4(5) Карбэтоксиимидазолил-5(4)-амид @ -[п-ди-(2-хлорэтил)аминофенил]масляной кислоты, обладающий противоопухолевой активностью Советский патент 1989 года по МПК C07D233/58 A61K31/4172 A61P35/00 

35253

Предлагаемое соединение обладает менее выраженным токсическим влиянием на общее число лейкоцитов крови и имеет несколько иной спектр про тивоопухолевой активности, а также оказьшает более эффективное действие на отдельные штаммы экспериментальныз опухолей,например саркому 45 и ССК, по сравнению с хлорбутином.

Целью изобретения является син-, тез нового химического соединения 4(5)-карбэтоксиимидазолил-5(4)-амида - 1П-ди-(2-хлорэтил)-аминофенил масляной кислоты, которое может найти применение в медицинской практике для лечения злокачественных новообразований .

4 (5 )-Карбэтоксиимидазолил-5 (4 )-амид - п-ди-(2-хлорзтш1)- аминофeнилJ-масляной кислоты получают ацилированием этилового эфира 4(5)-амино имидазол-5(4)-карбоновой кислоты хлоргидратом хлорангидрида -Сп-ди-(2-xлopэтил)-aминoфeнилJ-мacлянoй кислоты в среде бензола в присутствии триэ тиламин а.

П р и м е р. К суспензии 3,1 г (0,02 моль) этилового эфира 4(5)-аминоимидазол-5(4)-карбоновой кислоты и 7,2 г (0,0206 моль) гуюрангидрИ да (JT - п-дй-(2-хлорэтил)-аминофенил}-масляной кислоты в 300 мл безводного бензола при температуре не выше 5 С прибавляют по каплям 10,8 мл (0,08 моль) триэтиламина, нагревают до кипения-и кипятят 1 ч. Горячую реакционную массу фильтруют от осадка хлоргидрата триэтиламина и бензольный фильтрат упаривают досуха на роторном испарителе,., Остаток .последовательно обрабатывают разбавленной соляной кислотой (1:1), разбавленным раствором соды, промьшают водой и сушат на воздухе. Выход неочищенного продукта с т.пл. 129-131 С 5,8 г (65,8%). Чистый продукт получают двукратной кристаллизацией из спирта. Бесцветные пластинки с т.пл. 133-134 С, выход 3,0 г (34,0%).Растворим в спирте, ацетоне, бензоле, нерастворим в воде, эфире. При хранении на воздухе медленно гидролизуется

Найдено, %: С 54,44, Н 5,92, С1 15,99, N 12,74.

С4оНмС1гЫ4 Озвычислено,%: С 54,42, Н 5,89, С1 16,10, N 12,70.

4(5)-Карбзтокс имидазолил-5(4)-амид -/п-ди(2-хлорэтил)-аминофенил -масляной кислоты в дозе 8 мг/кг при: введении внутрь обладает значительным противоопухолевым действием. Индекс торможения при максимальном эффекте составляет, %: Саркома 4590,4

Карцинома Герена 94 Саркома М-1 67 , Саркома ССК 100 Лимфосаркома Плисса 58 Саркома Иенсена 96 Саркома 53680

Альвеолярный рак печени55

Асцитная опухоль Эрлиха 63 Саркома 18069

Саркома НК68

Саркома АК40

Судя по химиотерапевтическому индексу, предлагаемое сЬединение обладает наибольшой избирательностью противоопухолевого действия в отношении саркомы 45 по сравнению с хлорбутином и сарколизином. Предлагаемое соединение может найти применение в медицинской практике для лечения определенных форм злокачественных новообразований и расширить ассортимент противоопухолевых препаратов.

4 (5) -Карбэтоксиимидазолил-15 (4) ;г-амид Г - п-ди(2 хлорэтил)-аминофенилJ-мacлянoй кислоты для краткости назван имбутином.

Влияние имбутина на рост экспериментальных опухолей.

Противоопухолевая активность имбутина изучена на 8 перевиваемых опухолях крыс и 4 перевиваемых опухлях мышей. Препарат вводят внутрь в виде взвеси в 1%-ном крахмальном клейстере. Лечение солидных опухоле начинают на 5-8 день после трансплатации (альвеолярного рака печени - н 14 день), за исключением отмеченных ниже опытов. Противоопухолевую активность оценивают по индексу торможения роста опухолей, вычисленному как отношение разности веса опухлей в контроле и опыте к среднему весу опухолей в контроле (%). Лечение асцитной опухоли Эрлиха начинают на следующий день после перевивки. Про5 . 5 тивоопухолевую активность оценивают по влиянию на накопление асцитической жидкости и асцитных клеток.

О , токсичности имбутина судят по. изменению веса животных (за вычетом веса онухоли) и веса селезенки в конце опыта. В некоторых опытах подсчитьшают общее количество лейкоцитов в крови.

Число животных в каждой опытной и контрольной группе составляет 610, в большинстве случаеВ8-9.

Все экспериментальные данные статстически обработаны путем вычисления средней арифметической и ее стандартной ошибки. Различие между сравниваемыми средними считают статистически значимыми при уровне вероятности ,05.

А. Первичное испытание противоопухолевой активности имбутина.

В предварительных опытах на здорвых крысах была изучена токсичность имбутина при однократном введении. Установлено, что для крыс равна 105 мг/кг.

Первичное испытание противоопухолевого действия имбутина проведено на трех штаммах опухолей: асцитная опухоль Эрлиха, саркома 45 и саркома 180.

Результаты показывают (табл.1), что препарат в дозах 5, 10 и 20 мг/кг уменьшает накопление асцнтической жидкости опухоли Эрлиха на 33-56%. В этих же опытах имбутин снижает накопление асцитных клеток на 35-48%.

В дозе 20 мг/кг препарат тормозит рост саркомы 180 на 76%.

Значительное противоопухолевое дествие имбутин проявляет в опытах на крысах с саркомой 45. При длительном введении((в течение 15 дней) в дозе 8 мг/кг препарат угнетает рост опухоли на 90,4%. Во второй серии опытов лечение крыс начинают через 72 ч после перевивки и продолжают в течение 5 дней. Результат оценивают через 10 дней после окончания лечения. В дозах 6, 10 и 12, 8 мкг/к имбутин вызывает полное рассасывание опухоли. В дозе 12, 8 мг/кг препарат оказывает токсическое действие на организм, снижая вес тела животных, уменьшая вес селезенки и вызывая гибель 10% животных.

Таким образом, при первичном испытании имбутин проявляет выраженную

.

способность тормозить рост опухолей, в связи с чем было проведено расширенное изучение его противоопухолевой активности в сравнении с хлорбутином .- препаратом группы хлорэтиламинов, применяемым в клинической практике.

Б. Сравнительное изучение противоопухолевой активности имбутина и хлорбутина.

В терапевтических опытах животных делят на три группы. В первой группе вводят имбутин внутрибрюшинно в дозах 8-10 мг/кг, во второй группе - хлорбутин внутриб рюшинно в дозе 3 мг/кг. Выбранная первоначально доза 5 мг/кг оказалась токсичной и была снижена Третья группа животных служит контролем для двух первых.

Результаты показывают (табл.2), что имбутин так же, как хлорбутин, имеет широкий спектр противоопухолевого действия. Оба препарата вызывают сильное торможение карциномы Герена и саркомы Иенсена. При этом отдельные опухоли подвергаются полной регрессии.

Самый высокий эффект достигнут на саркоме ССК. К концу лечения опухоли отсутствовали у всех животных в обеих экспериментальных группах. Для определения полноты излечения за ивотными наблюдают в течение двух недель после окончания введения препаратов, через две недели у крысы,получивших имбутин, опухоли не появляются. У крыс, леченныххлорбутином, средний вес опухолей составляет 26,0. Таким образом, на этом штамме имбутин оказывается более эффективным, чем хлорбутин.

Менее чувствительными к обоим препаратам оказались саркома 45, саркома М-1, саркома 536, лимфосаркома Плйсса и альвеолярный рак печени РС-1.

При сравнении противоопухолевой активности препаратов в отношении перевиваемых опухолей мьш1ей установлено, что имбутин оказывает более сильное влияние .на рост саркомы 180. ндекс торможения при максимальном эффекте для имбутина 69, для хлорбутина 44%.

По влиянию на асцитную опухоль Эрлиха имбутин уступает хлорбутину: индекс торможения соответственно 68 и 84%.

Саркома НК и саркома АК оказались в одинаковой степегда чувствительны к обоим препаратам.

При сравнении токсического действия препаратов на организм установлено, что имбутин и хлорбутин в одинаковом числе опытов вызывают уменьшение веса селезенки и падение веса тела животных. Однако имбутин оказывает более мягкое воздействие на лейкопоэз. Так, после применения имбутина в дозе 10 мг/кг в крови сохраняется 54% от исходного содержания лейкоцитов . После применения хлорбутина в адекватной по эффективности дозе 3,3 мг/кг в крови определяется лишь 18% лейкоцитов.

В. Исследование избирательности противоопухолевого действия имбутина.

Изучение избирательности противоопухолевого действия имбутина проводят в сравнении с двумя препаратами группы хлорэтиламинов - сарколизином и хлорбутином. Противоопухолевую активность и токсичность испытьшают в одном комбинированном токсико-терапевтическом опыте на саркоме 45 по методике М.Х. Караивановой (1971). Соединение вводят в пяти-шести различных дозах в течение 5 дней, имбутин внутрь, сарколизии и хлор.бутин - внутрибрюшинно. Лечение начинают через 72.ч после перевивки опухоли. Животных забивают через 10 дней после-окончания введения препаратов. Вычисляют процент гибели животных. Противоопухолевую активность выражают в процентах торможения роста опухоли.

Применяют пробит - метод для нахождения значения искомых величин: дозы, вызывающей гибель 10% животных () и дозы, дающей 90% торможения опухоли (ДТдо). Определяют терапевтический индекс-ДЛ й : Щ ёУстановлено (табл. 3), терапевтический индекс равен у сарколизина 1,76, -у хлорбутина 2,22, у имбутина 2,70. Таким образом, имбутин обладает наибольшей избирательностьюдействия в отношении саркомы 45.

Имбутин о.бладает высокой противоопухолевой активностью и широким спектром действия. По силе противоопухолевого эффекта сопоставим с таким алкилирующим препаратом, как хлорбутин, но отличается от него по спектру действия, В опытах на саркоме 45 имбутин проявляет большую .

избирательность противоопухолевого действия по сравнению с сарколизином и хлорбутином.

Влияние нмбутина на рост перевиваеььж опухолей

Таблица 1

4

Асцитная опухоль Эрлнха Влияние имбутина н хлорбутииа на рост перевиваемых

Саркома 45

10 10 10

В 5/3

10

8

8

5/3

9

8 8 3

В

8

8

В 5/3

10

10

В

8 3

10

10

10 10 10

8 3

8 9 10

8 5/3

0,98tO,09 0,54 t 0,05 0,6410,06

1,61 to,22 0,B7 ±0,06 0,86tO,07

0,96 to,n 0,68 ±0,09 0,72 to,16

l,50t 0,19 0,71 t 0,06 0,85 to,07

2,50t 0,27 0,58 + 0,07 1,01 t 0,15

0,67t 0,11 0,88t 0,12 0,67 t 0,06

0,78t 0,12 0,48 t 0,04 0,88 t0,08 Таблица 2 опухолей крыс и мьшей

Продолжение табл. 2