СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 1997 года по МПК C12Q1/04 

Предложение относится к области медицинской микробиологии. Может быть использовано в широкой сети противотуберкулезных диспансеров, больниц, НИИ.

Для быстрого определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза в настоящее время используются жидкие среды Школьниковой, Миддлбрука, 7Н11, 7Н12, кровяная среда, культивирование на стеклах в жидкой среде (Метод Прайса), ускоренное выращивание микобактериальных культур при помощи аэрации, радиометрической системой фиксации роста.

Прототипом является способ определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (а.с. N1661218). Данный способ заключается в том, что в питательную среду Левенштейна-Иенсена или среду Попеску вносят азотно-кислый калий или натрий, а затем те или иные лекарственные препараты. Культуру микобактерий туберкулеза, выделенную от больного, в определенном количестве засевают на плотную питательную среду, разлитую в пробирки и выдерживают в термостате. Через 8-14 дней в одну из контрольных пробирок добавляют йодистый крахмал с серной кислотой в количестве 2-3 капель. В случае положительной нитратредуктазной реакции в контроле реактив добавляют в пробирки со средами, содержащими лекарственные препараты, и в течение 1-3 мин по результатам окрашивания учитывают устойчивость микобактерий туберкулеза к этим препаратам, отсутствие окрашивания на чувствительность.

Известные способы, в том числе и способ определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза, обладают рядом недостатков: часть методов является не доступной для обычной микробиологической лаборатории; не достаточно достоверны за счет возможного роста в среде посторонней, неспецифической микрофлоры.

Предлагаемый нами способ определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза прост в выполнении, не требует дополнительных сред и реактивов, значительно сокращает время проведения анализа (4-7 дней), доступен для любой микробиологической лаборатории.

Целью настоящего предложения является сокращение сроков определения лекарственной устойчивости микобактерий до 4-7 дней для своевременного назначения рациональной химиотерапии.

Способ осуществляется следующим образом: для определения лекарственной устойчивости туберкулезных микобактерий используют нитрат редуктазную реакцию, для этого применяется плотная питательная среда Попеску с различными химиопрепаратами, азотно-кислый натрий с дополнительным введением 0,3 мл дистиллированной воды.

Азотно-кислый натрий в концентрации 1 г.л добавляют в готовую среду перед свертыванием. Перед посевом исследуемой культуры на косяки наносят 2 мл стерильной дистиллированной воды.

Для посева используют микобактерии туберкулеза, полученные из патологического материала. Суспензию культуры стандартизируют по бактериальному стандарту мутности (500 млн. /мл микробных клеток), затем разводят физиологическим раствором 1:10 и засевают по 0,2 мл суспензии в контрольные пробирки и пробирки с антибактериальными препаратами.

Выявление нитратредуктазной активности проводят следующим образом: 2-3 капли стандартного реактива Грисса (7,0-7,5% раствор на дистиллированной воде) закапываются на косяки с посевом культуры. Красно-ржавое окрашивание воды, связанное с ростом культуры, считают положительной нитрат-редуктазной реакцией, а при отсутствии окрашивания чувствительной к лекарственным препаратам.

Для достоверных результатов определения лекарственной устойчивости необходимо не менее двух контролей.

Из данных, представленных в таблице 1, видно, что сроки определения лекарственной устойчивости предлагаемым способом могут быть сокращены до 4-7 дней.

Источники информации
1. Авторское свидетельство N 1661218 "Способ определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза", C 12 Q 1/04, 1991 (прототип)
2. Приказ МЗ СССР N 558 "Об унификации микробиологических методов исследования при туберкулезе". М, 1978.

Использование: медицинская промышленность. Сущность изобретения: для осуществления способа осуществляют посев исследуемой культуры микробактерий туберкулеза на плотную питательную среду с азотно-кислым натрием и на поверхность среды дополнительно наносят дистиллированную воду, инкубацию осуществляют в течение 4-7 дней, затем добавляют реактив Грисса и при наличии окрашивания дистиллированной воды в красно-ржавый цвет культуру относят к устойчивой, а при отсутствии окрашивания - к чувствительной к лекарственному препарату. 1 табл.

Способ определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза путем посева исследуемой культуры на плотную питательную среду с азотнокислым натрием, инкубации, добавления реактива Грисса и определения лекарственной устойчивости, отличающийся тем, что перед инкубацией на поверхность плотной питательной среды дополнительно наносят дистиллированную воду, инкубацию осуществляют в течение 4 7 дней и при наличии окрашивания дистиллированной воды в красно-ржавый цвет культуру относят к устойчивой, а при отсутствии окрашивания к чувствительной к лекарственному препарату.