ГЕПАТОПРОТЕКТОР Российский патент 2000 года по МПК A61K31/675 

Описание патента на изобретение RU2156130C1

Изобретение относится к области химии, в частности к фосфорсодержащим производным цитизина, проявляющим гепатопротекторную активность, и может быть использовано в медицине.

Известен гепатопротектор растительного происхождения "Легалон", который характеризуется низкой гепатопротекторной активностью (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, т. 2, 1993, с. 611).

Известен гепатопротекторный препарат искусственного происхождения "Эссенциале" (Германия), который представляет собой сложный комплекс веществ и содержит в своем составе флаваноиды, фосфолипиды, никотинамид и различные витамины (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, т. 2, 1993, с. 52). Недостатком указанного препарата является недостаточно высокая гепатопротекторная активность.

Цитизин широко распространен в природе. Он найден во многих растениях и извлечение его из растительного сырья ионообменным методом является главным промышленным способом получения цитизина.

В работах (Докл. АН Узб. ССР. 1978 г., N 9, стр. 39-42; Докл. АН Узб. ССР, 1977, N 7, стр. 40-43) описан синтез фосфорсодержащих N-[ β -(диалкоксифосфинил)меркаптоэтил]цитизинов (2) и их иодметилатов (3).

Авторы показали, что все синтезированные соединения обладают необратимой ингибирующей активностью в случае ацетилхолинэстеразы и проявляют эффект избирательного торможения каталитической активности бутирилхолинэстеразы.

Сведения о других фосфорсодержащих производных цитизина нами в литературе не обнаружены.

Раскрытие изобретения.

В связи с тем, что исходный алкалоид цитизин проявляет значительную биологическую активность, можно предположить, что и другие его фосфорсодержащие производные будут интересны с этой точки зрения.

Целью заявляемого изобретения является получение новых фосфорсодержащих производных цитизина, в частности обладающих повышенной биологической активностью.

Поставленная цель достигается тем, что получены фосфорсодержащие производные цитизина общей формулы

где n - 0; 1 при n - 0 X - S; O
R - CH3 (а): C2H5 (б); C3H7 (в); 1-C3H7 (г); C4H9 (д)
при n - 1 X - O
R' - i-C3H7 (а); C6H5 (б);
Синтез O, O-диалкил-N-цитизинилфосфатов (n - 0, X - O соединения 4а-д) осуществляли взаимодействием диалкилфосфитов с цитизином в условиях реакции Тодда-Атертона по следующей схеме:

Синтез O,O-диалкил-N-цитизинилгиофосфатов (n - 0, X - S соединения 5а-д) осуществляли в две стадии. На первой стадии при взаимодействии цитизина с диалкилхлорфосфитом (синтез описан в работе Нифантьев Э.Б. "Химия фосфорорганических соединений, М.: Наука, 1983 - стр. 85) в среде бензола, в токе сухого аргона и в присутствии триэтиламина образуется промежуточный O,O-диалкил-N-цитизинилфосфит, который затем реагирует с эквимолярным количеством элементной серы с образованием O,O-диалкил-N-цитизинилтиофосфата.


Диметил-(N-цитизинил)алкил(арил)фосфонаты (n - 1, X - O, R - CH3 соединения 6а-в) получены взаимодействием цитизина с альдегидами и диметилфосфитом в условиях реакции Кабачника-Филдса

Варианты осуществления изобретения.

Следующие примеры поясняют изобретение подробнее, не ограничивая его этим.

Примеры:
1. Синтез O,O-диметил-N-цитизинилфосфата (4а).

В колбу помещают смесь 2,86 г (0,026 моль) диметилфосфита и 15,5 мл (0,16 моль) четыреххлористого углерода в 100 мл бензола и при перемешивании прикапывают к ней смесь 5 г (0,026 моль) цитизина и 2,63 г (0,026 моль) тризтиламина в 230 мл сухого бензола с такой скоростью, чтобы температура раствора не превышала 20oC.

После окончания прикапывания реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Выпавшие кристаллы солянокислого триэтиламина отфильтровывают, растворитель отгоняют на вакуумном испарителе. Получают 5,64 г (выход 72,5% от теоретического) кристаллического вещества (перекристаллизация из бензола) с температурой плавления Tпл. 158-159oC.

NK-спектр, ν, см-1: 1270 (P-O), 1050 (P-O-C), 830 (P-N-C), 1658 (N-CO).

Спектр ПМР, δ, м.д. 6,23 д (1H, CHα, 3JHH 5,0 Гц), 7,23 д.д. (1H, CHβ, 3JHH 3,2 Гц), 6,12 д (1H, CHγ/ ), 3,34 д (6H, CH3O, JCH3 р 13,2 Гц).

ЯМР 31P: δp- 9,1 м.д.

Найдено, %: C 52,05; H 6,24; N 9,30; P 10,36.

C13H19N2O4P
Вычислено, %: C 52,36; H 6,37; N 9,40; P 10,40.

По данным рентгеноструктурного анализа координация атома фосфора в молекуле O,O-диметил-N-цитизинилфосфата - искаженная тетраэдрическая, обычная для фосфатных группировок. Дигидропиридиновый цикл - плоский с точностью карбонильный атом кислорода отклоняется от этой плоскости незначительно (на ). Тетрагидропиридиновый цикл принимает конформацию кресла ( Δ Сs8 2,7o) с выходом мостикового атома C из средней плоскости остальных на Пиперидиновый цикл имеет почти идеальную конформацию кресла ( Δ Cs8 0,5o). Метильные группы CH3 имеют гош-ориентацию относительно связей P-O и P-O соответственно.

Аналогично получены другие соединения 4б-з этого ряда (таблица 1).

2. Синтез O,O-диметил-N-цитизинилтиофосфата (5а).

В колбу помещают 5 г (0,026 моль) цитизина и 2,83 г (0,026 моль) триэтиламина в 200 мл абсолютного бензола. При энергичном перемешивании в токе сухого аргона и при комнатной температуре прибавляют 3,33 г (0,026 моль) диметилхлорфосфита. Перемешивают 5 часов. Выпавший осадок гидрохлорида триэтиламина отфильтровывают, промывая порциями абсолютного бензола. Фильтрат и расчетное количество серы 0,83 г (0,026 моль) помещают в колбу и продолжают перемешивать при комнатной температуре еще 2 часа. Затем смесь отгоняют в роторном испарителе и остаток перекристаллизовывают из бензола. Получают 8,01 г (выход 97%) кристаллического вещества с Tпл. 164-165oC.

ИК-спектр, ν, см-1; 1030 (P-O-C), 1670 (N-CO), 820 (P-S).

Спектр ПМР, δ, м.д. 8,23 д (1H, CHα, 3JHH 6,0 Гц); 7,16 д.д. (1H, CHβ, 3JHH 5,8 Гц);
ЯМР 31P: δp- 10,22 м.д.

Найдено, %: C 49,91; H 6,13; N 8,87; P 9,69;
C13H19N2O3SP
Вычислено,%: C 49,68; H 6,05; N 8,91; P 9,87.

Аналогично получены и соединения 5б-д этого ряда.

Результаты приведены в таблице 1.

3. Синтез диметил-2-(N-цитизинил)-2-изобутилфосфоната (6а).

Смесь 3,8 г (0,02 моль) цитизина, 1,24 г (0,02 моль) изомаслянного альдегида, 2,2 г (0,02 моль) диметилфосфита и каталитического количества 18-краун-6 в 100 мл бензола кипятят 3 часа с одновременной отгонкой образующейся в ходе реакции воды. После отгонки растворителя по окончании реакции остаток промывают гексаном и перекристаллизовывают из смеси бензол-эфир. Получают 5,52 г (выход 78,1%) кристаллического вещества с Tпл. 138oC.

ИК-спектр, ν, см-1: 1220 (P-O), 1070 (P-O-C).

Спектр ПМР, δ м.д. 6,72 д (1H, CHα, 3JHH 8,6 Гц); 7,10 д.д. (1H, CHβ, 3JHH 6,4 Гц); 6,51 д (1H, CHγ ), 3,31 д (6H, CH3O, JCH3 р 12,6 Гц); 0,50 д (3H, CH3-C), 0,87 д (3H, CH3-C).

Найдено, %: C 57,70; H 7,72; N 8,03; P 8,67;
C17H27N2O4P
Вычислено, %: C 57,56; H 7,58; N 7,90; P 8,52.

Аналогично получены и соединения 6б-в этого ряда (табл. 1).

Промышленная применимость.

Биологическая активность заявляемых соединений.

Проведенные фармакологические исследования показали, что синтезированные соединения проявляют гепатопротекторную и антиферментную активности.

1. Изучение гепатопротекторной активности.

Острая токсичность соединения.

Среднелетальную дозу LD50 определяли на мышах белых рандомбредных (320 голов по 18-20 грамм каждая). Препарат вводили однократно внутривенно в физиологическом растворе или перорально в крахмальной 1% взвеси. Период наблюдения - 14 дней. Ежедневно проверяли общее состояние животных, в течение периода наблюдения 3 раза животных взвешивали, проводили вскрытие павших животных и макроскопическое описание. Определение LD50 проводили методом пробит анализа.

В результате проведенных экспериментов получили, что LD50 - 4300 мг/кг (3200-5800) при пероральном введении соединения и LD50 - 1800 мг/кг (1250-2550) при внутривенном введении. Приведена средняя арифметическая величина и доверительный полуинтервал при P - 95%.

Гепатопротекторная активность при остром токсическом гепатите у крыс.

По мнению фармакологов, наиболее эффективным гепатопротекторным препаратом в настоящее время является препарат "Эссенциале" (ФРГ), который и был использован в следующих экспериментах в качестве препарата сравнения. Этот препарат представляет собой сложный комплекс веществ и содержит в своем составе сумму флаваноидов, фосфолипидов, никотинамид и различные витамины.

Изучение гепатопротекторной активности заявляемого препарата при остром токсическом гепатите проводили на 4 группах самцов белых рандомбредных крыс массой 120-150 грамм по 10 особей в каждой (см. табл. 2 и 3).

Первая группа - животным вводили внутривенно 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия и через час внутрибрюшинно 0,4 мл вазелинового масла.

Вторая группа - внутривенно 0,1 мл изотонического раствора хлористого натрия и через час внутрибрюшинно 0,4 мл 40% раствора гепатотропного яда - четыреххлористого углерода в вазелиновом масле.

Третья группа - внутривенно 0,1 мл раствора "Эссенциале" (50 мг/кг) и через час внутрибрюшинно 0,4 мл 40% раствора CCl4 в вазелиновом масле.

Четвертая группа - внутривенно 0,1 мл водного раствора заявляемого вещества (50 мг/кг) и затем, через час внутрибрюшинно 0,4 мл 40% раствор CCl4 в вазелиновом масле.

Все инъекции повторяли один раз в сутки на протяжении четырех дней, после чего под эфирным наркозом животные были декапитированы.

Гепатопротекторную активность заявляемого препарата и препарата сравнения при отравлении крыс четыреххлористым углеродом оценивали по изменению биохимических и гистологических показателей, характеризующих степень повреждения (разрушения) клеток при отравлении. Исследовали активность фермента аланинаминотрансферазы (АЛаТ) и уровень общего билирубина в крови, хемолюминисценцию эритроцитов и морфометрически объектную долю некрозов, внутридольковой инфильтрации, регенерирующих и дистрофированных клеток в срезах ткани печени.

При изучении хемолюминисценции эритроциты, выделенные из крови, суспензировали в изотоническом растворе хлорида натрия (по 1 мл 10% взвеси эритроцитов в пробе) свечение стимулировали 0,1 мл 5% H2O2 и определяли средне-арифметические показатели интегральной площади под кривой хемолюминисценции.

Приведенные данные показывают, что заявляемое вещество обладает гепатопротекторной активностью при отравлении крыс четыреххлористым углеродом, причем действует более активно, чем препарат "Эссенциале", использованный в качестве препарата сравнения.

Действие на выживаемость мышей при отравлении их гепатотропным ядом.

Для изучения действия препарата на выживаемость мышей при отравлении гепатотропным ядом использовались мыши белые рандомбредные, самцы массой 18-20 грамм, три группы по 10 мышей в каждой.

Первой группе животных внутрибрюшинно вводили 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Второй группе - внутривенно 0,1 мл раствора "Эссенциале" в дозе 50 мг/кг. Третьей группе - внутрибрюшинно 0,1 мл раствора заявляемого вещества в водном растворе (100 мг/кг).

Через час после первого введения всем животным внутрибрюшинно ввели 0,1 мл 50% раствора четыреххлористого углерода в вазелиновом масле.

Инъекции проводили однократно. Срок наблюдения 5 суток. Выживаемость через 5 суток составила (см табл. 4).

Полученные результаты показывают, что предлагаемое соединение в большей степени, чем "Эссенциале", защищает животных от гибели при отравлении их гепатотропным ядом.

Таким образом, мы установили, что соединение обладает умеренной токсичностью и его гепатопротекторное действие в экспертименте на животных значительно превосходит действие препарата "Эссенциале".

2. Хорошие результаты по выживаемости мышей при отравлении их гепатопротекторным ядом показало и еще одно из заявляемых фосфоросодержащих производных цитизина.

Процент выживаемости для этого соединения в эксперименте, аналогичном вышеописанному, составил 80%.

II. Изучение антиферментной активности.

При исследовании антиферментной активности синтезированных соединений изучали их взаимодействие с ацетилхолинэстеразой (АХЭ) и бутирилхолинэстеразой (БуХЭ). Использовали АХЭ из эритроцитов крови человека с удельной активностью 1,2 Ед/мг и БуХЭ из сыворотки крови лошади с удельной активностью 9,6 Ед/мг. Активность АХЭ и БуХЭ определяли калориметрическим методом Эллмана при 25oC в 0,2М Na-фосфатном буфере, pH 7,5. В качестве субстрата использовали иодид ацетилтиохолина фирмы "Chemapol" (ЧСФР). Эффективность обратимых ингибиторов определяли по методу А.П. Бресткина и характеризовали величиной обобщенной ингибиторной константы которая при смешанном типе торможения связана с конкурентной (Ki) и бесконкурентной (Ki1) составляющими соотношением
Активность цитохрома P450 определяли двумя методами: по скорости гидроксилирования 3,4-бенз/a/пирена, путем флуориметрического определения образующегося 4-гидроксибенз/a/пирена и по скорости диэтилирования 7-этоксикумарина путем флуориметрического определения образующегося 7-гидроксикумарина. Ингибирующее влияние исследуемых веществ на ЦТ P450 оценивали по величинам pJ50, представляющим собой обратный логарифм концентрации агента, вызывающей снижение активности на 50%.

Установлено, что цитизинилфосфаты и цитизинилтиофосфаты являются ингибиторами АХЭ средней силы и весьма эффективными ингибиторами БуХЭ. Наибольшую избирательность по отношению к БуХЭ наблюдали для производных тиофосфата (pK1-6.7 и pK1-6.1 соответственно).

Выявлены сильные ингибиторы цитохрома P450, имеющие перспективу для практического использования, среди них соединение с pJ50 - 5,55 и соединение с pJ50 - 5,70.

Похожие патенты RU2156130C1

название год авторы номер документа
Антибактериальные средства на основе производных ципрофлоксацина 2016
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Пугачев Михаил Владимирович
  • Павельев Роман Сергеевич
  • Иксанова Альфия Габдулахатовна
  • Никитина Елена Владимировна
  • Дзюркевич Михаил Станиславович
RU2636751C1
Фосфорсодержащие бетаины с липофильными октильными заместителями у атома азота, обладающие бактерицидной активностью 2022
  • Давлетшина Наталья Викторовна
  • Ермакова Екатерина Александровна
  • Долгова Диляра Рамилевна
  • Давлетшин Рустам Рифхатович
  • Галкина Ирина Васильевна
  • Шулаева Марина Петровна
  • Стойков Иван Иванович
  • Черкасов Рафаэль Асхатович
RU2794901C1
Четвертичные аммониевые соли на основе производных витамина В6 2015
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Сапожников Сергей Витальевич
  • Никитина Елена Владимировна
  • Иксанова Альфия Габдулахатовна
  • Каюмов Айрат Рашитович
RU2607522C1
ОСНОВАНИЯ ШИФФА 2-АМИНОИНДОЛА, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ 1994
  • Портнов Ю.Н.
  • Матвеева А.К.
  • Радкевич Л.А.
  • Остапчук Н.В.
  • Пынько Н.Э.
  • Забродняя В.Г.
  • Жестков В.П.
  • Буров Ю.В.
  • Смирнов Л.Д.
RU2084450C1
Глутатионаммониевые соли o,o-диорганилдитиофосфорных кислот, обладающие антиоксидантной и противоопухолевой активностью 2018
  • Низамов Ильяс Саидович
  • Абдуллин Тимур Илдарович
  • Ахмедова Гульназ Ринатовна
  • Низамов Ильнар Дамирович
  • Ахмадишина Резеда Анасовна
  • Кузнецова Елена Владимировна
  • Садриева Гульназ Раифовна
  • Сабирзянова Лейсан Рафаилевна
  • Черкасов Рафаэль Асхатович
RU2692065C1
2-АЛКОКСИ-2-ТИО-5-(N-ФЕНИЛКАРБАМОИЛ)-6-МЕТИЛ-1,4,2-ОКСАТИАФОСФОРИНЫ 1996
  • Козлов В.А.
  • Чурусова С.Г.
  • Яровенко С.В.
  • Абеленцев В.И.
  • Никитенко Т.К.
RU2105771C1
Четвертичные аммониевые соединения на основе производных пиридоксина и жирных карбоновых кислот, обладающие антибактериальной активностью 2022
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Сапожников Сергей Витальевич
  • Акчурин Альберт Сергеевич
  • Булатова Елена Сергеевна
  • Агафонова Мария Николаевна
RU2795265C1
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРОИЗВОДНЫЕ L-АМИНОКИСЛОТ, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ 1996
  • Сернов Л.Н.(Ru)
  • Скачилова С.Я.(Ru)
  • Радкевич Л.А.(Ru)
  • Ермакова Г.А.(Ru)
  • Остапчук Н.В.(Ru)
  • Пынько Н.Э.(Ru)
  • Бак Зу Так
  • Юн Гил Зу
  • Лян П.М.(Ru)
RU2131247C1
Бис-аммониевые соединения на основе пиридоксина, обладающие антибактериальными и антимикотическими свойствами 2020
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Пугачев Михаил Владимирович
  • Гарипов Марсель Радыикович
  • Сапожников Сергей Витальевич
  • Вафина Рузалия Масхутовна
  • Никитина Елена Владимировна
  • Крылова Елена Сергеевна
  • Агафонова Мария Николаевна
  • Лисовская Светлана Анатольевна
RU2731999C1
ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДОКСИНА С НЕЛИНЕЙНЫМИ ОПТИЧЕСКИМИ СВОЙСТВАМИ 2012
  • Штырлин Юрий Григорьевич
  • Стрельник Алексей Дмитриевич
  • Петухов Алексей Сергеевич
  • Гарипов Марсель Радыикович
  • Штырлин Никита Валерьевич
  • Лодочникова Ольга Александровна
  • Литвинов Игорь Анатольевич
  • Морозов Олег Александрович
  • Ловчев Александр Владимирович
RU2501801C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 156 130 C1

Реферат патента 2000 года ГЕПАТОПРОТЕКТОР

Изобретение касается нового гепатопротекторного средства. В качестве такого средства предложены известные фосфорсодержащие производные цитизина общей формулы

где n= 0; 1 при n=0 Х=S; O; R=CH3; C2H5; i-C3H7; C4H9; при n=1 Х=О; R= СН3; R'=i-C3H7; C6H5; .

Изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.

Формула изобретения RU 2 156 130 C1

1. Применение фосфорсодержащих производных цитизина общей формулы

где n = 0; 1, при n = 0 X = S; O; R = CH3; C2H5; C3H7; i - C3H7; C4H9; при n = 1 Х = О; R = CH3;
R' = i - C3H7; C6H5;
в качестве гепатопротектора.
2. Применение фосфорсодержащих производных цитизина по п.1 общей формулы

где n = 0; 1,
в качестве гепатопротектора.
3. Применение фосфорсодержащих производных цитизина по пп.1 и 2, где n = 1, в качестве лекарственного средства, обладающего гепатопротекторной активностью.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2000 года RU2156130C1

Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1
Венгеровский А.И
Эффективность и механизм действия гепатопротекторов при экспериментальном токсическом поражении печени
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
- М., 1991, с.5, 32-33
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
Chenucal Abstracts, 1995 July 31 v
Устройство для разметки подлежащих сортированию и резанию лесных материалов 1922
  • Войтинский Н.С.
  • Квятковский М.Ф.
SU123A1
Бетонный столб с металлической оболочкой 1925
  • Галахов П.Г.
SU976A1
УСТРОЙСТВО ДЛЯ АВТОМАТИЧЕСКОГО ОТРЕЗАНИЯ ЛИСТОВ ОТ ВЫТЯГИВАЕМОЙ ЛЕНТЫ СТЕКЛА НА МАШИНАХ ФУРКО 1937
  • Дворецкий Е.И.
SU56347A1
Gazaliev A.M
et.al., Synthesis and antienzymie aetivity of new khosphorus - containing derivatives of the alkaloid cytisine
Isv.Nats
Akad.Nauk Resp Kaz, Ser
Khim, 1994 (3) p.p.80-4
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. 1921
  • Богач Б.И.
SU3A1
Фазылов С.Д
и др
Образование N - диалкоксифосфорилметильных производных цитизина и их внутренних солей в условиях реакции Кабачника-Филдса
Журнал общей химии, - С-Пб: Наука, 1996, т.66 (128), вып.2, с.238-239.

RU 2 156 130 C1

Авторы

Витик Андрей Зиновьевич

Газалиев Арстан Мауленович

Гуляев Александр Евгеньевич

Даты

2000-09-20Публикация

1996-05-20Подача