериментов
В таблице 1 приведен вес животных до и после облучения (табл. 1-5 см. в конце описания).

Как видно из таблицы, облучение привело к снижению массы тела на 18,4%. Введение эфазола способствовало нивелированию эффекта облучения мышей. Препарат сравнения левамизол таким действием не обладал.

В таблице 2 приведены результаты определения уровня гуморальных антител у облученных мышей. Как видно из таблицы, облучение приводило к статистически значимому снижению гуморального ответа до 73,1%. Введение облученным животным эфазола нормализовало этот показатель в отличие от препарата сравнения левамизола, который практически не действовал на уровень гемагглютининов.

Кроме того, облучение приводило к значительному, в 2 раза, снижению индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа - Табл. 3. Введение таким животным эфазола увеличивало клеточный иммунный ответ до 131,3% по сравнению с интактными животными. Препарат сравнения левамизол также нормализовал этот показатель. Следует отметить, что в данном опыте наблюдался значительный разброс в индивидуальных показателях. Это, по всей вероятности, связано со временем года (весна), когда проводился эксперимент. Как правило, весной у животных наблюдаются значительные индивидуальные колебания иммунологических и биохимических параметров. Однако, несмотря на отсутствие четкой статистической достоверности, значительные изменения индекса ГЗТ у облученных и необлученных животных все-таки позволяют сделать заключение о наличии у эфазола иммуноактивирующего эффекта, который проявляется как на гуморальном, так и на клеточном уровне.

Интересно отметить, что в данной работе получены практически идентичные результаты в различных экспериментах по изучению влияния эфазола на иммунный ответ у животных с вторичным иммунодефицитом, вызванным действием различных факторов (введением циклофосфана и облучением). И в том, и в другом случаях эфазол значительно (почти до нормы) увеличивал уровень гуморальных антител в сыворотке крови мышей в отличие от левамизола, который был практически неэффективен. Идентичным в обоих экспериментах было и влияние эфазола на клеточный иммунитет: и при облучении и при введении циклофосфана эфазол увеличивал индекс РГЗТ даже выше нормы, при этом левамизол был менее эффективен, чем эфазол.

Сходное иммуноактивирующее действие эфазола при различных формах вторичного иммунодефицита, наблюдавшееся в наших экспериментах, позволяет предположить наличие аналогичного эффекта у препарата при иммунодефицитных состояниях, вызванных другими видами воздействия (в частности, при стрессах, синдроме хронической усталости, при инфекционных заболеваниях, СПИДе и др.).

У животных с вторичным иммунодефицитом, вызванным введением циклофосфана (Табл. 4), эфазол значительно, почти до нормального уровня активизировал выработку гуморальных антител.

При развитии вторичного иммунодефицита на фоне циклофосфана (Табл. 5) клеточный иммунный ответ был почти полностью блокирован. Однократное введение таким животным эфазола в дозе 15 мг/кг приводило к значительному увеличению индекса РГЗТ, а в дозе 50 мг/кг эфазол увеличивал клеточную иммунную реакцию до значений, в 1,5 раза превышающих уровень РГЗТ у контрольных (без иммунодефицита) животных.

Таким образом, из представленных материалов следует, что эфазол, введенный после облучения, а также после введения цитостатика в определенные сроки в заявленном диапазоне доз, купирует состояние вторичного иммунодефицита, стимулируя как гуморальное, так и клеточное звено иммунитета.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами:
Пример N 1
Эксперименты были проведены на 50 мышах-самцах линии C57/B1 весом 16-20 г. В течение трех дней животных облучали один раз в день на установке Co₆₀ ("Хизотрон). Дозы облучения: 1 день - 60 P, 2 день - 70 P, 3 день - 70 P. Суммарная активность составила 200 P.

Через 15 минут после каждого облучения мышам вводили эфазол в дозе 15 мг/кг внутрибрюшинно. На следующий, после последнего облучения, день мышей иммунизировали внутрибрюшинно 3% взвесью эритроцитов барана (0,5 мл). Еще через 5 дней производили разрешающую инъекцию 0,05 мл 12% взвеси эритроцитов барана в подушечку левой задней лапы. В контрлатеральную лапу вводили такое же количество физиологического раствора. Иммунологический ответ оценивали с помощью реакции гемагглютинации с эритроцитами барана и реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ).

Введение эфазола вызывало увеличение уровня гемагглютининов с 4,9 (после лучевого воздействия) до 6,4 (-log₂). Такая же закономерность показана и при исследованиях РГЗТ. Так индекс РГЗТ у животных после облучения составил 6,6, а после введение эфазола 14,9 (у интактных - 11,6).

Пример N 2
Эксперимент проведен на 60 мышах самцах линии C57/B1 весом 18-20 г.

Животным вводили внутрибрюшинно эфазол в дозах 15 - 50 мг/кг. В этот же день животных иммунизировали внутрибрюшинно введением 0,5 мл 3% взвеси эритроцитов барана. Через 5 дней этим же животным под кожу подушечки левой задней лапы вводили по 0,05 мл 12% взвеси эритроцитов барана. В подушечку контрлатеральной (контрольной) лапы вводили такое же количество физиологического раствора. На следующий день после разрешающей инъекции животных забивали декапитацией и производили забор периферической крови для определения уровня гемагглютининов к бараньим эритроцитам в сыворотке. Отрезали обе задние лапы по линии скакательного (пяточного) сустава и взвешивали контрольную и опытную лапы для определения индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ), который вычисляли по формуле:

Уровень гуморальных антител определяли в реакции гемагглютинации с бараньими эритроцитами. Для этого полученную сыворотку крови мышей в разведениях, кратных двум, соединяли с таким же количеством 2% взвеси бараньих эритроцитов и затем инкубировали в течение 2 часов в термостате при 37^oC. Степень агглютинации эритроцитов оценивали визуально и выражали - log₂ от разведения. Полученные результаты статистически обрабатывали с помощью метода Стьюдента.

Эксперимент показал, что, если в контроле содержание гемагглютининов равнялось в среднем 7,7 (-log₂), то при введении циклофосфана этот показатель снизился до 1,6±0,2. Введение же эфазола способствовало повышению показателя до 6,6-6,8 (-log₂).

Такая же закономерность была выявлена по индексу РГЗТ. Если в контроле он соответствовал 0,18±0,2, то после введения ЦФ отмечалось снижение до 0,4. Последующее введение эфазола приводило к повышению показателя до 0,14-0,28 (в зависимости от введенной дозы эфазола).

Таким образом, представленные примеры подтверждают иммуностимулирующее действие эфазола в условиях лучевого и цитостатического иммунодефицита.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и радиационной медицине, и может быть использовано для коррекции лучевого и цитостатического иммунодефицита. Предложено в качестве лекарственного препарата использовать эфазол в дозе 15-50 мг/кг экспериментального животного. При лучевом иммунодефиците эфазол вводят через 15-20 мин после облучения, а при цитостатическом - через сутки после введения цитостатика. Способ позволяет купировать состояние вторичного иммунодефицита, стимулируя как гуморальное, так и клеточное звено иммунитета. 2 з.п.ф-лы, 5 табл.

1. Способ коррекции вторичного иммунодефицита, включающий введение лекарственных средств, отличающийся тем, что в качестве лекарственного препарата используют эфазол в дозе 15 - 50 мг/кг экспериментального животного. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при лучевом иммунодефиците эфазол вводят через 15 - 20 мин после облучения. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что при цитостатическом иммунодефиците эфазол вводят через сутки после введения цитостатиков.