СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ Российский патент 2000 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/18 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологических лабораториях различного профиля.

Известен способ определения лекарственной чувствительности микобактерий методом абсолютных концентраций препарата в плотных средах [1].

В этом способе в различные порции питательной среды вносят соответствующее количество лекарственного противотуберкулезного препарата.

Питательную среду с препаратом разливают по пробиркам и коагулируют. Далее осуществляют дозированный посев исследуемого материала в пробирки.

При отсутствии роста микобактерий на питательной среде, содержащей определенное количество лекарственного препарата, определяют степень чувствительности микобактерий к лекарственному препарату по величине его концентрации, ингибирующей рост микобактерий.

Недостатком этого способа является то, что при культивировании микобактерий на питательной среде, в которую предварительно внесены различные концентрации лекарственного препарата, последний может до посева вступать в реакцию с питательной средой и тем самым снижать свою биологическую активность, что повлечет за собой искажение значений степени лекарственной чувствительности микобактерий к этому препарату и приведет к ошибкам в дозировке препарата при лечении туберкулеза (особенно при малых концентрациях).

Наиболее близким к заявляемому по технической сущности и достигаемому результату является способ определения лекарственной чувствительности микобактерий по ингибирующему действию на них, "луночный" [2].

Способ включает посев микобактерий на питательную среду и последующее внесение лекарственного препарата в эту среду.

О лекарственной чувствительности микобактерий в этом способе также судят по величине концентрации лекарственного препарата, ингибирующего рост микобактерий.

Способ обладает большей достоверностью, т.к. в этом способе не происходит снижение биологической активности лекарственного препарата. Его в отличие от известного вносят в питательную среду, содержащую микобактерии, и он не вступает до внесения последних в реакцию с питательной средой.

Недостатком этого способа является то, что до внесения лекарственного препарата часть микобактерий начинает расти на питательной среде, искажая, тем самым, достоверность результатов.

В основу изобретения положена задача повышения достоверности определения лекарственной чувствительности микобактерий при снижении сроков определения.

Поставленная задача решается тем, что в способе определения лекарственной чувствительности микобактерий по ингибирующему действию на них, включающем посев исследуемого материала на питательную среду и внесение лекарственного препарата, внесение последнего осуществляют непосредственно в исследуемый материал до посева.

При этом посев проводят на питательную среду Мордовского [3].

Внесение различных концентраций лекарственного препарата непосредственно в исследуемый материал до посева в питательную среду позволяет исключить возможность роста микобактерий на питательной среде до внесения лекарственного препарата и тем самым достоверно определить лекарственную чувствительность микобактерий к последнему. Такое воздействие препарата на микобактерии максимально приближено к условиям макроорганизма (человека).

Проведение посева на питательную среду Мордовского позволяет сократить сроки выдачи результатов исследований.

ПРИМЕР
Берут культуру микобактерий, выделенную от больного. Приготовляют ее суспензию по стандарту мутности, равному 10 ед. ГКИ (необходимо приготовить взвесь в количестве не менее 0,5 мл). Далее приготовляют удвоенную стандартную концентрацию противотуберкулезных препаратов начальной, средней и высокой степени. Берется равное количество суспензии и противотуберкулезного препарата каждой концентрации. В каждую пробирку с суспензией добавляется по 0,5 мл лекарственного препарата каждой концентрации. Далее начинают засевать этой взвесью питательную среду Мордовского [3] в количестве 0,1 мл взвеси. Необходимо учитывать объем питательной среды. Затем двое суток выдерживают горизонтально в темноте при температуре 32^oC, а далее переводят в вертикальное положение. У этой среды период культивирования составляет 10 суток. Отсутствие роста в пробирках, содержащих определенную концентрацию препарата, указывает на чувствительность МБТ к лекарственному препарату, а наличие роста - на устойчивость к нему. Результаты исследований сводят в таблицы.

Предложенный метод определения чувствительности микобактерий к лекарственному препарату показал, что сроки роста микобактерий при культивировании в среднем сократились на 10 - 20%, а лекарственно устойчивых на 25 - 30%, что позволило сократить сроки выдачи результатов исследований.

Выход микробной массы в период оптимальных сроков (на 8 - 10 сутки) увеличился в среднем в 2 - 2,2 раза. Таким образом, предложенный метод повышает точность определения чувствительности микобактерий к лекарственному препарату в более ранние сроки и снижает погрешность в определении степени чувствительности к лекарственному препарату.

Литература
1. Бактериологические методы диагностики силикотуберкулеза. / Инструктивное письмо. Свердловский НИИ туберкулеза, Свердловск, 1984, с.11.

2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований под ред. М.О. Биргера М.: Медицина, 1967, с.118.

3. А.с. СССР N 1110173 от 23.04.84.

Изобретение относится к микробиологии. Может быть использовано в микробиологических лабораториях различного профиля. Способ предусматривает внесение лекарственного препарата в суспензию клеток микобактерий. Этой взвесью засевают питательную среду Мордовского, определяют степень чувствительности микобактерий к лекарственному препарату по величине его концентрации, ингибирующей рост микобактерий. Способ обладает большей достоверностью и позволяет сократить сроки получения результатов. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Способ определения лекарственной чувствительности микобактерий по ингибирующему действию на них, включающий посев исследуемого материала на питательную среду и внесение лекарственного препарата, отличающийся тем, что внесение последнего осуществляют непосредственно в исследуемый материал до посева. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что посев проводят на питательную среду Мордовского.