Оксазолидиноны на основе производных пиридоксина, обладающие антибактериальной активностью Российский патент 2025 года по МПК C07D413/14 C07D491/56 C07D491/153 A61P31/04 

Изобретение относится к химии органических гетероциклических соединений, а именно к новым оксазолидинонам на основе производных пиридоксина общей формулы I, обладающих антибактериальной активностью. Соединения могут найти применение в медицине и ветеринарии.

,

где

Увеличение количества резистентных патогенных бактерий, обусловленное более чем полувековым применением антибиотиков в клинической практике и повсеместным неконтролируемым использованием, становится глобальной проблемой мирового здравоохранения. В частности, распространенность таких штаммов как метициллин-резистентный золотистый стафилококк (MRSA), метициллин-резистентный эпидермальный стафилококк (MRSE), пенициллин-резистентный пневмококк (PRSP), ванкомицин-резистентный энтерококк (VRE) и других грамположительных бактерий значительно снижает эффективность антибиотикотерапии [J.M. Munita, A.S. Bayer, C.A. Arias Evolving Resistance among Gram-positive Pathogens / Clin. Infect. Dis. - 2015. - V. 61. - P.48-57]. Одним из наиболее перспективных способов решения проблемы бактериальной резистентности является разработка принципиально новых антибактериальных препаратов с новым механизмом действия.

Оксазолидиноны являются одним из новых классов синтетических препаратов, обладающих высокой активностью в отношении широкого ряда грамположительных бактерий, в т.ч. резистентных штаммов, а также микобактерий туберкулеза [Diekema D. J., Jones R. N. Oxazolidinone antibiotics / Lancet. - 2001. - V. 358, Iss. 9297. - P. 1975-1982]. В настоящее время в клинической практике применяются три оксазолидиноновых антибактериальных препарата: линезолид, тедизолид фосфат и контезолид. Линезолид применяется для лечения бактериальных инфекций, вызванных грамположительными бактериями, а также используется в противотуберкулезной терапии в качестве препарата второго ряда [Shaw, K. J. The oxazolidinones: past, present, and future / K.J. Shaw, M.R. Barbachyn // Ann. N. Y. Acad. Sci. -2011. - V. 1241. - P. 48-70]. Тедизолид фосфат применяется для лечения пациентов с острыми бактериальными инфекциями кожи и подкожно-жировой клетчатки [Gras, J. Tedizolid phosphate for the treatment of acute bacterial skin and skin structure infections/ Drugs of Today. 2014. - V. 50. - P. 729–737]. В 2021 году Национальным управлением лекарственных средств Китая для лечения инфекций, вызываемых резистентными грамположительными бактериями, был одобрен новый препарат оксазолидинонового ряда контезолид [Hoy, S.M. Contezolid: First Approval / Drugs. - 2021. - V. 81. - P. 1587-1591].

Несмотря на высокую активность антибактериальных средств оксазолидинонового ряда следует отметить их существенные недостатки - отсутствие активности в отношении грамотрицательных бактерий и серьёзные побочные эффекты при длительном применении: тромбоцитопения, периферическая нейропатия, анемия, серотониновый синдром, лактоацидоз, миелосупрессия [Beekmann S. E., Gilbert D. N., Polgreen P. M. Toxicity of extended courses of linezolid: results of an Infectious Diseases Society of America Emerging Infections Network survey / Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2008. - V. 62, Iss. 4. - P. 407-410].

Антибактериальное действие оксазолидинонов основано на ингибировании синтеза белков. В отличие от других ингибиторов белкового синтеза, таких как хлорамфеникол, макролиды, линкозамиды и тетрациклины, оксазолидиноны связываются с 50S субъединицей прокариотической рибосомы и блокируют сборку комплекса инициации трансляции белка. В связи с уникальным механизмом действия оксазолидинонов перекрестная резистентность с существующими антибактериальными препаратами возникает крайне редко [Cui Y., Dang Y., Yang Y., Zhang S., Ji R. Syntheses and antibacterial activity of a series of 3-(pyridine-3-yl)-2- oxazolidinone / Eur. J. Med. Chem. - 2005. - V. 40, Iss. 2. - P. 209-214].

В настоящее время активно ведутся разработки новых препаратов оксазолидинонового ряда. Около десяти оксазолидинонов проходят различные стадии клинических исследований в качестве антибактериальных или противотуберкулезных средств [Yuan S., Shen D. -D., Bai Y. -R, Zhang M., Zhou T., Sun C., Zhou L., Wang S. -Q., Liu H. -M. Oxazolidinone: A promising scaffold for the development of antibacterial drugs / Eur. J. Med. Chem. - 2023. - V. 250. - P. 115239].

При разработке антибактериальных средств оксазолидинонового ряда исследователи часто модифицируют пиперазиновый фрагмент, выполняющий роль линкера между фармакофорным фрагментом и различными заместителями.

В работе [Srivastva B. K., Jain M. R., Solanki M., Soni R., Valani D., Gupta S., Mishra B., Takale V., Kapadnis P., Patel H., Pandya P., Patel J. Z., Patel P. R. Synthesis and in vitro antibacterial activities of novel oxazolidinones / Eur. J. Med. Chem. - 2008. - V. 43, Iss. 4. - P. 683-693] были синтезированы оксазолидиноны с гетероароматическими заместителями, введенными в 4-положение фторароматического фрагмента через пиперазиновый линкер. Исследования антибактериальной активности в отношении B. pumalis, B. cereus, S. pyogenes, S. epidermidis, E. faecalis, S. aureus показали, что ряд полученных соединений обладают высокой активностью (МПК 0.5-4 мкг/мл).

В статье [Gordeev M. F., Hackbarth C., Barbachyn M.R., Banitt L.S., Gage J.R., Luehr G.W., Gomez M., Trias J., Morin S.E., Zurenko G.E., Parker C.N., Evans J.M., White R. J., Patel D. V. Novel oxazolidinone-quinolone hybrid antimicrobials / Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2003. - V. 13, Iss. 23. - P. 4213-4216] синтезировали серию гибридных антибактериальных средств, в которых оксазолидиноновый фрагмент соединен с фторхинолоновым через пиперазиновый линкер. Полученные соединения проявили высокую активность в отношении устойчивых к линезолиду штаммов S. aureus и E. fecalis. Значения МПК для них составили 2-4 мкг/мл и 0.5-4 мкг/мл, соответственно.

В работе [Fan H., Xu G., Chen Y., Jiang Z., Zhang S., Yang Y., Ji R. Synthesis and antibacterial activity of oxazolidinones containing triazolyl group / Eur. J. Med. Chem. - 2007. - V. 42, Iss. 8. - P. 1137-1143] синтезировали ряд оксазолидиноновых производных, замещенных триазолом в положении С-5 и связанных в 4-положении фторароматического фрагмента с различными производными сульфонилзамещенного пиперазина. Соединения проявили более высокую по сравнению с линезолидом и ванкомицином активность в отношении как музейных, так и клинических штаммов S. aureus со значениями МПК 0.001-2 мкг/мл и 0.5-2 мкг/мл, соответственно.

Следует отметить, что описанные выше лекарственные средства, по мнению заявителя, не могут рассматриваться в качестве аналогов к заявленному изобретению вследствие того, что они не совпадают с заявленным соединением по химической структуре, хотя и обладают сходной в целом антибактериальной активностью (совпадают по назначению), сопоставимой с заявленным изобретением в большей или меньшей степени.

Техническим результатом заявленного технического решения является расширение арсенала известных средств указанного назначения путем создания новых соединений оксазолидинонового ряда, содержащих фрагменты производных пиридоксина, общей формулы I, обладающих высокой антибактериальной активностью, в т.ч. в отношении клинических штаммов грамположительных бактерий и биопленок, а также низкой токсичностью.

Сущностью заявленного технического решения являются оксазолидиноны на основе производных пиридоксина общей формулы I:

,

где

Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг.1 - Фиг.5.

На Фиг.1 приведена Таблица 1, в которой представлены значения МПК (минимальная подавляющая концентрация) оксазолидинонов на основе производных пиридоксина, а также препарата сравнения, в отношении эталонных грамположительных бактерий (мкг/мл).

На Фиг.2 приведена Таблица 2, в которой представлены значения МПК оксазолидинонов на основе производных пиридоксина, а также препарата сравнения, в отношении клинических штаммов грамположительных бактерий (мкг/мл).

На Фиг.3 приведена Таблица 3, в которой представлены значения СC₅₀ (мкг/мл) для исследуемых соединений и препарата сравнения в отношении условно-нормальных клеток человека.

На Фиг.4 на рисунке 1А представлен сравнительный анализ антибактериальной активности соединения I-3 и линезолида в отношении клеток грамположительных бактерий S. aureus, погруженных в матрикс биопленки; на рисунке 1Б приведен сравнительный анализ антибактериальной активности соединения I-3 и линезолида в отношении клеток грамположительных бактерий E. faecalis, погруженных в матрикс биопленки.

На Фиг.5 приведена Таблица 4, в которой представлены результаты исследования острой токсичности при внутрижелудочном способе введения соединения I-3 на мышах, где: - мужской пол, - женский пол (доза в мг/кг).

Далее заявителем приведено осуществление заявленного технического решения.

Заявленные соединения получают по схемам 1-5. Получение целевых соединений I-1 - I-14 осуществлялось по схожим методикам синтеза за исключением введения и снятия различных защитных групп. Первоначально в 3-5 стадий по литературным методикам были получены исходные производные пиридоксина 3, 11, 20, 33 и 41.

Ключевыми стадиями в синтезе нижеследующих цепочек являются:

- взаимодействие исходных соединений 3, 11, 20, 33 и 41 с 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазином с получением нитропроизводного;

- восстановление нитрогруппы водородом над палладиевым катализатором с получением аминопроизводного;

- взаимодействие ароматического амина с (S)-N-глицидилфталимидом с раскрытием эпоксидного цикла;

- формирование оксазолидинонового цикла путем взаимодействия продукта раскрытия эпоксидного цикла с N,N’-карбонилдиимидазолом;

- снятие фталимидной защиты гидразин гидратом;

- ацилирование аминогруппы ацетилхлоридом;

- последовательное снятие защитных групп водным раствором муравьиной или соляной кислот.

Схема 1. (a) (CH₃)₂CO, p-TsOH, толуол, кипячение, 8 ч; (b) SOCl₂, CHCl₃, 20 ^oC, 4 ч; (c) 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин, DIPEA, CH₃CN, кипячение, 3 ч; (d) H₂, Pd/C, CH₃OH, 50 ^oC, 6 ч; (e) (S)-N-глицидилфталимид, i-PrOH, кипячение, 24 ч; (f) CDI, толуол, кипячение, 1 ч; (g) N₂H₄*H₂O, CH₃OH, 50 ^oC, 6 ч; (h) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (i) HCl, H₂O, 20 ^oC, 24 ч; (j) HCl, H₂O, 20 ^oC, 1 ч.

Схема 2. (a) (CH₃)₂CO, HCl, 0 ^oC, 24 ч; (b) CH₂O, NaOH, H₂O, 70 ^oC, 60 ч; (c) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, , 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (d) 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин, CH₃CN, 60 ^oC, 30 ч; (e) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (f) H₂, Pd/C, CH₃OH, 50 ^oC, 1,5 ч; (g) (S)-N-глицидилфталимид, i-PrOH, кипячение, 24 ч; (h) CDI, толуол, кипячение, 1 ч; (i) N₂H₄*H₂O, CH₃OH, 50 ^oC, 3 ч; (j) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (k) HC(O)OH, H₂O, 20 ^oC, 24 ч; (l) HCl, H₂O, 50 ^oC, 20 ч.

Схема 3. (a) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 20 ^oC, 0,5 ч; (b) m-CPBA, CHCl₃, 20 ^oC, 48 ч; (c) Ac₂O, 90 ^oC, 1 ч; (d) 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин, CH₃CN, 60 ^oC, 16 ч; (e) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (f) H₂, Pd/C, CH₃OH, 50 ^oC, 4 ч; (g) хлорметилметиловый эфир, NaH, ДМФА, 20 ^oC, 24 ч; (h) (S)-N-глицидилфталимид, i-PrOH, кипячение, 24 ч; (i) CDI, толуол, кипячение, 1 ч; (j) N₂H₄*H₂O, CH₃OH, 50 ^oC, 4 ч; (k) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (l) HC(O)OH, H₂O, 20 ^oC, 24 ч; (m) HCl, H₂O, 50 ^oC, 10 ч.

Схема 4. (a) (CH₃)₂CO, HCl, 20 ^oC, 20 ч; (b) m-CPBA, CHCl₃, 20 ^oC, 48 ч; (c) Ac₂O, 100 ^oC, 4 ч; (d) CH₃ONa, CHCl₃, CH₃OH, 0 ^oC 20 ^oC, 2 ч; (e) MsCl, Et₃N, CHCl₃, кипячение, 5 ч; (f) 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин, DIPEA, CH₃CN, кипячение, 3 ч; (g) H₂, Pd/C, CH₃OH, 50 ^oC, 1,5 ч; (h) (S)-N-глицидилфталимид, i-PrOH, кипячение, 24 ч; (i) CDI, толуол, кипячение, 1 ч; (j) N₂H₄*H₂O, CH₃OH, 50 ^oC, 2 ч; (k) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (l) HC(O)OH, H₂O, 20 ^oC, 24 ч; (m) HCl, H₂O, 20 ^oC, 24 ч.

Схема 5. (a) Zn, CH₃C(O)OH, кипячение, 72 ч; (b) HCl, H₂O, 50 ^oC, 8 ч; (c) SOCl₂, ДМФА, кипячение, 5 ч; (d) 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин, DIPEA, CH₃CN, кипячение, 3 ч; (e) хлорметилметиловый эфир, NaH, ДМФА, 20 ^oC, 24 ч; (f) H₂, Pd/C, CH₃OH, 50 ^oC, 3 ч; (g) (S)-N-глицидилфталимид, i-PrOH, кипячение, 24 ч; (h) CDI, толуол, кипячение, 1 ч; (i) N₂H₄*H₂O, CH₃OH, 50 ^oC, 6 ч; (j) AcCl, Et₃N, CH₂Cl₂, 0 ^oC 20 ^oC, 0,5 ч; (k) HCl, H₂O, 50 ^oC, 20 ч.

Характеристики соединений приведены далее в примерах конкретного выполнения. Структуры полученных соединений подтверждены методами масс-спектрометрии, ¹Н и ¹³С ЯМР-спектроскопии. Спектры ЯМР регистрировали на приборе Bruker AVANCE-400. Химический сдвиг определялся относительно сигналов остаточных протонов дейтерированных растворителей (¹H и ¹³С). Температуры плавления определялись с помощью прибора Stanford Research Systems MPA-100 OptiMelt. Контроль за ходом реакций и чистотой соединений проводили методом ТСХ на пластинах Sorbfil Plates. Для определения угла вращения плоскости поляризации оптически активных веществ использовали поляриметр «ADP 440» (B + S).

HRMS-эксперимент был проведен с использованием масс-спектрометра сверхвысокого разрешения TripleTOF 5600, AB Sciex (Германия) из раствора в метаноле методом ионизации - турбоионный спрей (TIS) - при энергии столкновения с молекулами азота 10 еВ.

Примеры конкретного выполнения заявленного технического решения

Следующие соединения были получены по известным литературным методикам:

- соединения 3 и 33 [Pugachev M. V., Shtyrlin N. V., Sysoeva L. P., Nikitina E. V., Abdullin T. I., Iksanova A. G., Ilaeva A. A., Musin R. Z., Berdnikov E. A., Shtyrlin Y. G. Synthesis and antibacterial activity of novel phosphonium salts on the basis of pyridoxine / Bioorg. Med. Chem. - 2013 - V. 21, Iss. 14. - P. 4388-4395];

- соединение 41 [Shtyrlin N. V., Vafina R. M., Pugachev M. V., Khaziev R. M., Nikitina Е. V., Zeldi M. I., Iksanova A. G., Shtyrlin Y. G. Synthesis and biological activity of quaternary phosphonium salts based on 3-hydroxypyridine and 4-deoxypyridoxine / Russ. Chem. Bull. - 2016 - V. 65, Iss. 2. - P. 537-545];

- соединение 11 [Shtyrlin N. V., Dobrynin A. B., Madzhidov T. I., Pugachev M. V., Sysoeva L. P., Musin R. Z., Litvinov I. A., Klimovitskii E. N., Shtyrlin Y. G. Experimental and Theoretical Study on 6-Substituted Pyridoxine Derivatives. Synthesis of Cyclic 2,4,5,6-Tetrakis- (hydroxymethyl)pyridin-3-ol Acetonides / Russ. J. Org. Chem. - 2011 - V. 47, Iss. 1. - P. 100-108];

- соединение 20 [Iwata M., Kuzuhara H., Emoto S. A novel acetyl migration reaction from oxygen to oxygen in a pyridoxine derivative promoted by metal ions / Chem. Lett. - 1976 - V. 5, Iss. 1. - P. 17-18].

Пример 1. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-1)

Синтез 5-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридина (промежуточное вещество 4)

К смеси 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазина (21,57 г; 95,8 ммоль) и DIPEA (13,50 г; 104,5 ммоль;) в 150 мл ацетонитрила добавляли при перемешивании соединение 3 (23,00 г; 87,1 ммоль). Реакцию проводили при кипячении с обратным холодильником и постоянном перемешивании в течение 3 ч. Растворитель удаляли в вакууме. Очистку полученного соединения проводили методом колоночной хроматографии (элюент - этилацетат). Выход 89% (32,20 г); оранжевое кристаллическое вещество; т. пл. 157-159 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.54 (с, 6H, (CH₃)₂C), 2.39 (с, 3H, CH₃), 2.55-2.57 (м, 4H, 2СH₂N), 3.24-3.26 (м, 4H, 2CH₂N), 3.42 (c, 2H, CH₂), 4.98 (с, 2H, CH₂), 6.86 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.86 (дд, 1H, ³J_HF = 13.1 Гц, ⁴J_HН = 2.6 Гц, CH_Ar), 7.88 (c, 1H, CH_Ar), 7.94 (дд, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HН = 2.6 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.58 (с, CH₃), 24.86 (с, (CH₃)₂C), 49.82 (д, J = 5.0 Гц, CH₂), 52.77 (c, CH₂), 57.67 (c, CH₂), 58.93 (c, CH₂), 99.72 (c, (CH₃)₂C), 112.69 (д, J_CF =26.4 Гц, C_Ar), 117.21 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 121.04 (д, J_CF = 1.9 Гц, C_Ar ), 126.36 (c, C_Ar), 126.49 (c, C_Ar), 140.69 (c, C_Ar), 140.79 (c, C_Ar), 145.59 (д, J_CF = 7.5 Гц, C_Ar), 146.27 (c, C_Ar), 147.80 (с, C_Ar), 153.16 (д, J_CF = 249.4 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 417.1936 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₁H₂₆FN₄O₄] ⁺ 417.1933.

Синтез 3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)анилина (промежуточное вещество 5)

Соединение 4 (32,13 г; 77,2 ммоль) растворяли в минимальном объеме метанола, добавляли 10 % Pd/C (1,60 г). Реакцию проводили при 50 °C и постоянном перемешивании в атмосфере водорода (p=0,23-0,25 мПа) в течение 6 ч. Раствор отфильтровывали от катализатора, фильтрат высушивали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - этилацетат). Выход 76% (22,63 г); светло-коричневое кристаллическое вещество; т. пл. 163-166 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.54 (с, 6H, (CH₃)₂C), 2.39 (с, 3H, CH₃), 2.52-2.55. (м, 4H, 2СH₂N), 2.90-2.93 (м, 4H, 2CH₂N), 3.40 (c, 2H, CH₂), 4.98 (с, 2H, CH₂), 6.34-6.40 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.72-6.77 (м, 1H, СH_Ar), 7.88 (c, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.47 (с, CH₃), 24.85 (с, (CH₃)₂C), 51.52 (c, CH₂), 53.30 (c, CH₂), 57.79 (c, CH₂), 59.05 (c, CH₂), 99.66 (c, (CH₃)₂C), 103.99 (д, J_CF = 23.9 Гц, C_Ar), 110.70 (д, J_CF = 2.3 Гц, C_Ar), 120.60 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 126.73 (c, C_Ar), 127.00 (c, C_Ar), 131.94 (д, J_CF = 9.8 Гц, C_Ar), 140.54 (c, C_Ar), 142.85 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 146.23 (c, C_Ar), 147.39 (c, C_Ar), 156.91 (д, J_CF = 245.6 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 387.2191 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₁H₂₈FN₄O₂] ⁺ 387.2191.

Синтез (R)-2-(3-((3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)амино)-2-гидроксипропил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 6)

К раствору соединения 5 (22,60 г; 58,5 ммоль) в 200 мл изопропанола, добавляли S-(N)-глицидилфталимид (17,82 г; 87,7 ммоль) тремя равными порциями через каждые 8 часов. Реакцию проводили при кипячении в течение 24 ч. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - смесь дихлорметан:изопропанол = 10:1). Выход 28% (9,50 г); оранжевое кристаллическое вещество; т. пл. 72-75 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.56 (с, 6H, (CH₃)₂C), 2.43 (с, 3H, CH₃), 2.59 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.96 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.11 (дд, 1H, ²J_HH =13.1 Гц, ³J_HH =6.8 Гц, HCH), 3.21 (дд, 1H, ²J_HH =13.1 Гц, ³J_HH =4.8 Гц, HCH), 3.41 (уш. с, 2Н, СН₂), 3.89-3.91 (м, 2H, CH₂), 4.11-4.16 (м, 1Н, CH), 5.02 (с, 2H, CH₂), 6.36-6.43 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.80 (т, 1H, ³J_HН =8.9 Гц, ⁴J_HF = 8.9 Гц, CH_Ar), 7.73-7.75 (м, 2H, 2CH_Ar), 7.85-7.87 (м, 2H, 2CH_Ar), 7.92 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.55 (с, CH₃), 24.85 (с, (CH₃)₂C), 42.20 (с, СН₂), 47.88 (c, СН₂), 51.54 (c, СН₂), 53.25 (c, СН₂), 57.82 (c, CH₂), 59.06 (c, CH₂), 68.84 (с, СH), 99.64 (c, (CH₃)₂C), 102.15 (д, J_CF =24.4 Гц, C_Ar), 108.85 (д, J_CF = 2.56 Гц, C_Ar), 120.48 (д, J_CF =4.2 Гц, C_Ar), 123.51-123.68 (м, C_Ar), 126.72 (c, C_Ar), 130.52 (c, C_Ar), 130.66 (c, C_Ar), 131.37 (c, C_Ar), 131.91 (c, C_Ar), 134.22 (д, J= 11.3 Гц, C_Ar), 134.43 (c, C_Ar), 140.49 (c, C_Ar), 144.73 (д, J_CF =10.0 Гц C_Ar), 146.19 (c, C_Ar), 147.38 (c, C_Ar), 157.01 (д, J_CF =244.9 Гц, C_Ar), 169.12 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 590.2779 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₂H₃₇FN₅O₅] ⁺ 590.2774.

Синтез (S)-2-((3-(3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 7)

К соединению 6 (9,54 г; 16,2 ммоль) добавляли N,N’-карбонилдиимидазол (3,67 г; 22,7 ммоль) и 100 мл толуола. Реакцию проводили при кипячении в течение 1 ч. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - смесь МТБЭ:ацетон=1:1). Выход 74% (7,35 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 134-136 °С. [α]_D²⁵ -44.1 (c 0.89, CH₂Сl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.55 (с, 6H, (CH₃)₂C), 2.41 (с, 3H, CH₃), 2.57 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.02 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.44 (с, 2H, CH₂), 3.85 (дд, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 6.0 Гц, HCH), 3.96 (дд, 1H, ²J_HH = 14.2 Гц, ³J_HH = 6.0 Гц, HCH), 4.07 (т, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 9.0 Гц, HCH), 4.13 (дд, 1H, ²J_HH = 14.2 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 4.93-4.98 (м, 1Н, CH), 5.00 (с, 2H, CH₂), 6.88 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.08 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.38 (дд, 1H, ³J_HF = 14.2 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.74-7.77 (м, 2H, 2CH_Ar), 7.86-7.88 (м, 2H, 2CH_Ar), 7.90 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.40 (с, CH₃), 24.86 (с, (CH₃)₂C), 40.87 (с, СН₂), 48.60 (с, CH₂), 50.72 (c, CH₂), 53.04 (c, CH₂), 57.68 (c, CH₂), 59.01 (c, CH₂), 69.68 (c, CH₂), 99.66 (c, (CH₃)₂C), 107.65 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 114.11 (д, J_CF = 2.6 Гц, C_Ar), 119.13 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 123.84 (c, C_Ar), 126.86 (c, C_Ar), 131.78 (c, C_Ar), 132.90 (д, J_CF = 10.6 Гц, C_Ar), 134.60 (c, C_Ar), 136.67 (д, J_CF = 8.9 Гц, C_Ar), 140.54 (c, C_Ar), 146.32 (c, C_Ar), 147.35 (c, C_Ar), 153.92 (c, C=O), 155.54 (д, J_CF = 246.3 Гц, C_Ar), 168.10 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 616.2571 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₃H₃₅FN₅O₆] ⁺ 616.2566.

Синтез (S)-5-(аминометил)-3-(3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)оксазолидин-2-она (промежуточное вещество 8)

К соединению 7 (7,30 г; 11,9 ммоль) в 80 мл метанола добавляли гидразин гидрат (3,56 г; 71,1 ммоль). Реакцию проводили при 50 °C и перемешивании в течение 6 ч. Растворитель удаляли в вакууме. К остатку приливали 80 мл дихлорметана и перемешивали при 40 °C в течение 10 мин. Осадок отфильтровывали и промывали дихлорметаном_. Фильтрат концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент -дихлорметан:изопропанол:семинормальный раствор аммиака в метаноле = 80:20:1 дихлорметан:метанол: семинормальный раствор аммиака в метаноле = 80:20:1). Выход 80% (4,58 г); жёлтое маслообразное вещество. [α]_D²⁵ -32.5 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.54 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.39 (с, 3H, CH₃), 2.46 (уш. с, 2H, NH₂), 2.54 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.99 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.99-3.04 (м, 1H, CH₂), 3.14 (дд, 1H, ²J_HH = 13.7 Гц, ³J_HH = 3.7 Гц, HCH), 3.41 (с, 2H, CH₂), 3.78 (дд, 1H, ²J_HH = 8.8 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 4.00 (т, 1H, ²J_HH = 8.8 Гц, ³J_HH = 8.8 Гц, HCH), 4.68-4.75 (м, 1Н, CH), 4.98 (с, 2H, CH₂), 6.87 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.08 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.39 (дд, 1H, ³J_HF = 14.3 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.88 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.54 (с, CH₃), 24.85 (с, (CH₃)₂C), 44.82 (c, CH₂), 47.88 (c, CH₂), 50.81 (д, J = 2.9 Гц, CH₂), 53.06 (c, CH₂), 57.75 (c, CH₂), 58.99 (c, CH₂), 73.43 (c, CH), 99.67 (c, (CH₃)₂C), 107.48 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 113.96 (д, J_CF = 3.3 Гц, C_Ar), 119.13 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 126.67 (c, C_Ar), 126.86 (c, C_Ar), 133.17 (д, J_CF = 10.5 Гц, C_Ar), 136.52 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 140.50 (c, C_Ar), 146.22 (c, C_Ar), 147.48 (c, C_Ar), 154.71 (c, C=O), 155.54 (д, J_CF = 246.3 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 486.2516 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₅H₃₃FN₅O₄] ⁺ 486.2512.

Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((2,2,8-триметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-1)

К раствору соединения 8 (4,55 г; 9,4 ммоль) в 50 мл дихлорметана последовательно добавляли триэтиламин (1,42 г; 14,1 ммоль) и ацетилхлорид (0,88 г; 11,2 ммоль) при 0 °С и постоянном перемешивании. Реакцию проводили при перемешивании и комнатной температуре в течении 0,5 ч. Реакционную смесь промывали 100 мл 5 %-ного водного раствора гидрокарбоната натрия, органический слой отделяли и высушивали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:этанол = 4:1). Выход 90% (4,44 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 84-87 °С. [α]_D²⁵ -18.2 (c 0.24, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.55 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.01 (c, 3H, CH_3Ac), 2.42 (с, 3H, CH₃), 2.58 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.02 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.44 (с, 2H, CH₂), 3.59 (м, 3H, CH₂+HCH), 4.00 (т, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 9.0 Гц, HCH), 4.72-4.78 (м, 1Н, CH), 5.00 (с, 2H, CH₂), 6.31 (т, 1H, ³J_HН = 6.1 Гц, NH), 6.88 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.04 (дд, 1H, ³J_HH =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.40 (дд, 1H, ³J_HF = 14.3 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.91 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 18.29 (с, CH₃), 23.25 (с, CH₃), 24.87 (с, (CH₃)₂C), 42.09 (c, CH₂), 47.78 (c, CH₂), 50.69 (c, CH₂), 53.06 (c, CH₂), 57.64 (c, CH₂), 59.02 (c, CH₂), 72.00 (c, CH), 99.87 (c, (CH₃)₂C), 107.58 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 113.98 (д, J_CF = 3.2 Гц, C_Ar), 119.18 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 126.97 (c, C_Ar), 127.26 (c, C_Ar), 132.88 (д, J_CF = 10.5 Гц, C_Ar), 136.69 (д, J_CF = 9.3 Гц, C_Ar), 139.93 (c, C_Ar), 146.41 (c, C_Ar), 147.30 (c, C_Ar), 154.44 (c, C=O), 155.56 (д, J_CF = 246.5 Гц, C_Ar), 171.22 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 528.2622 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₇H₃₅FN₅O₅] ⁺ 528.2617.

Пример 2. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-гидрокси-4-(гидроксиметил)-6-метилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-2)

К соединению I-1 (4,35 г; 8,2 ммоль) добавляли 50 мл водного раствора концентрированной соляной кислоты и перемешивали при 20 °C в течение 24 ч. Раствор нейтрализовывали водным раствором гидрокарбоната натрия до pH=6. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в метаноле и отфильтровывали от неорганических солей. Фильтрат концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - этанол). Выход 91% (3,94 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 123-125 °С. [α]_D²⁵ -18.2 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (c, 3H, CH_3Ac), 2.44 (с, 3H, CH₃), 2.65 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.01 (уш. с., 4H, 2CH₂N), 3.54 (д, 2H, ³J_HH = 4.9 Гц, CH₂), 3.62 (с, 2H, CH₂), 3.76 (дд, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 6.5 Гц, HCH), 4.08 (т, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 9.0 Гц, HCH), 4.73-4.79 (м, 1Н, CH), 4.88 (c, 2H, CH₂), 6.96-7.02 (м, 1H, CH_Ar), 7.10-7.12 (м, 1H, CH_Ar), 7.46 (дд, 1H, ³J_HF = 14.5 Гц, ⁴J_HН = 2.2 Гц, CH_Ar), 7.83 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 18.96 (с, CH₃), 22.43 (с, CH₃), 43.14 (c, CH₂), 49.10 (c, CH₂), 51.77 (д, J = 2.9 Гц, CH₂), 53.69 (c, CH₂), 57.73 (c, CH₂), 58.82 (c, CH₂), 73.43 (c, CH), 108.38 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 115.41 (д, J_CF = 2.8 Гц, C_Ar), 120.40 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 132.07 (c, C_Ar), 134.91 (д, J_CF = 10.5 Гц, C_Ar), 136.54 (c, C_Ar), 137.36 (д, J_CF = 9.3 Гц, C_Ar), 140.90 (c, C_Ar), 148.56 (c, C_Ar), 152.14 (c, C_Ar), 156.54 (c, C=O), 156.69 (д, J_CF = 244.9 Гц, C_Ar), 174.01 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 488.2309 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₁FN₅O₅] ⁺ 488.2304.

Пример 3. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-гидрокси-4-(гидроксиметил)-6-метилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамид гидрохлорида (I-3)

К соединению I-2 (2,82 г; 5,79 ммоль) добавляли 57,86 мл водного раствора 0,1 нормальной соляной кислоты (0,21 г; 5,79 ммоль) и перемешивали при 20°C в течение 1 ч до полного растворения осадка. Растворитель удаляли в вакууме. Выход количественный (2,91 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 66-68 °С. [α]_D²⁵ -15.2 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 1.82 (c, 3H, CH_3Ac), 2.46 (с, 3H, CH₃), 3.27 (уш. с, 8H, 4СH₂N), 3.39 (т, 2H, ³J_HH =5.5 Гц, CH₂), 3.73 (дд, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =6.4 Гц, HCH), 4.07 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, HCH), 4.40 (уш. с, 2H, CH₂), 4.67-4.73 (м, 1Н, CH), 4.85 (с, 2H, CH₂), 7.09 (т, 1H, ³J_HН = 9.3 Гц, ⁴J_HF = 9.3 Гц, CH_Ar), 7.19 (дд, 1H, ³J_HH = 9.3 Гц, ⁴J_HН = 2.3 Гц, CH_Ar), 7.50 (дд, 1H, ³J_HF = 14.8 Гц, ⁴J_HН = 2.3 Гц, CH_Ar), 8.29 (с, 1H, CH_Ar), 8.38 (т, 1H, ³J_HН = 5.8 Гц, NH).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 18.56 (c, CH₃), 22.51 (с, CH₃), 41.40 (c, CH₂), 47.35 (c, CH₂), 47.56 (c, CH₂), 51.15 (с, CH₂), 53.89 (c, CH₂), 55.53 (c, CH₂), 71.56 (c, CH), 106.64 (д, J_CF = 26.0 Гц, C_Ar), 114.09 (д, J_CF = 2.0 Гц, C_Ar), 119.20 (c, C_Ar), 119.80 (д, J_CF = 2.8 Гц, C_Ar), 134.06 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 134.22 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 137.59 (c, C_Ar), 140.52 (c, C_Ar), 147.16 (c, C_Ar), 150.32 (c, C_Ar), 154.10 (c, C=O), 154.54 (д, J_CF = 243.8 Гц, C_Ar), 170.08 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 488.2310 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₁FN₅O₅] ⁺ 488.2304.

Пример 4. Получение (S)-6-((4-(4-(5-(ацетамидометил)-2-оксооксазолидин-3-ил)-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (I-4)

Синтез 6-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ола (промежуточное вещество 12)

К смеси соединения 11 (12,00 г; 37,1 ммоль) и 1-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазина (16,72 г; 74,2 ммоль) приливали 60 мл ацетонитрила. Реакционную смесь перемешивали при 60 °С в течение 30 часов. Раствор оставляли при температуре 8 °С на 1 ч, выпавший осадок отфильтровывали и промывали холодной смесью ацетонитрил:диэтиловый эфир = 1:6. Осадок два раза промывали порциями воды по 50 мл и высушивали. Выход 52% (8,55 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 221-225 °С.

Спектр ¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 1.41 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.32 (с, 3H, CH₃), 2.46 (уш.с, 4H, 2СH₂N), 3.23 (уш.с, 4H, 2CH₂N), 3.50 (с, 2Н, СН₂), 4.81 (с, 2H, CH₂), 4.91 (с, 2H, CH₂), 7.12 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.97-8.00 (м, 2H, 2CH_Ar), 8.72 (с, 1H, OH).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 19.26 (с, CH₃), 23.66 (c, C(CH₃)₂), 49.29 (д, J_CF = 5.1 Гц, CH₂), 52.22 (с, СН₂), 58.90 (c, CH₂), 59.91 (c, CH₂), 62.46 (c, CH₂), 101.68 (c, C(CH₃)₂), 112.21 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 117.93 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 121.26 (д, J_CF = 2.2 Гц, C_Ar), 132.18 (c, C_Ar), 134.77 (c, C_Ar), 139.28 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 142.46 (c, C_Ar), 144.14 (c, C_Ar), 145.41 (д, J_CF = 7.2 Гц, C_Ar), 146.75 (c, C_Ar), 152.01 (д, J_CF = 247.5 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 447.2044 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₂H₂₈FN₄O₅] ⁺ 447.2039.

Синтез 6-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-с ]пиридин-9-ил ацетата (промежуточное вещество 13)

К смеси соединения 12 (8,52 г; 19,1 ммоль) и триэтиламина (2,89 г; 28,6 ммоль) в 40 мл дихлорметана при 0 °С и постоянном перемешивании прикапывали раствор ацетилхлорида (1,80 г; 22,9 ммоль) в 10 мл дихлорметана. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, после чего промывали 50 мл 5 %-ного водного раствора гидрокарбоната натрия, органический слой отделяли и высушивали. Выход количественный (9,32 г); оранжевое кристаллическое вещество; т. пл. 74-78 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.34 (c, 3H, CH₃), 2.36 (с, 3H, CH₃), 2.60-2.62 (м, 4H, 2СH₂N), 3.25-3.28 (м, 4H, 2CH₂N), 3.65 (с, 2Н, СН₂), 4.72 (с, 2H, CH₂), 5.02 (с, 2H, CH₂), 6.87 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.89 (дд, 1H, ³J_HF = 13.1 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.97 (дд, 1Н, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.06 (с, CH₃), 20.56 (с, CH₃), 23.81 (c, C(CH₃)₂), 49.76 (д, J_CF = 4.9 Гц, CH₂), 52.68 (с, CH₂), 59.12 (с, СН₂), 60.87 (c, CH₂), 63.39 (c, CH₂), 102.63 (c, C(CH₃)₂), 112.69 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 117.13 (д, J_CF = 3.8 Гц, C_Ar), 121.11 (д, J_CF = 2.1 Гц, C_Ar), 133.08 (c, C_Ar), 140.57 (c, C_Ar), 142.15 (c, C_Ar), 145.75 (д, J_CF = 7.7 Гц, C_Ar), 148.02 (c, C_Ar), 150.96 (c, C_Ar), 153.08 (д, J_CF = 249.7 Гц, C_Ar), 168.44 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 489.2149 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₀FN₄O₆] ⁺ 489.2144.

Синтез 6-((4-(4-амино-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (промежуточное вещество 14)

Синтезировали аналогично соединению 5 в течение 1,5 ч. Раствор отфильтровывали от катализатора, фильтрат высушивали в вакууме. Остаток перемешивали в ацетоне при 50 °C в течение 10 мин и охлаждали до температуры 8 °С. Осадок отфильтровывали и промывали охлажденным до 8 ⁰С ацетоном. Выход 70% (6,51 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 201-205 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.33 (c, 3H, CH₃), 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.59 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.93 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.64 (с, 2Н, СН₂), 4.71 (с, 2H, CH₂), 5.02 (с, 2H, CH₂), 6.36-6.42 (м, 2H, СН_Ar), 6.76 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.02 (с, CH₃), 20.53 (c, CH₃), 23.82 (с, C(CH₃)₂), 51.51 (с, CH₂), 53.17 (с, CH₂), 59.08 (с, СН₂), 61.06 (c, CH₂), 63.54 (c, CH₂), 102.56 (c, C(CH₃)₂), 104.03 (д, J_CF = 23.8 Гц, C_Ar), 110.68 (д, J_CF = 2.5 Гц, C_Ar), 120.37 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 132.11 (д, J_CF = 8.3 Гц, C_Ar), 133.09 (c, C_Ar), 140.39 (c, C_Ar), 142.01 (c, C_Ar), 142.61 (д, J_CF = 10.1 Гц, C_Ar), 147.77 (c, C_Ar), 151.62 (c, C_Ar), 156.77 (д, J_CF = 245.4 Гц, C_Ar), 168.44 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 459.2404 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₂FN₄O₄] ⁺ 459.2403.

Синтез (R)-6-((4-(4-((3-(1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-2-гидроксипропил)амино)-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (промежуточное вещество 15)

Синтезировали аналогично соединению 6. Очистка проводилась в два этапа с помощью колоночной хроматографии: 1-ый этап - (элюент - смесь толуол:изопропанол = 5:1), 2-ой - (элюент - этилацетат). Выход 48% (2,41 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 109-113 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.33 (c, 3H, CH₃), 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.58 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.93 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.10 (дд, 1H, ²J_HH = 13.0 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 3.20 (дд, 1H, ²J_HH = 13.0 Гц, ³J_HH = 4.6 Гц, HCH), 3.63 (с, 2Н, СН₂), 3.87-3.89 (м, 2Н, СН₂), 4.21 (уш. с, 1Н, СН), 4.71 (с, 2H, CH₂), 5.02 (с, 2H, CH₂), 6.35-6.42 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.77-6.83 (м, 1H, CH_Ar), 7.69-7.74 (м, 2Н, 2CH_Phtal), 7.81-7.86 (м, 2Н, 2CH_Phtal).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.03 (с, CH₃), 20.56 (c, CH₃), 23.82 (с, C(CH₃)₂), 42.18 (с, СН₂), 47.89 (с, СН₂), 51.54 (c, CH₂), 53.16 (с, CH₂), 59.08 (с, СН₂), 61.07 (c, CH₂), 63.57 (c, CH₂), 68.93 (c, CH), 102.11 (c, C(CH₃)₂, 102.46 (д, J_CF = 22.3 Гц, C_Ar), 108.84 (д, J_CF = 2.2 Гц, C_Ar), 120.41 (д, J_CF = 4.4 Гц, C_Ar), 123.60-123.69 (м, C_Ar), 131.56 (д, J_CF = 9.8 Гц, C_Ar), 131.91 (с, C_Ar), 133.07 (с, C_Ar), 134.27-134.44 (м, C_Ar), 140.37 (с, C_Ar), 141.99 (с, C_Ar), 144.56 (д, J_CF = 10.1 Гц, C_Ar), 147.75 (с, C_Ar), 151.69 (с, C_Ar), 156.97 (д, J_CF = 245.1 Гц, C_Ar), 168.47 (c, C=O), 169.13 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 662.2990 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₅H₄₁FN₅O₇] ⁺ 662.2985.

Синтез (S)-6-((4-(4-(5-((1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)метил)-2-оксооксазолидин-3-ил)-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (промежуточное вещество 16)

Синтезировали аналогично соединению 7. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - этилацетат). Выход 47% (1,00 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 119-123 °С. [α]_D²⁵ -40.5 (c 0.21, CH₂Сl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.34 (c, 3H, CH₃), 2.35 (с, 3H, CH₃), 2.61 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.02 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.65 (уш. с, 2Н, СН₂), 3.85 (дд, 1H, ²J_HH = 8.9 Гц, ³J_HH = 6.0 Гц, HCH), 3.96 (дд, 1H, ²J_HH = 14.2 Гц, ³J_HH = 5.8 Гц, HCH), 4.07 (т, 1H, ²J_HH = 8.9 Гц, ³J_HH = 8.9 Гц, HCH), 4.13 (дд, 1H, ²J_HH = 14.2 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 4.72 (с, 2H, CH₂), 4.93-5.00 (м, 1Н, СН), 5.03 (с, 2H, CH₂), 6.89 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.07-7.09 (м, 1H, CH_Ar), 7.35-7.39 (м, 1Н, СН_Ar), 7.75-7.77 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.87-7.89 (м, 2H, 2CH_Phtal).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.03 (с, CH₃), 20.56 (c, CH₃), 23.82 (с, C(CH₃)₂), 40.89 (с, СН₂), 48.63 (с, СН₂), 50.80 (д, J_CF = 2.8 Гц, СН₂), 52.96 (с, CH₂), 59.10 (с, СН₂), 61.00 (c, CH₂), 63.50 (c, CH₂), 69.68 (c, CH), 102.59 (c, C(CH₃)₂), 107.67 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar ),114.15 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 119.11 (д, J_CF = 4.3 Гц, C_Ar), 123.83 (с, C_Ar), 131.81 (c, C_Ar), 132.73 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 133.08 (c, C_Ar), 134.57 (c, C_Ar), 136.93 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 140.44 (c, C_Ar), 142.05 (c, C_Ar), 147.84 (c, C_Ar), 151.46 (c, C_Ar), 153.94 (c, C=O), 155.54 (д, J_CF = 246.6 Гц, C_Ar), 168.11 (c, C=O), 168.46 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 688.2783 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₆H₃₉FN₅O₈] ⁺ 688.2778.

Синтез (S)-5-(аминометил)-3-(3-фтор-4-(4-((9-гидрокси-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)оксазолидин-2-она (промежуточное вещество 17)

Синтезировали в течение 3 ч и разрабатывали аналогично соединению 8. Выход 72% (0,51 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 178-182 °С. [α]_D²⁵ -40.7 (c 0.36, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 1.41 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.32 (с, 3H, CH₃), 2.46 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.78 (дд, 1H, ²J_HН = 13.7 Гц, ³J_HН = 5.0 Гц, HCH), 2.84 (дд, 1H, ²J_HН = 13.7 Гц, ³J_HН = 5.0 Гц, HCH), 2.91 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.50 (с, 2H, CH₂), 3.81 (дд, 1H, ²J_HH = 8.9 Гц, ³J_HH = 6.5 Гц, HCH), 4.01 (т, 1H, ²J_HH = 8.9 Гц, ³J_HH =8.9 Гц, HCH), 4.56-4.62 (м, 1Н, CH), 4.81 (с, 2H, CH₂), 4.91 (с, 2H, CH₂), 7.03 (т, 1H, ³J_HН = 9.4 Гц, ⁴J_HF = 9.4 Гц, CH_Ar), 7.17 (дд, 1H, ³J_HH = 9.4 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.48 (дд, 1Н, ³J_HF = 15.0 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 19.29 (с, CH₃), 23.69 (c, C(CH₃)₂), 44.12 (с, CH₂), 47.06 (с, CH₂), 50.48 (с, CH₂), 52.56 (с, СН₂), 58.93 (c, CH₂), 59.92 (c, CH₂), 62.61 (c, CH₂), 73.78 (c, CH), 101.68 (c, C(CH₃)₂), 106.44 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 113.86 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 119.39 (д, J_CF = 4.3 Гц, C_Ar), 132.15 (c, C_Ar), 133.46 (д, J_CF = 10.7 Гц, C_Ar), 134.79 (c, C_Ar), 135.59 (д, J_CF = 8.9 Гц, C_Ar), 142.45 (c, C_Ar), 144.36 (c, C_Ar), 146.74 (c, C_Ar), 154.36 (c C=O), 154.57 (д, J_CF = 243.6 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 516.2622 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₆H₃₅FN₅O₅] ⁺ 516.2617.

Получение (S)-6-((4-(4-(5-(ацетамидометил)-2-оксооксазолидин-3-ил)-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,8-триметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (I-4)

К смеси соединения 17 (0,46 г; 0,89 ммоль) и триэтиламина (0,23 г; 2,2 ммоль) в 15 мл дихлорметана при 0 °С и постоянном перемешивании по каплям добавляли ацетилхлорид (0,15 г; 2,0 ммоль). Реакцию проводили в течение 0,5 ч, после чего реакционную смесь промывали30 мл 5 %-ного водного раствора гидрокарбоната натрия, органический слой отделяли и высушивали. Выход количественный (0,53 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 112-116 °С. [α]_D²⁵ -11.9 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.00 (с, 3H, CH_3Ac), 2.33 (c, 3H, CH₃), 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.63 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.04 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.55-3.70 (м, 4H, 2CH₂), 3.72 (дд, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 3.99 (т, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 9.0 Гц, HCH), 4.71 (с, 2H, CH₂), 4.73-4.78 (м, 1Н, CH), 5.02 (с, 2H, CH₂), 6.28 (т, 1H, ³J_HH = 6.2 Гц, NH), 6.89 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.03 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HH = 2.3 Гц, CH_Ar), 7.40 (дд, 1Н, ³J_HF = 14.2 Гц, ⁴J_HH = 2.3 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.04 (с, CH₃), 20.54 (с, CH₃), 23.20 (c, CH₃), 23.79 (c, C(CH₃)₂), 42.05 (с, CH₂), 47.75 (с, CH₂), 50.58 (уш. с, CH₂), 52.90 (с, СН₂), 59.07 (c, CH₂), 60.95 (c, CH₂), 72.00 (c, CH), 102.61 (c, C(CH₃)₂), 107.55 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 113.96 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 119.14 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 132.74 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 133.17 (c, C_Ar), 136.70 (д, J_CF = 8.0 Гц, C_Ar), 140.55 (c, C_Ar), 142.12 (c, C_Ar), 148.04 (c, C_Ar), 154.48 (c, C=O), 155.45 (д, J_CF = 246.4 Гц, C_Ar), 168.43 (c, C=O), 171.25 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 600.2834 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₀H₃₉FN₅O₇] ⁺ 600.2829.

Пример 5. Получение (S)-6-((4-(4-(5-(ацетамидометил)-2-оксооксазолидин-3-ил)-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-4,5-бис(гидроксиметил)-2-метилпиридин-3-ил ацетата (I-5)

К соединению I-4 (0,25 г; 0,42 ммоль) добавляли раствор муравьиной кислоты (0,38 г; 8,26 ммоль) в 5 мл воды. Реакцию проводили при комнатной температуре и постоянном перемешивании в течение 24 ч. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в 10 мл дихлорметана и нейтрализовывали триэтиламином. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:этанол = 4:1). Выход 79% (0,19 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 84-88 °С. [α]_D²⁵ -22.5 (c 0.30, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.00 (с, 3H, CH₃), 2.12 (с, 3H, CH₃), 2.49 (с, 3H, CH₃), 2.75 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.03 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.55-3.74 (м, 3H, CH₂+HCH), 3.85 (с, 2H, CH₂), 3.99 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, HCH), 4.68 (с, 2H, CH₂), 4.72-4.78 (м, 1Н, CH), 5.25 (с, 2H, CH₂), 6.41 (т, 1H, ³J_HH = 6.1 Гц, NH), 6.83 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.00 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.40 (дд, 1Н, ³J_HF = 14.2 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 19.59 (с, CH₃), 20.94 (с, CH₃), 23.21 (c, CH₃), 42.04 (с, CH₂), 47.69 (с, CH₂), 50.40 (с, CH₂), 52.76 (с, СН₂), 58.41 (c, CH₂), 58.72 (c, CH₂), 63.51 (c, CH₂), 72.02 (c, CH), 107.54 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 113.92 (д, J_CF = 3.3 Гц, C_Ar), 119.22 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 127.69 (c, C_Ar), 133.08 (д, J_CF = 7.9 Гц, C_Ar), 135.00 (c, C_Ar), 136.22 (д, J_CF = 8.7 Гц, C_Ar), 148.08 (c, C_Ar), 149.64 (c, C_Ar), 154.46 (c, C=O), 155.52 (д, J_CF = 245 Гц, C_Ar), 171.30 (c, C=O), 174.17 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 560.2521 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₇H₃₅FN₅O₇] ⁺ 560.2516.

Пример 6. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-гидрокси-3,4-бис(гидроксиметил)-6-метилпиридин-2-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-6)

К соединению I-4 (0,11 г; 0,19 ммоль) добавляли 2 мл водного раствора концентрированной соляной кислоты (0,05 г; 1,3 ммоль). Реакцию перемешивали 20 ч при 50 °C. Далее, реакционную смесь нейтрализовывали водным раствором гидрокарбоната натрия до pH=6. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью обращённо-фазовой хроматографии (градиентное элюирование – смесь вода:метанол = 100:0 10:90). Выход 76% (0,07 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 75-80 °С. [α]_D²⁵ -17.3 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (с, 3H, CH_3Ac), 2.43 (с, 3H, CH₃), 2.68 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.01 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.54 (д, 2H, ³J_HН = 5.0 Гц, CH₂), 3.77 (дд, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 6.4 Гц, HCH), 3.81 (с, 2H, CH₂), 4.09 (т, 1H, ²J_HH = 9.0 Гц, ³J_HH = 9.0 Гц, HCH), 4.69 (с, 2H, CH₂), 4.73-4.79 (м, 1H, CH), 4.98 (с, 2H, CH₂), 7.00 (т, 1H, ³J_HН = 9.2 Гц, ⁴J_HF = 9.2 Гц, CH_Ar), 7.13 (дд, 1H, ³J_HH = 9.2 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.47 (дд, 1Н, ³J_HF = 14.6 Гц, ⁴J_HH = 2.5 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 18.48 (с, CH₃), 22.42 (с, CH₃), 43.13 (с, CH₂), 49.10 (с, CH₂), 51.76 (д, J_CF = 3.0 Гц, CH₂), 53.78 (с, СН₂), 58.39 (c, CH₂), 58.73 (c, CH₂), 63.02 (c, CH₂), 73.44 (c, CH), 108.39 (д, J_CF = 26.6 Гц, C_Ar), 115.41 (д, J_CF = 3.2 Гц, C_Ar), 120.43 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 134.32 (c, C_Ar), 134.36 (c, C_Ar), 134.96 (д, J_CF = 10.5 Гц, C_Ar), 137.33 (д, J_CF = 9.2 Гц, C_Ar), 146.33 (c, C_Ar), 147.58 (c, C_Ar), 152.26 (c, C_Ar), 156.57 (c, C=O), 156.73 (д, J_CF = 244.9 Гц, C_Ar), 174.04 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 518.2415 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₅H₃₃FN₅O₆] ⁺ 518.2410.

Пример 7. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-7)

Синтез 8-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ола (промежуточное вещество 21)

Синтезировали аналогично соединению 12 в течение 16 ч. При охлаждении до комнатной температуры из реакционной смеси выпадал осадок. Выпавший осадок отфильтровывали и промывали холодной смесью ацетонитрил:диэтиловый эфир = 1:6 температуры 8 °С. Фильтрат высушивали в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент -этилацетат). Выход 68% (9,59 г); желтое кристаллическое вещество; т. пл. 70-74 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.51 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.82 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.35 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.98 (с, 2Н, СН₂), 4.80 (с, 2H, CH₂), 4.94 (с, 2H, CH₂), 6.92 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.79 (с, 1H, CH_Ar), 7.91 (дд, 1H, ³J_HF = 12.8 Гц, ⁴J_HH = 2.6 Гц, CH_Ar), 7.99 (дд, 1Н, ³J_HH = 8.8 Гц, ⁴J_HH = 2.6 Гц, СН_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.88 (c, C(CH₃)₂), 49.40 (д, J_CF = 4.9 Гц, CH₂), 52.46 (с, СН₂), 59.21 (c, CH₂), 61.80 (c, CH₂), 63.00 (c, CH₂), 102.78 (c, C(CH₃)₂), 112.74 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 117.50 (д, J_CF = 3.6 Гц, C_Ar), 121.05 (д, J_CF = 3.1 Гц, C_Ar), 135.12 (c, C_Ar), 137.58 (c, C_Ar), 139.39 (c, C_Ar), 139.54 (c, C_Ar), 141.28 (д, J_CF = 8.9 Гц, C_Ar), 145.10 (д, J_CF = 7.8 Гц, C_Ar), 150.73 (c, C_Ar), 153.33 (д, J_CF = 249.7 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 433.1887 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₁H₂₆FN₄O₅] ⁺ 433.1882.

Синтез 8-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ил ацетата (промежуточное вещество 22)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 13. Выход 93% (9,73 г); желтое кристаллическое вещество; т. пл. 135-139 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.33 (c, 3H, CH_3Ac), 2.59 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.25 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.68 (уш. с, 2Н, СН₂), 4.75 (с, 2H, CH₂), 4.87 (с, 2H, CH₂), 6.86 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.87 (дд, 1H, ³J_HF = 13.2 Гц, ⁴J_HH = 2.6 Гц, CH_Ar), 7.95 (дд, 1Н, ³J_HH = 8.8 Гц, ⁴J_HH = 2.6 Гц, СН_Ar), 8.18 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 20.87 (c, CH₃), 23.73 (c, C(CH₃)₂), 49.42 (с, CH₂), 52.89 (с, СН₂), 59.13 (c, CH₂), 61.76 (c, CH₂), 102.99 (c, C(CH₃)₂), 112.65 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 117.21 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 121.09 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 135.26 (c, C_Ar), 141.19 (c, C_Ar), 143.60 (c, C_Ar), 144.21 (c, C_Ar), 144.68 (c, C_Ar), 153.08 (д, J_CF = 249.2 Гц, C_Ar), 168.51 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 433.1887 [М-Ac+2H]⁺; вычислено для [C₂₁H₂₆FN₄O₅] ⁺ 433.1882.

Синтез 8-((4-(4-амино-2-фторфенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-9-ола (промежуточное вещество 23)

Синтезировали аналогично соединению 5 в течение 4 ч. Раствор отфильтровывали от катализатора, фильтрат высушивали в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - ацетонитрил). Выход 64% (5,29 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 186-190 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.79 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.04 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.94 (с, 2Н, СН₂), 4.79 (с, 2H, CH₂), 4.94 (с, 2H, CH₂), 6.37-6.43 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.78 (т, 1H, ³J_HН = 8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.77 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.92 (c, C(CH₃)₂), 51.13 (с, СН₂), 53.01 (с, СН₂), 59.33 (c, CH₂), 61.86 (c, CH₂), 63.32 (c, CH₂), 102.73 (c, C(CH₃)₂), 103.94 (д, J_CF = 23.8 Гц, C_Ar), 110.71 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 120.80 (д, J_CF = 4.1 Гц, C_Ar), 134.73 (c, C_Ar), 137.58 (c, C_Ar), 140.04 (c, C_Ar), 143.23 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 150.89 (c, C_Ar), 156.91 (д, J_CF = 245.5 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 403.2145 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₁H₂₆FN₄O₅] ⁺ 403.2140.

Синтез 3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)анилина (промежуточное вещество 24)

К соединению 23 (5,26 г; 13,1 ммоль) в 50 мл ДМФА добавляли гидрид натрия (0,31 г; 13,1 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре 0,5 ч до прекращения выделения водорода. В реакционную смесь добавляли MOMCl (1,11 г; 13,8 ммоль) и оставляли перемешиваться на 24 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растворяли в смеси хлороформ:вода = 1:1, органический слой отделяли и высушивали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - ацетон). Выход 78% (4,57 г); темно-коричневое кристаллическое вещество; т. пл. 48-52 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.71 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.96 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.60 (c, 3H, CH₃), 3.70 (уш. с, 2Н, СН₂), 4.84 (с, 2H, CH₂), 5.01 (с, 2H, CH₂), 5.08 (с, 2H, CH₂), 6.35-6.42 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.75 (т, 1H, ³J_HН = 9.0 Гц, ⁴J_HF = 9.0 Гц, CH_Ar), 8.10 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.77 (c, C(CH₃)₂), 51.23 (с, СН₂), 53.43 (с, СН₂), 57.77 (c, CH₃), 59.13 (c, CH₂), 59.78 (c, CH₂), 61.87 (c, CH₂), 101.21 (c, CH₂), 102.76 (с, C(CH₃)₂), 103.94 (д, J_CF = 23.9 Гц, C_Ar), 110.67 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 120.38 (д, J_CF = 4.4 Гц, C_Ar), 131.95 (д, J_CF = 9.8 Гц, C_Ar), 134.74 (c, C_Ar), 141.48 (c, C_Ar), 142.50 (c, C_Ar), 142.68 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 150.50 (c, C_Ar), 156.72 (д, J_CF = 245.2 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 447.2408 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₃H₃₂FN₄O₄] ⁺ 447.2403.

Синтез (R)-2-(3-((3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)амино)-2-гидроксипропил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 25)

Синтезировали аналогично соединению 6. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - ацетон). Выход 34% (2,20 г); желтое кристаллическое вещество; т. пл. 71-75 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.71 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.96 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.09 (дд, 1H, ²J_HH = 13.1 Гц, ³J_HH = 6.7 Гц, HCH), 3.20 (дд, 1H, ²J_HH = 13.1 Гц, ³J_HH = 4.5 Гц, HCH), 3.60 (c, 3H, CH₃), 3.71 (уш. с, 2Н, СН₂), 3.79-3.89 (м, 2Н, СН₂), 4.10-4.15 (м, 1Н, СН), 4.83 (с, 2H, CH₂), 5.01 (с, 2H, CH₂), 5.07 (с, 2H, CH₂), 6.33-6.41 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.73-6.87 (м, 1H, CH_Ar), 7.69-7.73 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.80-7.87 (м, 2H, 2CH_Phtal), 8.10 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.77 (c, C(CH₃)₂), 42.17 (с, СН₂), 47.88 (с, СН₂), 51.16 (с, СН₂), 53.38 (с, СН₂), 57.79 (с, СН₃), 59.00 (с, СН₂), 59.76 (с, СН₂), 61.68 (с, СН₂), 68.73 (с, СН), 101.20 (с, СН₂), 102.77 (с, C(CH₃)₂), 103.96 (д, J_CF = 23.6 Гц, C_Ar), 108.81 (д, J_CF = 2.6 Гц, C_Ar), 110.70 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 120.37-120.55 (м, C_Ar), 123.47-123.60 (м, C_Ar), 131.90 (c, C_Ar), 134.13-134.35 (м, C_Ar), 141.54 (с, C_Ar), 142.51 (с, C_Ar), 144.73 (д, J_CF = 10.1 Гц, C_Ar), 150.53 (с, C_Ar), 156.95 (д, J_CF = 245.0 Гц, C_Ar), 169.03 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 650.2986 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₄H₄₁FN₅O₇] ⁺ 650.2985.

Синтез (S)-2-((3-(3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 26)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 7. Выход 30% (0,64 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 83-87 °С. [α]_D²⁵ -34.7 (c 0.68, CH₂Cl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.75 (уш.с, 4H, 2СH₂N), 3.07 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.60 (c, 3H, CH₃), 3.75 (уш. с, 2Н, СН₂), 3.84 (дд, 1H, ²J_HH = 9.1 Гц, ³J_HH = 6.0 Гц, HCH), 3.95 (дд, 1H, ²J_HH =14.2 Гц, ³J_HH = 5.8 Гц, HCH), 4.06 (т, 1H, ²J_HH = 9.1 Гц, ³J_HH = 9.1 Гц, HCH), 4.12 (дд, 1H, ²J_HH = 14.2 Гц, ³J_HH = 6.7 Гц, HCH), 4.84 (с, 2H, CH₂), 4.92-4.99 (м, 1Н, СН), 5.01 (с, 2H, CH₂), 5.08 (с, 2H, CH₂), 6.88 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.05 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.6 Гц, CH_Ar), 7.38 (дд, 1H, ³J_HF = 14.2 Гц, ⁴J_HН = 2.6 Гц, CH_Ar), 7.74-7.78 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.85-7.88 (м, 2H, 2CH_Phtal), 8.11 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.78 (c, C(CH₃)₂), 40.87 (с, СН₂), 48.62 (с, СН₂), 50.43 (с, СН₂), 53.16 (с, СН₂), 57.82 (c, CH₃), 58.91 (c, CH₂), 59.77 (c, CH₂), 61.89 (c, CH₂), 69.70 (c, CH), 101.20 (c, СН₂), 102.80 (с, C(CH₃)₂), 107.66 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 114.11 (д, J_CF = 3.2 Гц, C_Ar), 119.15 (д, J_CF = 4.2 Гц, C_Ar), 123.80 (c, C_Ar), 131.79 (c, C_Ar), 132.86 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 134.54 (c, C_Ar), 136.75 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 141.57 (c, C_Ar), 142.59 (c, C_Ar), 149.75 (c, C_Ar), 150.57 (c, C_Ar), 153.92 (с, C=O), 155.53 (д, J_CF = 246.5 Гц, C_Ar), 168.08 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 676.2783 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₅H₃₉FN₅O₈] ⁺ 676.2778.

Синтез (S)-5-(аминометил)-3-(3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)оксазолидин-2-она (промежуточное вещество 27)

Синтезировали в течение 4 ч и разрабатывали аналогично соединению 8. Выход 52% (0,25 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 60-64 °С. [α]_D²⁵ -34.8 (c 0.44, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.89 (уш. с, 2H, NH₂), 2.70 (уш. с, 4H, 2СH₂N), ), 2.99 (дд, 1H, ²J_HH = 13.7 Гц, ³J_HH =6.1 Гц, HCH), 3.03 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.11 (дд, 1H, ²J_HH = 13.7 Гц, ³J_HH = 3.9 Гц, HCH), 3.60 (c, 3H, CH₃), 3.69 (с, 2Н, СН₂), 3.78 (дд, 1H, ²J_HH = 8.6 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 3.97-4.04 (м, 1H, HCH), 4.65-4.72 (м, 1Н, СН), 4.83 (с, 2H, CH₂), 5.01 (с, 2H, CH₂), 5.08 (с, 2H, CH₂), 6.88 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.07 (дд, 1H, ³J_HH = 9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.41 (дд, 1H, ³J_HF = 14.4 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 8.10 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.79 (c, C(CH₃)₂), 44.94 (с, СН₂), 47.82 (с, СН₂), 50.65 (д, J_CF = 3.3 Гц, СН₂), 53.30 (с, СН₂), 57.80 (c, CH₃), 59.18 (c, CH₂), 59.81 (c, CH₂), 61.89 (c, CH₂), 73.63 (c, CH), 101.21 (c, СН₂), 102.79 (с, C(CH₃)₂), 107.40 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 113.86 (д, J_CF = 3.3 Гц, C_Ar), 119.09 (д, J_CF = 4.3 Гц, C_Ar), 133.12 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 134.74 (c, C_Ar) 136.63 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 141.53 (c, C_Ar), 142.53 (c, C_Ar), 150.25 (c, C_Ar), 150.51 (c, C_Ar), 154.68 (c, C=O), 155.55 (д, J_CF = 246.1 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 546.2728 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₇H₃₇FN₅O₆] ⁺ 546.2723.

Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((9-(метоксиметокси)-3,3-диметил-1,5-дигидро-[1,3]диоксепино[5,6-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-7)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 13. Выход количественный (0,22 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 77-81 °С. [α]_D²⁵ -17.1 (c 0.33, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д. (смесь конформеров): 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.00 (с, 3H, CH_3Ac), 2.75 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.07 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.55-3.74 (м, 5H, 2CH₂+HCH), 3.60 (c, 3H, CH₃), 3.99 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, CH₂), 4.72-4.78 (м, 1Н, СН), 4.84 (с, 2H, CH₂), 5.01 (с, 2H, CH₂), 5.07 (с, 2H, CH₂), 6.29 (т, 1H, ³J_HH =6.1 Гц, NH), 6.88 (т, 1H, ³J_HН = 9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.02 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.40 (дд, 1H, ³J_HF = 14.3 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 8.11 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д (смесь конформеров): 23.21 (c, CH₃), 23.74 (c, C(CH₃)₂), 23.89 (c, C(CH₃)₂), 42.03 (с, СН₂), 47.73 (с, СН₂), 50.43 (д, J_CF = 2.5 Гц, СН₂), 52.76 (с, СН₂), 57.93 (c, CH₃), 59.26 (c, CH₂), 59.62 (c, CH₂), 61.84 (c, CH₂), 61.88 (c, CH₂), 63.35 (c, CH₂), 71.99 (c, CH), 72.03 (c, CH), 101.18 (c, СН₂), 102.72 (с, C(CH₃)₂), 102.86 (с, C(CH₃)₂), 107.50 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 107.57 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 113.89-113.96 (м, C_Ar), 119.24-119.37 (м, C_Ar), 133.31 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 134.75 (с, C_Ar), 136.07 (д, J_CF = 9.2 Гц, C_Ar), 137.60 (с, C_Ar), 139.90 (с, C_Ar), 141.71 (с, C_Ar), 142.80 (с, C_Ar), 150.79 (с, C_Ar), 154.46 (c, C=O), 155.48 (д, J_CF = 246.4 Гц, C_Ar). 155.59 (д, J_CF = 246.5 Гц, C_Ar). 171.30 (c, C=O), 171.32 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 588.2834 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₉H₃₉FN₅O₇] ⁺ 588.2829.

Пример 8. Получение (S)-N-((3-(4-(4-((4,5-бис(гидроксиметил)-3-(метоксиметокси)пиридин-2-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-фторфенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-8)

Синтезировали аналогично соединению I-5. После окончания реакции смесь нейтрализовывали водным раствором гидрокарбоната натрия до pH=6. Продукт реакции экстрагировали из водной фазы хлороформом три раза по 10 мл. Органический слой объединяли и высушивали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:изопропанол:семинормальный раствор аммиака в метаноле =80:20:1). Выход 35% (0,05 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 64-68 °С. [α]_D²⁵ -17.9 (c 0.38, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (с, 3H, CH_3Ac), 2.74 (уш. с, 2H, СH₂N), 2.79 (уш. с, 2H, СH₂N), 3.05 (уш. с, 2H, СH₂N), 3.15 (уш. с, 2H, СH₂N), 3.55–3.66 (м, 2H, CH₂), 3.64 (с, 3H, СH₃), 3.75-3.79 (м, 1H, HCH), 3.97 (с, 2H, СH₂),4.08-4.14 (м, 1H, HCH), 4.75-4.83 (м, 5H, 2CH₂+CH), 5.20 (c, 2H, CH₂), 7.00-7.18 (м, 2H, 2CH_Ar), 7.46-7.52 (м, 1H, CH_Ar), 8.01 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 22.42 (c, CH₃), 43.14 (с, СН₂), 51.66 (с, СН₂), 53.82 (с, СН₂), 54.29 (с, СН₂), 55.22 (с, СН₂), 56.09 (с, СН₃), 58.17 (с, СН₂), 59.73 (с, СН₂), 60.62 (с, СН₂), 63.48 (с, СН₂), 73.48 (c, CH), 102.94 (с, СН₂), 108.44 (д, J_CF = 26.7 Гц, C_Ar), 115.51 (д, J_CF =3.1 Гц, C_Ar), 120.61 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 134.88 (с, C_Ar), 135.09 (д, J_CF = 10.6 Гц, C_Ar), 137.34 (c, C_Ar), 137.65 (д, J_CF = 9.9 Гц, C_Ar), 139.97 (c, C_Ar), 142.95 (c, C_Ar), 145.06 (c, C_Ar), 156.62 (c, C=O), 156.79 (д, J_CF = 244.5 Гц, C_Ar), 174.08 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 548.2522 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₆H₃₅FN₅O₇] ⁺ 548.2516.

Пример 9. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((3-гидрокси-4,5-бис(гидроксиметил)пиридин-2-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-9)

Синтезировали в течение 10 ч и разрабатывали аналогично соединению I-6. Выход 65% (0,02 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 148-150 °С. [α]_D²⁵ -17.6 (c 0.26, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (с, 3H, CH_3Ac), 2.78 (уш. с, 2H, СH₂N), 3.14 (уш. с, 2H, СH₂N), 3.55 (д, 2H, ³J_HН =5.0 Гц, CH₂), 3.78 (дд, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =6.4 Гц, HCH), 3.95 (с, 2H, CH₂), 4.11 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, HCH), 4.73 (с, 2H, CH₂), 4.76-4.78 (м, 1Н, СН), 4.79 (с, 2H, CH₂), 7.06 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.16 (дд, 1H, ³J_HH =9.1 Гц, ⁴J_HH = 2.2 Гц, CH_Ar), 7.49 (дд, 1Н, ³J_HF =14.6 Гц, ⁴J_HH = 2.2 Гц, СН_Ar), 7.97 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 22.42 (c, CH₃), 43.14 (с, СН₂), 51.67 (д, J_CF = 2.9 Гц, СН₂), 53.84 (с, СН₂), 55.59 (с, СН₂), 60.68 (c, CH₂), 63.15 (c, CH₂), 73.47 (c, CH), 108.44 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 115.50 (д, J_CF =3.1 Гц, C_Ar), 120.58 (д, J_CF = 3.7 Гц, C_Ar), 134.96 (с, C_Ar), 135.04 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 137.13 (c, C_Ar), 137.31 (д, J_CF = 9.3 Гц, C_Ar), 139.49 (c, C_Ar), 143.29 (c, C_Ar), 156.61 (c, C=O), 156.77 (д, J_CF = 245.0 Гц, C_Ar), 174.06 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 504.2258 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₁FN₅O₆] ⁺ 504.2253.

Пример 10. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-10)

Синтез 5-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридина (промежуточное вещество 34)

Синтезировали аналогично соединению 4. После окончания реакции раствор охлаждали и оставляли при температуре 8 °С на 24 ч. Выпавший осадок отфильтровывали и промывали охлажденным до температуры 8 °С ацетонитрилом. Осадок два раза промывали водой и высушивали. Выход 66% (5,36 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 154-157 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.52 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.72 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.31 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.71 (c, 2H, CH₂), 4.62 (c, 2H, CH₂), 4.72 (c, 2H, CH₂), 4.90 (c, 2H, CH₂), 6.87 (т, 1H, ³J_HН =8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.87 (дд, 1Н, ³J_HF =13.2 Гц, ⁴J_HH = 2.4 Гц, СН_Ar), 7.87 (дд, 1H, ³J_HH =8.8 Гц, ⁴J_HH = 2.4 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.75 (c, C(CH₃)₂), 24.73 (c, C(CH₃)₂), 49.64 (д, J_CF = 4.7 Гц, C_Ar), 52.61 (с, СН₂), 56.54 (c, CH₂), 58.25 (c, CH₂), 58.67 (c, CH₂), 66.79 (c, CH₂), 99.58 (c, C(CH₃)₂), 102.47 (c, C(CH₃)₂), 112.62 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 117.09 (д, J_CF = 4.1 Гц, C_Ar), 121.13 (д, J_CF = 2.8 Гц, C_Ar), 124.20 (c, C_Ar), 127.83 (c, C_Ar), 140.37 (д, J_CF = 8.3 Гц, C_Ar), 145.00 (c, C_Ar), 145.81 (д, J_CF = 7.6 Гц, C_Ar), 148.63 (c, C_Ar), 153.03 (д, J_CF = 249.2 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 503.2306 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₅H₃₂FN₄O₆] ⁺ 503.2301.

Синтез 3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)анилина (промежуточное вещество 35)

Синтезировали аналогично соединению 5 в течение 1,5 ч. Раствор отфильтровывали от катализатора, фильтрат высушивали в вакууме. Выход 96% (4,78 г); светло-розовое кристаллическое вещество; т. пл. 85-87 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.51 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.72 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.99 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.72 (c, 2H, CH₂), 4.61 (c, 2H, CH₂), 4.71 (c, 2H, CH₂), 4.90 (c, 2H, CH₂), 6.35-6.41 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.78 (т, 1H, ³J_HН = 9.0 Гц, ⁴J_HF = 9.0 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.75 (c, C(CH₃)₂), 24.70 (c, C(CH₃)₂), 51.31 (с, CH₂), 53.02 (с, СН₂), 56.50 (c, CH₂), 58.21 (c, CH₂), 58.66 (c, CH₂), 66.79 (c, CH₂), 99.51 (c, C(CH₃)₂), 102.41 (c, C(CH₃)₂), 103.92 (д, J_CF = 24.0 Гц, C_Ar), 110.69 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 120.38 (д, J_CF = 4.4 Гц, C_Ar), 124.03 (c, C_Ar), 127.65 (c, C_Ar), 132.11 (д, J_CF = 9.2 Гц, C_Ar), 142.63 (д, J_CF = 10.2 Гц, C_Ar), 145.02 (c, C_Ar), 148.58 (c, C_Ar), 156.72 (д, J_CF = 245.1 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 473.2565 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₅H₃₄FN₄O₄] ⁺ 473.2559.

Синтез (R)-2-(3-((3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)амино)-2-гидроксипропил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 36)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 6. Выход 54% (3,62 г); жёлтое кристаллическое вещество; т. пл. 89-91 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.49 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.51 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.71 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.96 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.06-3.20 (м, 2H, CH₂), 3.71 (уш. с, 2H, CH₂), 3.85-3.87 (м, 2H, CH₂), 4.10-4.15 (м, 1Н, CH), 4.60 (с, 2H, CH₂), 4.70 (с, 2H, CH₂), 4.88 (с, 2H, CH₂), 6.33-6.38 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.78 (т, 1H, ³J_HН =9.0 Гц, ⁴J_HF = 9.0 Гц, CH_Ar), 7.67-7.72 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.82-7.84 (м, 2H, 2CH_Phtal).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.75 (c, C(CH₃)₂), 24.70 (c, C(CH₃)₂), 42.16 (c, CH₂), 47.90 (c, CH₂), 51.27 (c, CH₂), 53.02 (c, CH₂), 56.43 (c, CH₂), 58.19 (c, CH₂), 58.64 (c, CH₂), 66.70 (c, CH₂), 68.74 (c, CH), 99.53 (c, C(CH₃)₂), 102.04 (д, J_CF = 24.4 Гц, C_Ar), 102.41 (c, C(CH₃)₂), 108.82 (д, J_CF = 2.5 Гц, C_Ar), 120.46 (д, J_CF = 4.3 Гц, C_Ar), 123.53-123.62 (м, C_Ar), 124.10 (c, C_Ar), 130.53 (д, J_CF = 11.0 Гц, C_Ar), 131.90 (с, C_Ar), 134.21-134.35 (м, C_Ar), 144.65 (д, J_CF = 10.2 Гц, C_Ar), 145.04 (с, C_Ar), 148.59 (с, C_Ar), 156.94 (д, J_CF = 244.8 Гц, C_Ar), 169.04 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 676.3147 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₆H₄₃FN₅O₇] ⁺ 676.3142.

Синтез (S)-2-((3-(3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 37)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 7. Выход 78% (2,84 г); светло-желтое кристаллическое вещество; т. пл. 111-113 °С. [α]_D²⁵ -38.1 (c 1.0, CH₂Cl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.52 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.74 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.07 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.73 (уш. с, 2H, CH₂), 3.84 (дд, 1H, ²J_HH = 9.1 Гц, ³J_HH =5.9 Гц, HCH), 3.95 (дд, 1H, ²J_HH =14.2 Гц, ³J_HH =5.9 Гц, HCH), 4.06 (т, 1H, ²J_HH =9.1 Гц, ³J_HH = 9.1 Гц, HCH), 4.12 (дд, 1H, ²J_HH =14.2 Гц, ³J_HH = 6.8 Гц, HCH), 4.61 (с, 2H, CH₂), 4.71 (с, 2H, CH₂), 4.89 (с, 2H, CH₂), 4.92-4.98 (м, 1Н, CH), 6.90 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.04 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.3 Гц, CH_Ar), 7.39 (дд, 1H, ³J_HF =14.2 Гц, ⁴J_HН = 2.3 Гц, CH_Ar), 7.72-7.77 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.84-7.88 (м, 2H, 2CH_Phtal).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.75 (c, C(CH₃)₂), 24.72 (c, C(CH₃)₂), 40.86 (c, CH₂), 48.60 (c, CH₂), 50.58 (с, CH₂), 52.82 (с, СН₂), 56.46 (c, CH₂), 58.22 (c, CH₂), 58.66 (c, CH₂), 66.79 (c, CH₂), 69.67 (c, CH), 99.56 (c, C(CH₃)₂), 102.42 (c, C(CH₃)₂), 107.62 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 114.09 (д, J_CF = 3.3 Гц, C_Ar), 119.13 (д, J_CF = 4.1 Гц, C_Ar), 123.79 (c, C_Ar), 129.20 (c, C_Ar), 129.86 (c, C_Ar), 130.76 (c, C_Ar), 130.93 (c, C_Ar), 131.12 (c, C_Ar), 131.17 (c, C_Ar), 131.22 (c, C_Ar), 131.78 (c, C_Ar), 134.53 (c, C_Ar), 134.75 (c, C_Ar), 137.25-137.37 (м, C_Ar), 148.62 (c, C_Ar), 153.90 (с, C=O), 155.53 (д, J_CF = 246.4 Гц, C_Ar), 168.07 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 702.2935 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₇H₄₁FN₅O₈] ⁺ 702.2934.

Синтез (S)-5-(аминометил)-3-(3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)оксазолидин-2-она (промежуточное вещество 38)

Синтезировали в течение 2 ч и разрабатывали аналогично соединению 8. Выход 87% (1,96 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 80-82 °С. [α]_D²⁵ -26.9 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.51 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.72 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.95 (дд, 1H, ²J_HH = 13.7 Гц, ³J_HH =5.8 Гц, HCH), 3.06 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.06-3.11 (м, 1H, HCH), 3.71 (с, 2H, CH₂), 3.78 (дд, 1H, ²J_HH =8.6 Гц, ³J_HH =6.7 Гц, HCH), 3.98 (т, 1H, ²J_HH =8.6 Гц, ³J_HH = 8.6 Гц, HCH), 4.61 (с, 2H, CH₂), 4.62-4.68 (м, 1Н, CH), 4.71 (с, 2H, CH₂), 4.89 (с, 2H, CH₂), 6.90 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.05-7.07 (м, 1H, CH_Ar), 7.43 (дд, 1H, ³J_HF =14.4 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.75 (c, C(CH₃)₂), 24.71 (c, C(CH₃)₂), 45.04 (c, CH₂), 47.81 (c, CH₂), 50.66 (д, J_CF = 2.2 Гц, C_Ar), 52.88 (с, СН₂), 56.52 (c, CH₂), 58.22 (c, CH₂), 58.65 (c, CH₂), 66.76 (c, CH₂), 73.85 (c, CH), 99.55 (c, C(CH₃)₂), 102.43 (c, C(CH₃)₂), 107.40 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 113.85 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 119.13 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 122.00 (c, C_Ar), 124.13 (c, C_Ar), 127.74 (c, C_Ar), 133.20 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 135.17 (c, C_Ar), 136.71 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 142.76 (c, C_Ar), 145.03 (c, C_Ar), 148.61 (c, C_Ar), 154.70 (c, C=O), 155.59 (д, J_CF = 246.1 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 572.2879 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₉H₃₉FN₅O₆] ⁺ 572.2879.

Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((3,3,9,9-тетраметил-7,11-дигидро-1H-[1,3]диоксепино[5,6-b][1,3]диоксино[5,4-d]пиридин-5-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-10)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 13. Выход количественный (1,86 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 96-98 °С. [α]_D²⁵ -13.8 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.50 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.52 (c, 6H, (CH₃)₂C), 2.00 (с, 3H, CH_3Ac), 2.73 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.07 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.54-3.74 (м, 5H, 2СH₂+HCH), 3.99 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, HCH), 4.61 (с, 2H, CH₂), 4.71 (с, 2H, CH₂), 4.73-4.77 (м, 1Н, CH), 4.89 (с, 2H, CH₂), 6.36 (уш. с, 1H, NH), 6.89 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.01 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.39 (дд, 1H, ³J_HF =14.3 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.20 (c, CH₃), 23.76 (c, C(CH₃)₂), 24.72 (c, C(CH₃)₂), 42.06 (c, CH₂), 47.77 (c, CH₂), 50.59 (с, CH₂), 52.82 (с, СН₂), 56.48 (c, CH₂), 58.23 (c, CH₂), 58.66 (c, CH₂), 66.78 (c, CH₂), 72.00 (c, CH), 99.56 (c, C(CH₃)₂), 102.43 (c, C(CH₃)₂), 107.53 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 114.01 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 119.15 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 124.12 (c, C_Ar), 127.77 (c, C_Ar), 132.71 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 136.63 (c, C_Ar), 136.96 (д, J_CF = 8.8 Гц, C_Ar), 145.04 (c, C_Ar), 148.62 (c, C_Ar), 154.47 (c, C=O), 155.18 (д, J_CF = 246.5 Гц, C_Ar), 171.23 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 614.2990 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₁H₄₁FN₅O₇] ⁺ 614.2985.

Пример 11. Получение (S)-N-((3-(4-(4-((5,6-бис(гидроксиметил)-2,2-диметил-4H-[1,3]диоксино[4,5-c]пиридин-8-ил)метил)пиперазин-1-ил)-3-фторфенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-11)

К соединению I-10 (0,40 г; 0,7 ммоль) добавляли раствор муравьиной кислоты (0,30 г; 6,5 ммоль) в 3 мл воды. Реакцию вели при комнатной температуре и постоянном перемешивании в течение 24 ч. Смесь нейтрализовывали водным раствором гидрокарбоната натрия до pH=6. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:этанол = 4:1). Выход 75% (0,28 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 81-83 °С. [α]_D²⁵ -12.4 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 1.53 (c, 6H, (CH₃)₂C), 1.98 (с, 3H, CH_3Ac), 2.76 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.03 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.53-3.62 (м, 2H, CH₂), 3.70 (дд, 1H, ²J_HH =8.9 Гц, ³J_HH =6.8 Гц, HCH), 3.77 (с, 2H, CH₂), 3.97 (т, 1H, ²J_HH =8.9 Гц, ³J_HH =8.9 Гц, HCH), 4.52 (с, 2H, CH₂), 4.72 (с, 2H, CH₂), 4.74-4.76 (м, 1Н, CH), 4.99 (с, 2H, CH₂), 6.75 (т, 1H, ³J_HН =6.1 Гц, NH), 6.85 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 6.98 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.36 (дд, 1H, ³J_HF =14.2 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 23.11 (c, CH₃), 24.81 (c, C(CH₃)₂), 42.00 (c, CH₂), 47.71 (c, CH₂), 50.39 (с, CH₂), 52.87 (с, СН₂), 56.41 (c, CH₂), 56.73 (c, CH₂), 59.08 (c, CH₂), 62.77 (c, CH₂), 72.06 (c, CH), 99.96 (c, C(CH₃)₂), 107.48 (д, J_CF = 26.3 Гц, C_Ar), 114.02 (д, J_CF = 2.5 Гц, C_Ar), 119.19 (д, J_CF = 3.7 Гц, C_Ar), 127.87 (c, C_Ar), 128.39 (c, C_Ar), 132.83 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 136.61 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 142.99 (c, C_Ar), 146.33 (c, C_Ar), 147.74 (c, C_Ar), 154.60 (c, C=O), 155.44 (д, J_CF = 246.3 Гц, C_Ar), 171.52 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 574.2672 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₈H₃₇FN₅O₇] ⁺ 574.2672.

Пример 12. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((3-гидрокси-4,5,6-трис(гидроксиметил)пиридин-2-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-12)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению I-2. Очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:этанол = 4:1). Выход 71% (0,25 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 136-138 °С. [α]_D²⁵ -14.4 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (с, 3H, CH_3Ac), 2.81 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.14 (уш. с, 4H, 2CH₂N), 3.55 (д, 2H, ³J_HH =4.9 Гц, CH₂), 3.78 (дд, 1H, ²J_HH =9.1 Гц, ³J_HH =6.4 Гц, HCH), 4.00 (с, 2H, CH₂), 4.11 (т, 1H, ²J_HH =9.1 Гц, ³J_HH =9.1 Гц, HCH), 4.75 (с, 2H, CH₂), 4.77-4.79 (м, 1Н, CH), 4.82 (с, 2H, CH₂), 4.83 (с, 2H, CH₂), 7.06 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.16 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.49 (дд, 1H, ³J_HF =14.6 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 22.43 (c, CH₃), 43.14 (c, CH₂), 49.12 (c, CH₂), 51.61 (с, CH₂), 53.83 (с, СН₂), 55.37 (c, CH₂), 57.84 (c, CH₂), 63.41 (c, CH₂), 63.96 (c, CH₂), 73.46 (c, CH), 108.43 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 115.49 (д, J_CF = 2.7 Гц, C_Ar), 120.60 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 134.85 (c, C_Ar), 135.09 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 136.24 (c, C_Ar), 137.22 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 141.70 (c, C_Ar), 149.64 (c, C_Ar), 153.39 (c, C_Ar), 156.58 (c, C=O), 156.76 (д, J_CF = 244.7 Гц, C_Ar), 174.05 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 534.2365 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₅H₃₃FN₅O₇] ⁺ 534.2359.

Пример 13. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-13)

Синтез 5-((4-(2-фтор-4-нитрофенил)пиперазин-1-ил)метил)-2,4-диметилпиридин-3-ол (промежуточное вещество 42)

Синтезировали аналогично соединению 4. После окончания реакции раствор оставляли при 8 °С на 24 ч, выпавший осадок отфильтровывали и промывали холодным ацетонитрилом. Выход 80% (3,87 г); жёлтое кристаллическое вещество; т. пл. 194-196 °С.

Спектр ¹H ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 2.22 (с, 3H, CH₃), 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.50 (уш.с, 4H, 2СH₂N), 3.24 (уш.с, 4H, 2CH₂N), 3.43 (с, 2Н, СН₂), 7.12 (т, 1H, ³J_HН =8.9 Гц, ⁴J_HF = 8.9 Гц, CH_Ar), 7.77 (с, 1H, CH_Ar), 7.97 (уш. с, 1H, CH_Ar), 8.00 (уш. с, 1H, CH_Ar), 8.59 (с, 1H, OH).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (DMSO-d₆) δ, м.д.: 11.49 (c, CH₃), 19.80 (c, CH₃), 49.23 (c, СН₂), 52.24 (с, СН₂), 57.49 (c, CH₂), 112.22 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 117.92 (д, J_CF = 4.0 Гц, C_Ar), 121.27 (д, J_CF = 1.9 Гц, C_Ar), 130.06 (c, C_Ar), 132.64 (c, C_Ar), 139.31 (д, J_CF = 9.1 Гц, C_Ar), 141.02 (c, C_Ar), 145.30 (c, C_Ar), 145.35 (д, J_CF = 8.7 Гц, C_Ar), 149.35 (c, C_Ar), 152.02 (д, J_CF = 247.5 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 361.1677 [М+H]⁺; вычислено для [C₁₈H₂₂FN₄O₃] ⁺ 361.1671.

Синтез 1-(2-фтор-4-нитрофенил)-4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазина (промежуточное вещество 43)

Синтезировали аналогично соединению 24. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент - этилацетат). Выход 50% (2,45 г); оранжевое кристаллическое вещество; т. пл. 125-127 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.52 (с, 3H, CH₃), 2.59-2.62 (м, 4H, 2СH₂N), 3.25-3.28 (м, 4H, 2СH₂N), 3.50 (с, 2Н, СН₂), 3.62 (с, 3H, CH₃), 4.97 (с, 2Н, СН₂), 6.87 (т, 1H, ³J_HН =8.8 Гц, ⁴J_HF = 8.8 Гц, CH_Ar), 7.88 (дд, 1H, ³J_HF =13.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.95 (дд, 1H, ³J_HН =8.8 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 8.11 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.41 (c, CH₃), 20.03 (c, CH₃), 49.73 (д, J = 5.0 Гц, СН₂), 52.80 (с, CH₂), 57.76 (c, CH₂), 58.23 (c, CH₃), 99.66 (c, CH₂), 112.66 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 117.16 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 121.09 (д, J_CF = 2.5 Гц, C_Ar), 130.83 (c, C_Ar), 140.54 (д, J_CF = 8.6 Гц, C_Ar), 140.68 (c, C_Ar), 145.45 (c, C_Ar), 145.69 (д, J_CF = 7.5 Гц, C_Ar), 151.61 (c, C_Ar), 151.70 (c, C_Ar), 153.09 (д, J_CF = 249.4 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 405.1938 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₀H₂₆FN₄O₄] ⁺ 405.1933.

Синтез 3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)анилина (промежуточное вещество 44)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 35. Выход количественный (2,24 г); тёмно-красное кристаллическое вещество; т. пл. 121-123 °С.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.34 (с, 3H, CH₃), 2.51 (с, 3H, CH₃), 2.60 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.94 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.49 (с, 2Н, СН₂), 3.62 (с, 3H, CH₃), 4.97 (с, 2Н, СН₂), 6.35-6.42 (м, 2H, 2CH_Ar), 6.76 (дд, 1H, ³J_HН =8.9 Гц, ⁴J_HF = 8.9 Гц, CH_Ar), 8.12 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.40 (c, CH₃), 20.05 (c, CH₃), 51.42 (c, СН₂), 53.34 (с, CH₂), 57.74 (c, CH₂), 58.28 (c, CH₃), 99.60 (c, CH₂), 103.97 (д, J_CF = 23.8 Гц, C_Ar), 110.68 (д, J_CF = 2.6 Гц, C_Ar), 120.43 (д, J_CF = 4.3 Гц, C_Ar), 131.11 (c, C_Ar), 131.97 (д, J_CF = 9.5 Гц, C_Ar), 140.57 (c, C_Ar), 142.72 (д, J_CF = 10.3 Гц, C_Ar), 145.67 (c, C_Ar), 151.47 (c, C_Ar), 156.78 (д, J_CF = 245.2 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 375.2198 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₀H₂₈FN₄O₂] ⁺ 375.2191.

Синтез (R)-2-(3-((3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)амино)-2-гидроксипропил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 45)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 6. Выход 19% (0,64 г); коричневое маслообразное вещество.

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.36 (с, 3H, CH₃), 2.52 (с, 3H, CH₃), 2.66 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.99 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.10 (дд, 1H, ²J_HH =13.1 Гц, ³J_HH =6.8 Гц, HCH), 3.20 (дд, 1H, ²J_HH =13.1 Гц, ³J_HH =4.8 Гц, HCH), 3.55 (уш. с, 2H, CH₂), 3.61 (с, 3H, CH₃), 3.81 (дд, 1H, ²J_HH =14.2 Гц, ³J_HH =5.1 Гц, HCH), 3.90 (дд, 1H, ²J_HH =14.2 Гц, ³J_HH =6.4 Гц, HCH), 4.11-4.16 (м, 1Н, CH), 4.97 (с, 2Н, СН₂), 6.18-6.28 (м, 1H, CH_Ar), 6.34-6.42 (м, 1H, CH_Ar), 6.74-6.88 (м, 1H, CH_Ar), 7.71-7.73 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.83-7.85 (м, 2H, 2CH_Phtal), 8.14 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.66 (c, CH₃), 19.69 (c, CH₃), 40.02 (c, CH₃), 40.46 (c, СН₂), 51.10 (c, СН₂), 53.21 (c, СН₂), 57.78 (c, СН₂), 57.94 (c, СН₃), 70.30 (c, СН), 99.68 (c, СН₂), 101.56-102.16 (м, C_Ar), 103.97 (д, J_CF = 23.8 Гц, C_Ar), 108.31 (c, C_Ar), 108.88 (c, C_Ar), 110.76 (д, J_CF = 2.9 Гц, C_Ar), 120.64 (д, J_CF = 8.5 Гц, C_Ar), 123.56 (c, C_Ar), 123.61 (c, C_Ar), 131.97 (c, C_Ar), 134.25 (c, C_Ar), 134.34 (c, C_Ar), 145.19 (c, C_Ar), 151.68 (c, C_Ar), 156.90 (д, J_CF = 245.0 Гц, C_Ar), 169.09 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 578.2779 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₁H₃₇FN₅O₅] ⁺ 578.2774.

Синтез (S)-2-((3-(3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное вещество 46)

Синтезировали аналогично соединению 7. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь хлороформ:изопропанол = 10:1). Выход 37% (0,24 г); жёлтое кристаллическое вещество; т. пл. 59-61 °С. [α]_D²⁵ -34.5 (c 1.0, CH₂Cl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.36 (с, 3H, CH₃), 2.54 (с, 3H, CH₃), 2.65 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.05 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.54 (уш. с, 2H, СH₂), 3.62 (с, 3H, CH₃), 3.85 (дд, 1H, ²J_HH =9.1 Гц, ³J_HH =5.9 Гц, HCH), 3.92-3.98 (м, 1H, HCH), 4.05-4.15 (м, 2H, CH₂), 4.92-4.96 (м, 1Н, CH), 4.98 (с, 2Н, СН₂), 6.89 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.06 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.38 (дд, 1H, ³J_HF =14.2 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.74-7.77 (м, 2H, 2CH_Phtal), 7.86-7.88 (м, 2H, 2CH_Phtal), 8.15 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.56 (c, CH₃), 19.73 (c, CH₃), 40.83 (c, СН₂), 48.54 (c, СН₂), 50.52 (с, CH₂), 53.05 (с, CH₂), 57.78 (c, CH₂), 58.06 (c, CH₃), 73.65 (c, CH), 99.66 (c, CH₂), 107.60 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 114.06 (д, J_CF = 3.0 Гц, C_Ar), 119.14 (д, J_CF = 3.8 Гц, C_Ar), 123.53 (c, C_Ar), 123.78 (c, C_Ar), 123.86 (c, C_Ar), 131.74 (c, C_Ar), 132.89 (д, J_CF = 10.6 Гц, C_Ar), 134.24 (c, C_Ar), 134.54 (c, C_Ar), 134.65 (c, C_Ar), 136.62 (д, J_CF = 9.3 Гц, C_Ar), 141.36 (c, C_Ar), 145.01 (c, C_Ar), 151.40 (c, C_Ar), 151.65 (c, C_Ar), 153.91 (c, C=O), 155.50 (д, J_CF = 246.1 Гц, C_Ar), 168.08 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 604.2567 [М+H]⁺; вычислено для [C₃₂H₃₅FN₅O₆] ⁺ 604.2566.

Синтез (S)-5-(аминометил)-3-(3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)оксазолидин-2-она (промежуточное вещество 47)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению 8. Выход 55% (0,09 г); жёлтое маслообразное вещество. [α]_D²⁵ -33.2 (c 1.0, CH₃OH).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.33 (с, 3H, CH₃), 2.50 (с, 3H, CH₃), 2.58 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 2.99 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.02-3.06 (м, 1H, HCH), 3.16 (дд, 1H, ²J_HH =13.5 Гц, ³J_HH =3.3 Гц, HCH), 3.47 (уш. с, 2H, СH₂), 3.61 (с, 3H, CH₃), 3.76-3.80 (м, 1H, HCH), 3.99 (т, 1H, ²J_HH =8.8 Гц, ³J_HH =8.8 Гц, HCH), 4.71-4.77 (м, 1Н, CH), 4.96 (с, 2Н, СН₂), 6.87 (т, 1H, ³J_HН =9.2 Гц, ⁴J_HF = 9.2 Гц, CH_Ar), 7.06 (дд, 1H, ³J_HН =9.2 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 7.39 (дд, 1H, ³J_HF =14.4 Гц, ⁴J_HН = 2.4 Гц, CH_Ar), 8.09 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.35 (c, CH₃), 20.12 (c, CH₃), 44.72 (c, СН₂), 47.85 (c, СН₂), 50.76 (c, СН₂), 53.13 (с, CH₂), 57.74 (c, CH₂), 58.31 (c, CH₃), 73.26 (c, CH), 99.58 (c, CH₂), 107.42 (д, J_CF = 26.2 Гц, C_Ar), 113.92 (д, J_CF = 2.6 Гц, C_Ar), 119.07 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 131.10 (c, C_Ar), 133.03 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 136.62 (д, J_CF = 9.2 Гц, C_Ar), 140.39 (c, C_Ar), 145.73 (c, C_Ar), 151.45 (c, C_Ar), 151.55 (c, C_Ar), 154.68 (c, C=O), 155.50 (д, J_CF = 246.2 Гц, C_Ar).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 474.2517 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₃FN₅O₄] ⁺ 474.2512.

Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-(метоксиметокси)-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-13)

Синтезировали аналогично соединению I-1. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (градиентное элюирование – смесь этилацетат:ацетон = 50:50 0:100). Выход количественный (0,09 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 103-105 °С; [α]_D²⁵ -9.1 (c 1.0, CH₂Cl₂).

Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 2.00 (с, 3H, CH_3Ac), 2.36 (с, 3H, CH₃), 2.54 (с, 3H, CH₃), 2.65 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.05 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.54 (уш. с, 2H, СH₂), 3.62 (с, 3H, CH₃), 3.62-3.66 (м, 2H, СH₂), 3.73 (дд, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =6.8 Гц, HCH), 3.99 (т, 1H, ²J_HH =9.0 Гц, ³J_HH =9.0 Гц, HCH), 4.72-4.78 (м, 1Н, CH), 4.98 (с, 2Н, СН₂), 6.45 (т, 1H, ³J_HН =6.1 Гц, NH), 6.88 (т, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HF = 9.1 Гц, CH_Ar), 7.02 (дд, 1H, ³J_HН =9.1 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 7.40 (дд, 1H, ³J_HF =14.3 Гц, ⁴J_HН = 2.5 Гц, CH_Ar), 8.15 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CDCl₃) δ, м.д.: 12.62 (c, CH₃), 19.68 (c, CH₃), 23.21 (c, CH₃), 42.07 (c, СН₂), 47.76 (с, CH₂), 50.52 (c, CH₂), 53.07 (c, CH₂), 57.80 (c, CH₂), 58.05 (c, CH₃), 71.99 (c, CH), 99.72 (c, CH₂), 107.54 (д, J_CF = 26.4 Гц, C_Ar), 113.97 (д, J_CF = 2.7 Гц, C_Ar), 119.20 (д, J_CF = 3.9 Гц, C_Ar), 131.03 (c, C_Ar), 132.91 (д, J_CF = 10.4 Гц, C_Ar), 136.64 (д, J_CF = 9.0 Гц, C_Ar), 141.58 (c, C_Ar), 144.88 (c, C_Ar), 151.39 (c, C_Ar), 151.73 (c, C_Ar), 154.45 (c, C=O), 155.54 (д, J_CF = 246.4 Гц, C_Ar), 171.25 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 516.2622 [М+H]⁺; вычислено для [C₂₆H₃₅FN₅O₅] ⁺ 516.2617.

Пример 14. Получение (S)-N-((3-(3-фтор-4-(4-((5-гидрокси-4,6-диметилпиридин-3-ил)метил)пиперазин-1-ил)фенил)-2-оксооксазолидин-5-ил)метил)ацетамида (I-14)

Синтезировали и разрабатывали аналогично соединению I-6. Очищали с помощью колоночной хроматографии (элюент – смесь дихлорметан:этанол = 4:1). Выход 52% (0,03 г); белое кристаллическое вещество; т. пл. 94-96 °С. [α]_D²⁵ -20.4 (c 0.10, CH₃OH)

Спектр ¹H ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 1.96 (с, 3H, CH_3Ac), 2.32 (с, 3H, CH₃), 2.42 (с, 3H, CH₃), 2.61 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.03 (уш. с, 4H, 2СH₂N), 3.53 (уш. с, 2H, СH₂), 3.53-3.63 (м, 2H, CH₂), 3.75-3.79 (м, 1H, HCH), 4.09 (т, 1H, ²J_HH =8.7 Гц, ³J_HH =8.7 Гц, HCH), 4.76 (уш. с, 1Н, CH), 7.01 (т, 1H, ³J_HН =8.9 Гц, ⁴J_HF = 8.9 Гц, CH_Ar), 7.13 (д, 1H, ³J_HН =8.9 Гц, CH_Ar), 7.45 (д, 1H, ³J_HF =14.7 Гц, CH_Ar), 7.77 (с, 1H, CH_Ar).

Спектр ¹³C{¹H} ЯМР (CD₃OD) δ, м.д.: 12.02 (c, CH₃), 18.64 (c, CH₃), 22.43 (c, CH₃), 43.15 (c, СН₂), 49.15 (с, CH₂), 51.85 (c, CH₂), 54.14 (c, CH₂), 58.98 (c, CH₂), 73.45 (c, CH), 108.44 (д, J_CF = 26.5 Гц, C_Ar), 115.48 (д, J_CF = 2.5 Гц, C_Ar), 120.36 (д, J_CF = 3.4 Гц, C_Ar), 132.61 (c, C_Ar), 134.73 (д, J_CF = 10.5 Гц, C_Ar), 136.76 (c, C_Ar), 137.72 (д, J_CF = 9.2 Гц, C_Ar), 140.00 (c, C_Ar), 145.71 (c, C_Ar), 152.72 (c, C_Ar), 156.60 (c, C=O), 156.71 (д, J_CF = 244.7 Гц, C_Ar), 174.05 (c, C=O).

Масс-спектр (HRMS-ESI): найдено m/z 472.2360[М+H]⁺; вычислено для [C₂₄H₃₁FN₅O₄] ⁺ 472.2355.

Пример 15. Исследование антибактериальной активности заявленных оксазолидинонов на основе производных пиридоксина in vitro

Изучение антибактериальной активности заявленных соединений I-1 – I-14 проводилось на эталонных штаммах Enterococcus faecalis ATCC 29212, Enterococcus faecium ATCC 19434, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Bacillus cereus ATCC 11778, Bacillus subtilis ATCC 6633. Штаммы получены из коллекции ФБУН «Государственный научный Центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Серпухов, Россия). Сравнительная оценка спектра антибактериального действия проводилась с использованием микрометода определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) методом серийных разведений на ГМФ-бульоне [Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1890-04) / М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 91 с.].

Метод разведения основан на использовании двойных последовательных разведений концентраций заявленных соединений от максимальной к минимальной. Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых соединений и без них. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация заявленного соединения недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации заявленного соединения рост микроорганизмов замедляется.

Первую наименьшую концентрацию заявленного соединения (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост, принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК).

Для приготовления инокулюма использовали чистую, суточную культуру бактерий, выросших на ГМФ-агаре. В стерильном изотоническом растворе хлорида натрия готовили взвесь микроорганизмов, доводя плотность инокулюма до 0.5 по стандарту МакФарланда (1.5⋅10⁸ КОЕ/мл). Затем полученную суспензию микроорганизмов разводили до концентрации 10⁷ КОЕ/мл ГМФ-бульоном. Инокулюм использовали в течение 15 минут после приготовления, чистота бактериальных штаммов контролировалась перед каждым экспериментом.

В асептических условиях в лунки каждого планшета вносили по 100 мкл бульона Мюллера-Хинтон; в первую лунку вносили исследуемое соединение в концентрации 128 мкг/мл в объеме 100 мкл и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0.06 мкг/мл. Затем в каждую лунку вносили приготовленный инокулюм, разводя тем самым вдвое концентрацию заявленных соединений (стартовая концентрация составила 64 мкг/мл). Для каждого соединения в эксперименте выполняли три технических повтора. В качестве контроля дополнительно включали лунки, не содержащие тестируемых соединений (контроль роста культуры). Кроме того, ставился контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 37 °С в течение 18-24 часов. В качестве препарата сравнения использовали линезолид.

Как видно из представленных в Таблице 1 на Фиг. 1 данных, наибольшей антибактериальной активностью обладают соединения I-1, I-3, I-8 и I-9.

Для соединений I-1, I-3, I-8 и I-9 было проведено углубленное исследование антибактериальной активности на клинических штаммах грамположительных бактерий (Enterococcus faecalis 1465, Enterococcus faecalis 4223, Staphylococcus aureus 1817, Staphylococcus aureus MRSA 1822, Staphylococcus auricularis NKC 7, Staphylococcus epidermidis NKC 37/1, Staphylococcus haemolyticus NKC 31/2). Бактериальные штаммы получены из лаборатории бактериологии научно-клинического центра регенеративной и прецизионной медицины (Казань, Россия) и из лаборатории бактериологии республиканской клинической больницы (Казань, Россия). В качестве препарата сравнения использовали линезолид. Как видно из представленных в Таблице 2 на Фиг. 2 данных, соединения I-1, I-3, I-8 и I-9 обладали выраженной антибактериальной активностью в отношении клинических грамположительных бактериальных штаммов.

Пример 16. Исследование цитотоксичности заявленных оксазолидинонов на основе производных пиридоксина in vitro

Цитотоксичность двух проявивших наибольшую антибактериальную активность соединений (I-1 и I-3), а также линезолида была определена в отношении первичных условно-нормальных клеток человека (MSС – мультипотентные клетки и HSF-клетки фибробластов кожи человека были выделены из эксплантов, культивировались в стандартных условиях - 5 %-ного СО₂ при 37 °С) с помощью пролифертивного МТТ-теста с последующим построением кривой доза-эффект и определения концентраций полумаксимального ингибирования роста клеток (СС₅₀).

Клетки культивировали в среде α-MEM (содержащей глутамин, 10 %-ную эмбриональную телячью сыворотку, 1 % пенициллин-стрептомицин) в атмосфере 5 %-ного СО₂ при 37 °С до образования монослоя. Для получения клеточной суспензии монослой клеток трипсинизировали с последующей инактивацией трипсина. Для осуществления трехдневного теста в лунки 96- луночного планшета вносили 30000 клеток в 200 микролитрах культуральной среды. Перед внесением в планшет клетки тщательно суспензировали. Далее планшеты с клетками инкубировали 24 часа в стандартных условиях (в атмосфере 5 %-ного СО₂ при 37 °С) для адгезии клеток к субстрату.

По истечении времени инкубации в стерильном 96-ти луночном планшете готовили серийные разведения анализируемых соединений (8 концентраций с шагом два). В лунки планшета с клетками вносили аликвоты приготовленных растворов исследуемых соединений в объеме 22 микролитра в каждую лунку. После внесения исследуемых соединений клетки культивировали в стандартных условиях в течение 72 часов. По истечении времени инкубации культуральную среду с исследуемыми веществами удаляли из планшета с помощью вакуумного аспиратора. Далее в каждую лунку планшета вносили краситель MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид, 5 мг/мл в растворе Хэнкса), краситель добавляли в соотношении 1:9 (1 мл красителя и 9 мл культуральной среды). Приготовленную реакционную смесь вносили в объеме 100 мкл в каждую лунку планшета и инкубировали в СО₂ - инкубаторе 3 часа, после чего удаляли смесь культуральной среды с красителем вакуумным аспиратором. Далее в каждую лунку планшета вносили 100 мкл ДМСО и инкубировали 5-10 минут, по истечении времени инкубации детектировали сигнал оптического поглощения при помощи планшетного ридера при 555 нм (референтная длина волны – 700 нм). Исследование проводили в трех независимых повторах.

На основе полученных данных оптического поглощения рассчитывали концентрацию полумаксимального ингибирования роста клеток (CС₅₀), принимая жизнеспособность клеток в контрольных лунках за 100%. Результаты представляли в процентном отношении к контролю (клетки, которые не обрабатывали исследуемыми соединениями). Строили кривую «доза-эффект» и определяли величины СC₅₀ тестируемых соединений с помощью программного обеспечения OriginPro8. Результаты исследования представлены в таблице 3 на Фиг. 3.

По результатам исследования цитотоксической активности можно сделать вывод, что оба исследованных соединения обладают сопоставимой с линезолидом токсичностью in vitro.

Пример 17. Определение антибактериальной активности in vitro в отношении клеток S. Aureus и E. Faecium в составе биопленки

Перед началом исследования проводили обязательное контрольное определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) у используемых штаммов по стандартной методике (как описано в примере 15). Все операции проводили в стерильных условиях.

Исследование влияния соединения I-3 и линезолида на бактерии в составе биопленки проводили на эталонном штамме S. aureus ATCC 29213 и клиническом штамме E. faecium 19434. Для этого бактерии выращивали в среде в течение 3 суток при температуре 37 °С без механизма качания для получения плотной биопленки. Затем биопленку промывали стерильным 0.9 % раствором NaCl и заливали свежей стерильной средой. Соединение I-3 и линезолид вносили в концентрациях 4, 16 и 64 мкг/мл и инкубировали в течение суток. Далее удаляли культуральную жидкость из лунок, однократно промывали 0.9 % раствором NaCl для удаления неадгезированных клеток и оценивали жизнеспособность клеток в составе биопленок по количеству КОЕ методом Drop plate анализа. Для этого биопленку механически снимали с поверхности и гомогенизировали в 0.9 % NaCl путем пипетирования и ультразвуковой обработки. Затем готовили серийные 10-кратные разведения бактериальной суспензии в 0.9 % NaCl и по 5 мкл суспензии переносили на чашки с твердой питательной средой. КОЕ подсчитывали из капель, содержащих 5-10 колоний.

Результаты исследования антибактериальной активности I-3 в отношении S. aureus и E. faecium, погруженных в матрикс биопленки, по сравнению с линезолидом, представлены на рисунке 1 (1А и 1Б) на Фиг.4.

В отношении S. aureus в составе биопленки соединение I-3 проявило сопоставимую с линезолидом активность. В отношении штамма E. faecium соединение I-3 проявило более высокую активность по сравнению с линезолидом, поскольку количество КОЕ в концентрациях 16 и 64 мкг/мл было ниже почти на порядок.

Пример 18. Исследование острой токсичности соединения I-3 при внутрижелудочном способе введения мышам

Исследование острой токсичности соединения I-3 проводилось на мышах СD-1 (ICR) (6-8 недель, 20-25 г). Формировали группы, состоящие из 10 животных обоего пола (5 самок и 5 самцов). Использовали однократное внутрижелудочное введение с применением желудочного зонда, доза составляла 2000 мг/кг. Исследуемое соединение вводили лишенным корма животным (на промежуток времени не менее 3-4 часов) со свободным доступом к воде. Объем введения был рассчитан индивидуально для каждого животного, основываясь на массе тела, зарегистрированной непосредственно перед введением вещества. Доступ к воде и корму был возобновлен через 1 час после введения. Сразу после введения не наблюдалось каких-либо отрицательных реакций, животные чувствовали себя хорошо. Животные наблюдались индивидуально, период постнаблюдения составил 14 дней. Гибели животных зафиксировано не было. В ходе эксперимента проводили оценку общего состояния (интегральные показатели) и клинический осмотр животных. После окончания эксперимента проводили макроскопический анализ.

По результатам макроскопического анализа значимых повреждений и отличий между опытной и контрольной группой не наблюдалось. Полученные результаты указывают на то, что значение ЛД₅₀ для I-3 превышает 2000 мг/кг (Таблица 4 на Фиг. 5), что свидетельствует о его низкой токсичности. Согласно полученным данным, соединение I-3 относится к 3 классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76, а согласно гармонизированной системе классификации опасности и маркировки химической продукции - к 5 категории токсичности.

Таким образом, из представленных выше примеров можно сделать вывод, что заявителем достигнут заявленный технический результат, а именно – расширен арсенал известных средств указанного назначения путем создания новых соединений оксазолидинонового ряда, содержащих фрагменты производных пиридоксина, общей формулы I, обладающих высокой антибактериальной активностью, в т.ч. в отношении клинических штаммов грамположительных бактерий и биопленок, а также низкой токсичностью.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью отличительных признаков, обеспечивающих достижение заявленных результатов.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как не является очевидным для специалиста в данной области науки и техники.

Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», так как может быть реализовано на любом специализированном предприятии с использованием стандартного оборудования, известных отечественных материалов и технологий.

Изобретение относится к химии органических гетероциклических соединений, а именно к новым оксазолидинонам на основе производных пиридоксина общей формулы I, которые обладают антибактериальной активностью и могут найти применение в медицине и ветеринарии. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 18 пр.

,

1. Оксазолидиноны на основе производных пиридоксина общей формулы I,

где

2. Оксазолидиноны на основе производных пиридоксина по п. 1, обладающие антибактериальной активностью.