ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2000 года по МПК A61K31/43 A61K31/715 A61K35/413 A61K33/18 

Изобретение относится к области медицины, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается противоопухолевого средства.

В настоящее время имеется огромный арсенал химиотерапевтических препаратов, применяемых для лечения злокачественных заболеваний различных групп: алкилирующие препараты, цитостатики, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, алкалоиды и другие биологические активные вещества растительного происхождения, а также ферментные и гормональные препараты [1].

Известны антибиотики, обладающие противоопухолевым действием, к которым в основном относятся антибиотики антрациклинового ряда [2], например, антрациклиновые гликозиды [3].

Так, известно противоопухолевое средство, применяемое для инъекций, на основе антрациклинового гликозида, представляющее собой стерильный непирогенный раствор антибиотика. Антрациклиновый гликозид выбирают из группы, включающей доксорубицин, эпирубицин, азорубицин, даунорубицин и изорубицин, предпочтительным является доксорубицин. В растворах для инъекций содержание антибиотика может варьировать от 0,1 до 100 мг/мл, предпочтительно от 0,1 до 50 мг/мл, предпочтительная концентрация для доксорубина составляет от 2 до 50 мг/мл. Инъекционная форма представляет собой стерильный раствор антрациклинового гликозида в физиологически пригодном растворителе, содержащем физиологически пригодную кислоту для доведения pH раствора до 2,5-5,0. Эта инъекционная форма была успешно испытана для лечения экспериментальных опухолей: вируса саркомы Молони, асцитной саркомы 180, твердой саркомы 180, большой трансплантируемой лейкемии, лейкемии L 1210, лимфоцитарной лейкемии P 388 [4].

Наиболее близким аналогом является противоопухолевое средство, представляющее собой спиртовый экстракт оболочки желчного пузыря вместе с желчью половозрелого медведя в период гормонального созревания [5]. Желчный пузырь вместе с желчью, изъятый из половозрелого медведя вместе с оболочкой, завязывают и закрывают в непрозрачную банку на срок не более 2-х недель, после чего обмывают кипяченой водой, нагревают до температуры 35-37^oC, развязывают и вместе с оболочкой помещают его в стеклянную посуду, заливают 1 л спирта и настаивают в течение 12-18 дней при температуре 2-3^oC, после фильтрации берут 140-145 г спиртового экстракта, заливают 50 столовыми ложками 40%-ного раствора спирта и осуществляют прием перорально по одной столовой ложке 3 раза в день за 20 мин до еды в течение 10 дней, затем делают 10-дневный перерыв и повторяют прием еще 10 дней. Средство успешно применено для лечения злокачественной опухоли левой груди, раковой опухоли кишечника после операции, рака прямой кишки второй стадии, а также лечения доброкачественных опухолей.

Однако, несмотря на достигнутые успехи в химиотерапии злокачественных опухолей, поиск новых веществ, обладающих противоопухолевым действием, продолжается, поскольку все имеющиеся противоопухолевые препараты, как правило, обладают высокой токсичностью и недостаточной избирательностью действия, а также довольно узким спектром действия.

Задача данного изобретения заключается в разработке противоопухолевого препарата, обладающего широким спектром действия, а именно для лечения злокачественных новообразований, как солидных, так и асцитных форм, а также метастатических поражений и злокачественных нарушений гемопоэза.

Сущность изобретения состоит в том, что противоопухолевое средство содержит ампициллина натриевую соль, желчь медицинскую, 5%-ный раствор иода спиртовый, сахар и воду для инъекций при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Ампициллина натриевая соль - 1-30
Желчь медицинская - 2-40
5%-ный Раствор иода спиртовый - 0,5-10
Сахар - 1,0-10
Вода для инъекций - До 100
В состав указанного противоопухолевого средства входят все известные компоненты, выпускаемые отечественной медицинской промышленностью, противоопухолевая активность которых не отмечена.

Так, ампициллина натриевая соль применяется для лечения смешанных инфекций и является полусинтетическим антибиотиком широкого спектра действия, активным против грамположительных микроорганизмов, на которые не действует пенициллин. Однако отмечено его действие и на ряд грамотрицательных микроорганизмов. Антибиотик применяют для внутримышечного и внутривенного введения для лечения больных пневмониями, абсцессами легких, ангиной, перитонитом, холециститом, сепсисом, а также кишечными инфекциями. Суточная доза 1-3 г, в тяжелых случаях до 10 г и более [3].

Желчь медицинская содержит желчь свиней и крупного рогатого скота, применяется наружно при острых и хронических артрозах, бурситах, вторичных радикулитах, как обезболивающее, местное противовоспалительное и рассасывающее средство [3].

5%-ный Раствор иода спиртовый применяется наружно, как антисептическое, раздражающее и отвлекающее средство, а также при миозитах и невралгиях, внутрь назначают от 1 до 10 капель для профилактики атеросклероза, суточная доза - 60 капель [3].

4-м активным ингредиентом является сахар пищевой.

Исключение любого компонента из состава приводит к полной потере активности. Ни одно из известных противоопухолевых веществ не содержит в своем составе перечисленных компонентов.

В связи с этим, отличие указанного средства от ближайших аналогов заключается в составе противоопухолевого средства, состоящего из ампициллина натриевой соли, желчи медицинской, 5%-ного раствора иода спиртового, в также сахара пищевого и воды для инъекций, взятых при следующих соотношениях компонентов, мас.%:
Ампициллина натриевая соль - 1,0-30
Желчь медицинская - 2,0-40
5%-ный Раствор иода спиртовый - 0,5-10
Сахар - 1,0-10
Вода для инъекций - До 100
Предложенная совокупность существенных признаков обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в расширении спектра действия для лечения как солидных, так и асцитных форм злокачественных опухолей, также форм с метастазами, и уменьшении метастазирования и заболеваний с нарушениями гемопоэза. Предложенное средство предлагается к применению в наиболее эффективной форме - инъекционной.

В связи с изложенным, предложенное изобретение соответствует условиям новизны, изобретательского уровня и промышленной применимости.

Примеры осуществления изобретения.

Пример 1. Приготовление средства. В емкость помещают навеску сахара и добавляют порошок ампициллина натриевой соли, затем заливают 5%-ный раствор иода спиртовый, желчь медицинскую и воду для инъекций до 100 мл, смесь тщательно перемешивают, фильтруют, закупоривают и стерилизуют при 121^oC в течение 30 мин.

Пример 2. Проверка предложенного средства на противоопухолевую активность в отношении перевиваемых опухолей мышей и крыс.

Проверку активности указанного средства проводили по методу, описанному Лариновым Л. Ф. [6]. В опытах использовали мышей весом 18-25 г и крыс весом 120-140 г, опухоли перевивали внутрибрюшинно по 10⁵-10⁶ клетки, или подкожно 5-10%-ной взвесью опухолевых клеток. Противоопухолевое средство вводили через 2-7 дней после перевивки опухоли 2 раза в сутки - утром внутримышечно и вечером внутривенно в течение 3-х дней.

Критерием эффективности препарата является процент увеличения продолжительности жизни мышей и крыс и процент торможения роста опухоли по отношению к контролю, при этом активной считается доза препарата, увеличивающая продолжительность жизни на 25% и торможение роста опухоли на 45%. Процент торможения опухоли определяют по изменению массы узла в случае солидной опухоли и по изменению объема асцита в случае асцитической формы по формуле
TPO=(A_к-A_о)•100/A_к,
где ТРО - процент торможения опухоли;
A_к - средний показатель массы опухоли в контроле;
A_о - средний показатель массы опухоли в опытной группе.

Измерение массы опухоли проводят у мышей на 11-17 сутки, у крыс - через 30-60 дней после перевивки опухоли.

В табл. 1 представлены данные проверки эффективности предложенного средства на перевиваемые опухоли экспериментальных животных.

Из представленных данных следует, что однодневное введение предлагаемого средства мышам с лимфоцитарной лейкемией P-388 через 2 суток после перевивки опухоли на 28% повышает среднюю продолжительность жизни мышей.

В связи с изложенным, при определении действия противоопухолевого средства на другие перевиваемые опухоли введение препарата осуществляли в течение трех дней последовательно, утром внутримышечно, вечером внутривенно. Из представленных данных следует, что предложенное средство оказалось эффективным при проверке всех типов перевиваемых опухолей различного характера, как эпителиальных, так и утративших эпителиальных характер, к которым относится карцинома Эрлиха, как для твердых, так и асцитических форм, для опухолей кроветворной системы (лимфоцитарная лейкемия, лимфосаркома Плисса, а также опухолей, склонных к метастазированию - меланомы M-16 и лимфасаркомы Плисса).

Также проведена проверка предложенного средства на метастазирование опухоли у крыс с перевитой лимфосаркомой Плисса (табл. 2).

Из представленных данных следует, что предлагаемое средство эффективно как в отношении самой опухоли, так и в отношении метастазирования.

Пример 3. Предлагаемое средство также испытано на цитотоксическую активность в культурах эпителиальных клеток человека, при этом использовались клетки цервикальной карциномы человека (Hela), гепатомы (Hep G-2) и карциномы молочной железы (McF7).

Цитотоксическая активность изучалась по влиянию различных концентраций средства на рост клеток по сравнению с контрольными клетками. Для этих целей клетки культивируют в среде RPMI-1640 с 10%-ной фетальной сывороткой теленка, после выращивания клетки удаляют со стекла 0,5%-ным раствором трипсина, содержащим 5,3 мМ ЭДТА, центрифугируют, ресуспендируют в основном среде и разводят до содержания 25.000-50.000 клеток в мл. Клетки высевают и в суточные культуры вносят различные концентрации препарата, цитотоксичность определяют по наличию белка в опытных и контрольных пробах. Цитотоксическим веществом является вещество, ингибирующее рост культур клеток на 50% в концентрации 100 мгк/мл или менее. В табл. 3 представлены данные по изучению предлагаемого средства на цитотоксичность культур клеток, перечисленных выше, в зависимости от концентрации средства в культуральной среде.

Как следует из данных, представленных в табл. 3, предлагаемое нами средство соответствует требованиям, предъявляемым к цитостатикам.

Пример 4. В дальнейшем исследуемый препарат был проверен на 2-х коровах с диагнозом хронический лимфолейкоз в лаборатории по изучению лейкозов и злокачественных опухолей сельскохозяйственных животных ВИЭВ. Препарат вводили в количестве 6 мл внутримышечно утром и 9 мл внутривенно вечером в течение 3-х дней. Проведенное лечение привело к уменьшению количества лейкоцитов, увеличению веса и повышению лактации. В табл. 4 представлены данные по изменению форменных элементов крови этих коров в динамике.

Отмечены положительные результаты лечения одной коровы на кафедре внутренних незаразных болезней животных МГАВИиВ им. К.И.Скрябина с диагнозом хронический лейкоз. Наблюдалось улучшение общего состояния, повышение лактации, понижение общего лейкоцитоза с 20 до 12 тысяч в 1 мкл крови и уменьшение количества лимфоцитов с 92 до 63%, с нормализацией количества гемоглобина, эритроцитов и гранулоцитов. Побочных реакций, связанных с применением препарата не наблюдалось.

Предложенное средство было использовано для лечения 5 больных злокачественной опухолью четвертой стадии.

Пример 5. Больная В., 1923 г. рождения, в 1984 г. в Онкологическом научном центре был поставлен диагноз - рак правой молочной железы. 10.12.86 там же была проведена резекция правой молочной железы с подмышечной лимфадектомией, с 04.01.87 проводилось облучение правой молочной железы. В 1997 г. наступило ухудшение состояния больной, беспокоили боли по ночам: в тазобедренных суставах, позвоночнике и левом плечевом суставе. 11.12.97 в Онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина рентгенологические исследования показали наличие метастазирования таза и левого плечевого сустава. 20.01.98 начато лечение указанным средством: препарат вводили в течение 3-х суток, утром внутримышечно, вечером внутривенно в количестве от 1 до 5 г. Улучшение наступило на 2-й день введения препарата. 27.01.98 боли в плече не беспокоили, тазобедренные суставы и узлы операционного шва также не болели. 24.02.98 компьютерная диагностика не выявила наличия раковой опухоли. При обследовании 17.04.98 в Онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина диагноз рак не поставлен. В настоящее время больная чувствует себя удовлетворительно, срок наблюдения составляет 8 месяцев.

Пример 6. Больная А. 1947 г. рождения, в 1995 г. в районном онкологическом отделении г. Москвы был поставлен диагноз лимфосаркома. 14.10.97 в консультативно-диагностическом Центре клинической больницы N 50 обнаружено диффузное изменение правой почки с уменьшением объема активной паренхимы на фоне обструктивного типа уродинамики. Заключение отделения компьютерной томографии ГКБ N 50 - рецидив лимфосаркомы, опухолевый конгломерат забрюшинного пространства, блок венозного и лимфатического оттока, нарушение оттока из правой почки, асцит. 08.11.97 начато лечение предложенным препаратом, 12.11.97 началось улучшение. Обследование, проведенное в ГКБ N 50 05.01.98, асцита и метастазов не обнаружило. 14-06.03.98 было проведено повторное лечение указанным средством по вышеизложенной схеме, в настоящее время больная чувствует себя удовлетворительно.

Лечение еще проведено на 3-х больных злокачественной опухолью, диагноз поставлен в московских клиниках.

Пример 7. Больной А., 1948 г. рождения, в 1998 г. в Центре эндохирургии и литотрипсии был поставлен диагноз - опухоль ректосигмовидного перехода, прорастающая в стенку мочевого пузыря, лимфоузлы. Прошел курс лечения указанным препаратом, состояние нормализовалось, срок наблюдения 4 месяца.

Пример 8. Больная К., 1969 г. рождения, диагностику прошла в Онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина, диагноз - лейкемия, 4 стадия, после проведенного курса лечения чувствует себя удовлетворительно. Срок наблюдения 10 месяцев.

Пример 9. Больной С., возраст - 50 лет, в 1996 г. в Городской клинической больнице N 51 был поставлен диагноз меланома кожи левого плеча, 4-я стадия, после проведенного лечения состояние больного нормализовалось, срок наблюдения 10 месяцев.

Проведенные исследования на экспериментальных животных с перевиваемыми опухолями, а также на клеточных культурах, свидетельствующие о противоопухолевой активности предложенного средства, а также обнадеживающие результаты по лечению больных злокачественной опухолью 4-й стадии, открывают возможности проведения широких клинических испытаний.

Литература
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, 1984, часть 2, стр. 425 - 475.

2. Химия антибиотиков. М., Академия Наук СССР, 1961, часть 2, стр. 650 - 685.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, 1985, часть 2, стр. 212, часть 1, стр. 204, часть 2, стр. 129 - 132, стр. 457.

4. SU 1837883 A3, 1993, A 61 K 9/08.

5. RU 2102990 C1, 27.01.98., A 61 K 35/413.

6. Ларионов Л. Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей. М., Медгиз, 1962, стр. 175 - 293.

Изобретение относится к области медицины, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается противоопухолевого средства. Сущность изобретения заключается в разработке противоопухолевого средства, содержащего ампициллина натриевую соль, желчь медицинскую, спиртовый раствор йода, сахар и воду для инъекций, взятых при определенных соотношениях. Проверка показала высокую противоопухолевую активность на экспериментальных животных с перевиваемыми опухолями, а также цитотоксическую активность на культурах клеток, эффективность при лечении лейкоза коров, а также положительные результаты лечения пяти больных злокачественными опухолями. Технический результат заключается в расширении спектра действия для лечения как солидных, так и асцитных форм злокачественных опухолей, также форм с метастазами, и уменьшении метастазирования, а также для лечения заболеваний с нарушением гемопоэза. 4 табл.

Противоопухолевое средство, отличающееся тем, что оно включает ампициллина натриевую соль, желчь медицинскую, 5%-ный раствор иода спиртовый, сахар и воду для инъекций, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Ампициллина натриевая соль - 1,0 - 30
Желчь медицинская - 2,0 - 40
5%-ный Раствор иода спиртовый - 0,5 - 10
Сахар - 1,0 - 10
Вода для инъекций - До 100