Изобретение относится к способу определения бензо(а)пирена из ряда ПАУ в пищевых продуктах животного происхождения, преимущественно копченых мясных и рыбных продуктах, и может быть использовано для объективной оценки их качества.
В копченых мясных и рыбных продуктах в процессе их обработки концентрируются вещества, часть которых является канцерогенной, в том числе бензо(а)пирен (C20H12). Допустимое содержание бензо(а)пирена в продукте составляет 0,001 мг/кг по нормам СанПиН.
Для обеспечения безопасности копченых мясных и рыбных продуктов возникает необходимость разработки методики ускоренного и точного определения содержания в них бензо(а)пирена.
Известен способ определения бензо(а)пирена из ряда ПАУ в пищевых продуктах, предусматривающий экстракцию, фильтрацию, концентрирование, переэкстракцию, промывку и хроматографическое разделение экстракта с последующей идентификацией и количественной оценкой (см. "Методические указания по выделению, идентификации и количественному определению насыщенных моно, би, три и ряда полициклических ароматических углеводородов в пищевых продуктах", с. 2-5. Институт питания АМН СССР, г. Москва, 1988 г.).
Этот способ является очень длительным и трудоемким, так как включает в себя щелочной гидролиз при кипении образца на магнитной мешалке с обратным холодильником в течение 3,5 часов. Кроме того, присутствие хроматографической колонки в процессе разделения экстракта неизбежно приводит к потерям бензо(а)пирена до 30%, что не позволяет достичь необходимой точности в определении количества бензо(а)пирена в пробе исследуемого продукта. Последнее является также следствием применения пластинки с ацетилированной целлюлозой, обладающей недостаточной чувствительностью.
Технический результат, достигаемый при использовании изобретения, заключается в ускорении процесса выделения бензо(а)пирена из продукта и в повышении точности определения за счет сокращения потерь и применения высокочувствительного материала.
Это достигается тем, что в способе определения бензо(а)пирена из ряда ПАУ в пищевых продуктах, предусматривающем экстракцию, фильтрацию, переэкстракцию, концентрирование, промывку и хроматографическое разделение экстракта с последующей идентификацией и количественной оценкой, экстракцию проводят хлористым метиленом, а хроматографическое разделение экстракта осуществляют путем двухмерного прогона на тонкослойных силикагельных пластинках в хроматографических камерах. Хроматографические камеры заполняют смесью метилового спирта, ацетона и воды при соотношении: (1)6:4:1; (2) 6:4:3.
Проведение экстракции хлористым метиленом позволяет ускорить процесс выделения бензо(а)пирена по сравнению с известным способом в три раза.
Использование для идентификации бензо(а)пирена тонкослойной силикагельной пластинки более эффективной и чувствительной по сравнению с применяемой пластинкой с тонким слоем ацетилированной целлюлозы, а также двухмерный прогон пластинок в хроматографических камерах позволяет отказаться от использования хроматографической колонки, что сокращает время процесса извлечения бензо(а)пирена из продукта и его количественные потери на колонке и повышает точность определения.
Пример. 15 г сырокопченой колбасы тщательно измельчают в ножевом гомогенизаторе. 10 г гомогенизированного образца помещают в коническую колбу на 200 см3 и добавляют 100 см3 хлористого метилена. Ставят на магнитную мешалку на 1 час для перемешивания.
Экстракт фильтруют через бумажный фильтр и слой безводного сульфата натрия.
Фильтрат упаривают на роторном испарителе и перерастворяют в 100 см3 гексана. Переносят в делительную воронку емкостью на 1000 см3 и двумя порциями по 50 см3 смеси диметилформамида и воды переэкстрагируют. Отделяют нижний слой, а из верхнего гексанового экстрагируют ПАУ повторно. Гексановый (верхний слой) отбрасывают, а объединенный диметилформамидный экстракт разбавляют 100 см3 и экстрагируют ПАУ гексаном трижды по 40 см3. Гексановые экстракты объединяют и промывают водой двумя порциями по 50 см3. Фильтруют через бумажный фильтр и слой безводного сульфата натрия помещают в грушевидную колбу на 200 см3. Обезвоженный экстракт упаривают до объема 1-1,5 см3 а остаток растворителя удаляют током азота или воздуха. Высушенный экстракт растворяют в 200 мкл ацетонитрила. Микрошприцем отбирают 20 мкл пробы и наносят ее в точку на тонкослойную силикагельную пластинку 1 размером 10х10 см, оставляя снизу и сбоку поля шириной 0,7 см. Берут другую такую же пластинку 2 и, соблюдая поля, на нее в ряд наносят несколько точек стандартных растворов бензо(а)пирена с разной концентрацией (от 0,2 мкг до 0,005 мкг). Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. Пластинки 1 и 2 помещают в первую хроматографическую камеру в смесь метилового спирта, ацетона и воды (6:4:1) и дают подняться растворителю на 100 мм. Высушивают 5 мин на воздухе. Пластинку 1 прогоняют во второй хроматографической камере в перпендикулярном направлении по отношению к первому прогону в первой камере, после чего облучают обе пластинки УФ-светом кварцевой лампы с максимумом эмиссии 365 нм и сравнивают интенсивность флоурисценции пятен стандартов и пробы.
Количество бензо(а)пирена в пробе определяют по пятну стандарта, имеющего ту же интенсивность, что и исследуемый образец. Способ позволяет определить не менее 2,5 - 5 нг бензо(а)пирена в пятне, что соответствует его концентрации 0,5-1 мкг/кг массы биоматериала.
Такая оценка количества бензо(а)пирена в образце может служить экспресс-методом.
Стадию экстракции пищевых продуктов проводят хлористым металлом. Хроматографическое разделение экстракта осуществляют двухмерным прогоном на тонкослойных силикагельных пластинках в хроматографических камерах в смеси метилового спирта, ацетона и воды. Происходит ускорение процесса выделения бенз(а)пирена из конечных пищевых продуктов и повышение точности его определения. 1 з.п. ф-лы.
| Методические указания по выделению, идентификации и количественному определению насыщенных моно-, би-, три- и ряда полициклических ароматических углеводородов в пищевых продуктах | |||
| - М.: Институт питания АМН СССР, 1988, с.1. |
