СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ ТКАНИ МОЗГА Российский патент 2000 года по МПК A61K35/30 

Изобретение относится к области медицины, может быть использовано в диагностике нейроонкологических, травматических, сосудистых, демиелинизирующих, инфекционных заболеваний нервной системы, эпилепсии, гидроцефалии.

Аналогом данного метода является способ получения энцефалитогенного белка из трупной мозговой ткани (Иммунологические методы. / Под ред. X.Фримеля: Пер. с нем. - М., 1979, с. 254-255), предусматривающий экстракцию гомогенизированного белка с помощью 0,9%-ного раствора NaCl, центрифугирование и осажедение белка насыщенным раствором сульфата аммония.

Аналогом данного метода является также приготовление микросомального антигена щитовидной железы (Иммунологические методы. / Под. ред. X.Фримеля: Пер. с нем. -М., 1979, с. 252), при котором ткань щитовидной железы измельчают и гомогенизируют в 10% растворе сахарозы с последующим центрифугированием.

Наиболее близким по значению является предложенный (Малашхия Ю.А. Характеристика состояния Т- и В-систем лимфоцитов в спинномозговой жидкости и периферической крови в норме и при некоторых инфекционных и сосудистых заболеваниях нервной системы. // Дисс. ... д-ра мед. наук. -Тбилиси, 1978, 310 с. ) способ приготовления антигена мозговой ткани у трупов. Способ состоит в заборе мозговой ткани у трупов 0 (I) группы крови, удалении из нее сосудов и отмывании от крови. Далее ткань размельчают, заливают физиологическим раствором, содержащим 50000 ЕД пенициллина на 6 часов. Затем ткань в стерильных условиях измельчают методом аппаратной гомогенизации, добавляя физиологический раствор 1:5 к весу ткани. Переливают в стерильную пробирку и помещают в холодильник при температуре -20^oC. Троекратно замораживают и размораживают. Взвесь центрифугируют при 10000 об./мин в течение 30 минут. В надосадочной жидкости определяют содержание общего белка методом Лоури и далее ее используют как антиген.

Достоинством данного метода можно считать возможность получения экстракта головного мозга, содержащего полный набор церебральных антигенов.

Недостатком данного метода является то, что за исходный материал берется мозговая ткань трупов, к тому же имеющих только группу крови 0 (I).

Предложенный нами способ приготовления набора мозговых антигенов состоит в следующем.

Ткань мозга, содержащую смесь серого и белого вещества коры больших полушарий и мозжечка, полученную в ходе нейрохирургических операций при вынужденной резекции неповрежденных участков мозга для облегчения доступа к доброкачественной инкапсулированной опухоли у больных с разной группой крови и резус-фактором, очищают от крови, удаляют сосуды, отмывают, размельчают, заливают физиологическим раствором, содержащим 50000 ЕД пенициллина, на 6 часов. Затем ткань в стерильных условиях измельчают методом аппаратной гомогенизации, добавляя физиологический раствор 1:5 к весу ткани. Переливают в стерильную пробирку и помещают в холодильник при температуре 20^oC. Троекратно замораживают и размораживают. Взвесь центрифугируют при 10000 об./мин в течение 30 минут. В надосадочной жидкости определяют содержание общего белка методом Лоури и далее ее используют как антиген.

При использовании полученных таким способом антигенов в ходе реакции пассивной агглютинации положительный результат в диагностическом титре 1:8 отмечен у 4 из 25 больных с остеохондрозом поясничного отдела позвоночника (16,00%). В то же время, подобное исследование, проведенное в дооперационном периоде у 16 больных с анапластическими астроцитомами и глиобластомами головного мозга дало положительный результат в 13 случаях (81,25%), у 10 больных с дифференцированными астроцитомами - в 6 случаях (60,00%), у 12 больных с менингиомами - в 5 случаях (41,66%), у 14 больных с невриномами слухового нерва - в 9 случаях (64,28%). B период 3-5 суток послеоперационного периода реакция пассивной агглютинации с использованием приготовленного нами мозгового антигена была положительна в титре сыворотки 1:8 и выше у 14 из 14 больных с анапластическими астроцитомами и глиобластомами (100%), у 8 из 10 больных с дифференцированными астроцитомами (80%), у 11 из 12 больных с менингиомами (91,66%), у 11 из 11 больных с невриномами слухового нерва (100%). В период 8-10 суток послеоперационного периода реакция была положительной у 13 из 14 больных с анапластическими астроцитомами и глиобластомами (92,85%), у 9 из 10 больных с дифференцированными астроцитомами (90%), у 11 из 12 больных с менингиомами (91,66%), у 11 из 11 больных с невриномами слухового нерва (100%).

Представленные результаты указывают на возможность использования предложенного нами способа получения набора антигенов ткани мозга в иммунодиагностике наличия, титра и динамических изменений уровня противомозговых антител, что отражает фазные изменения проницаемости гематоэнцефалического барьера и аутоиммунных реакций против мозговой ткани в разные периоды заболевания головного мозга. Полученные данные могут иметь важное значение в диагностике, определении прогноза заболевания и коррекции лечения неврологических и нейрохирургических больных.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике нейроонкологических, травматических, сосудистых, демиелинизирующих инфекционных заболеваниях нервной системы, эпилепсии, гидроцефалии. Для приготовления антигена берется мозговая ткань живых людей с различной группой крови, получаемая в ходе нейрохирургических операций при резекции неповрежденных участков мозга, и готовится водно-солевой экстракт. Технический результат: возможность получения экстракта головного мозга, содержащего полный набор церебральных антигенов.

Способ приготовления антигенов ткани мозга путем измельчения ткани мозга человека, экстракции физиологическим раствором с последующим центрифугированием и отделением надосадочной жидкости, содержащей целевой продукт, отличающийся тем, что используют ткань мозга, полученную в ходе нейрохирургических операций при резекции неповрежденных участков мозга, необходимой для облегчения доступа к опухоли у больных, имеющих различную группу крови.