РАСТВОРЫ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАТОВ ОРГАНОВ И СПОСОБ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ОРГАНА Российский патент 2001 года по МПК A01N1/02 

Настоящее изобретение относится к кардиоплегическим растворам, растворам для сохранения органов и к способам трансплантации органов. Более конкретно, это изобретение относится к кардиоплегическим растворам для прекращения функции органа для трансплантации, к предохраняющим растворам для перфузии и хранения органа в ожидании имплантации, и к способам использования кардиоплегических и предохраняющих растворов во время трансплантации органа.

За многие годы в результате научных исследований достигнут значительный прогресс в понимании клеточных механизмов, а также разработке новых методик трансплантации для поддержания жизнеспособности органов не только во время хранения, но также после реперфузии этих органов. В результате этого трансплантация органов, включая трансплантацию сердца, стала принятой плановой операцией. Существенным фактором, ограничивающим клиническое применение трансплантации органов, является снижение жизнеспособности органа после удаления у донора.

В настоящее время два наиболее часто используемых способа для трансплантации сердца представляют собой простую гипотермическую консервацию и постоянную пульсирующую перфузию. При простой гипотермической консервации сердце останавливается кардиоплегическим раствором, затем удаляется у донора и быстро охлаждается. Это обычно достигается сочетанием охлаждения и короткого периода перфузии для насколько возможно быстрого снижения температуры до уровня от 0^oC до 4^oC, на котором она может поддерживаться в течение приблизительно до 6 часов. Хотя холодовая консервация позволяет трансплантировать органы, время, в течение которого орган остается жизнеспособным, непродолжительно. Холодовая консервация снижает скорость, с которой разрушаются внутриклеточные ферменты, существенные клеточные компоненты, необходимые для жизнеспособности органа, но не прекращает метаболизм.

Второй способ сохранения органов, который подвергся обширному исследованию, постоянная пульсирующая перфузия, включает следующие этапы: (1) пульсирующий поток, (2) гипотермия, (3) мембранная оксигенация и (4) перфузат, содержащий как альбумин, так и липиды. Хотя использование постоянной пульсирующей перфузии технически более сложно и требует больших затрат, ее преимущества перед простой гипотермией включают более длительную жизнеспособность органа и тестирование жизнеспособности перед трансплантацией.

Проведены обширные исследования композиций многочисленных кардиоплегических и предохраняющих растворов. Например, Galinanes et al. (M.Galinanes, T. Murachita и D.J.Hearse (1991) The Journal of Heart and Lunq Transplantation (11) 624-635, сравнили защитные свойства трех кардиоплегических растворов при низкой температуре и в течение коротких периодов времени. G.Tian et al. (1991) The Journal of Heart and Lunq Transplantation (10) 975-985, провели сравнение растворов для холодовой защиты, при которой предохраняющие растворы ограничивали время хранения органов.

В патенте США N 5145771, выданном Lemasters et al., был раскрыт консервирующий раствор для хранения органов, который может использоваться при температурах от 0^oC до 37^oC, но обеспечивал ограниченное время консервации. Раствор требует использования коллоида гидроксиэтилкрахмала для поддержания онкотического давления, препятствующего межклеточному отеку. В настоящем изобретении отек не представляет проблемы, поскольку нет свободных кислородных радикалов, способных вызвать повреждение органа.

Хранение органов при температуре от 0^oC до 4^oC приводит к повреждению органа во время консервации и при реперфузии теплым реперфузионным раствором. Повреждение органа происходит вследствие потери эндотелиальных клеток, вызванной растворенным кислородом в реперфузионном растворе. Хотя некоторые из ранее предложенных растворов были эффективны в плане увеличения времени консервации донорских органов и уменьшения повреждения органов при реперфузии, повреждение клеток все же происходит. Поэтому желательно увеличить продолжительность жизнеспособности органов и улучшить качество трансплантированного органа. Увеличение периода жизнеспособности органов позволяет в течение достаточного времени проводить тесты на совместимость донора и реципиента и увеличить доступность органов.

На восстановление сердечной функции также большое влияние оказывает время, прошедшее между удалением у донора и реперфузией, а также эффективность защитных вмешательств, применяемых в течение этого периода. Для преодоления повреждающего действия ишемии использовались методики, такие как прерывистая или постоянная перфузия. Наконец, перфузия как таковая, хотя и необходимая для выживания ткани, может начать ряд процессов, известных как повреждение, вызванное реперфузией, которое, в случае если оно происходит, ограничивает степень или скорость восстановления. Таким образом, желательно изменение сущности реперфузии для улучшения восстановления миокарда, подвергнутого ишемии/реперфузии.

Более конкретно, в результате прекращения кровообращения, а следовательно, поступления кислорода (т.е. ишемии) во время трансплантации, натриевый насос, который обычно поддерживает состав внутриклеточной жидкости, характеризующийся высоким содержанием калия, магния и фосфата и низким содержанием натрия и хлорида, прекращает функционировать вследствие отсутствия энергии, что приводит к входящему потоку натрия и хлорида в клетки и оттоку калия и в меньшей степени магния из клеток. В результате этих быстрых изменений распределения Na⁺-H⁺ в клетке происходит реальное накопление, а не просто обмен, внутриклеточных ионов с последующим накоплением воды и выраженной потерей калия и магния, приводящим к повреждению органа. Защитное действие ингибиторов обмена Na/H, включая амилорид и его аналоги, на миокард при реперфузии было изучено Moffat et al. (M.P.Moffat and M.Karmazyn, (1993), J.Molec.Cell Cardiol (25), 959-971).

Поэтому основной целью настоящего изобретения является обеспечение консервирующих растворов для пульсирующей перфузии и хранения органов во время ожидания имплантации, которые подавляют обмен ионов, удлиняют жизнеспособность органов и уменьшают повреждение клеток.

Другой целью настоящего изобретения является обеспечение способа прекращения функции и консервации органов, которые увеличивают максимальную продолжительность жизни органов во время трансплантации.

Еще одной целью настоящего изобретения является предоставление способа трансплантации органов, при котором консервация органов может осуществляться при комнатной температуре в течение по крайней мере 24 часов без существенного повреждения органов.

Другие цели, признаки и преимущества изобретения будут очевидны из приводимого ниже подробного описания изобретения.

В соответствии с этими целями и принципами этого изобретения заявлены кардиоплегические растворы и предохраняющие растворы для использования при трансплантации органов и способы трансплантации органов с использованием раствора в комбинации с кардиоплегическими растворами, причем способы увеличивают время консервации и уменьшают повреждение органа.

Было установлено, что кардиоплегический раствор, содержащий включающее амилоридсоединение, эффективен для достижения целей этого изобретения. В одном аспекте этого изобретения кардиоплегический раствор включает сбалансированный изотонический раствор, включающий ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве по крайней мере 0,5 мкМ, предпочтительно от приблизительно 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ и наиболее предпочтительно от 1,0 мкМ до 3,0 мкМ содержащего амилоридсоединения и воду в количестве, достаточном для приготовления одного литра раствора.

Кардиоплегический раствор также предпочтительно содержит глюкозу для усиления консервации органа, аденозин для предотвращения фибрилляции органа перед удалением у донора и ЭДТК в качестве хелатообразующего средства. Необязательно, кардиоплегический раствор содержит гепарин и по крайней мере один антиоксидант.

Предохраняющий раствор, хотя и аналогичный кардиоплегическому раствору в том, что он основан на сбалансированном изотоническом растворе, включающем ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве, также включает от 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ содержащего амилоридсоединения.

Предохраняющий раствор предпочтительно включает по крайней мере один антиоксидант, такой как диметил тиомочевина (ДМТМ), каталазу в качестве тушителя перекиси водорода и апоферритин для уменьшения содержания железа в предохраняющем растворе. Поскольку функция органа была остановлена кардиоплегическим раствором, предохраняющий раствор включает меньше аденозина и обычно не требуется гепарин. Кроме того, предохраняющие растворы могут необязательно включать гормоны, такие как инсулин и простагландин, и антибиотики.

Для включения в изотонический раствор как кардиоплегического раствора, так и предохраняющего раствора соединения, содержащего амилорид, может быть использован амилорид как таковой или аналоги амилорида, такие как гексаметилен амилорид (ГМА), диметил амилорид (ДМА), этил изопропил амилорид (ЭИПА) или метил изобутил амилорид (МИА), все из которых подавляют Na⁺-H⁺ в клетках органа. Диметил амилорид является особенно предпочтительным.

Изобретение также обеспечивает способ трансплантации органа, который включает этапы прекращения функции и удаления органа у донора, и защиты и консервации органа, предназначенного для имплантации. Способ изобретения включает прекращение функции органа, который предполагается взять, кардиоплегическим раствором. Орган удаляется и подсоединяется к перфузионному аппарату, где он сохраняется при температуре приблизительно от 0^oC до приблизительно 37^oC, предпочтительно от приблизительно 15^oC до приблизительно 25^oC при перфузии предохраняющим раствором. Таким образом, новые признаки настоящего изобретения включают консервацию органа при теплых температурах, т.е., приблизительно до комнатной температуры, при перфузии органа. Считается, что способность сохранять орган при комнатной температуре или близкой к ней предотвращает механическое повреждение, которое может произойти в результате холодовой консервации, и что постоянная перфузия предохраняющим раствором поддерживает метаболические потребности органа и избегает возможные метаболические блоки. В результате, продолжительность консервации органа может возрасти по крайней мере до 24 часов.

Настоящее изобретение направлено на создание новых кардиоплегических растворов для прекращения функции органа, предназначенного для трансплантации, и новых предохраняющих растворов для хранения и перфузии органов, предназначенных для имплантации пациенту, нуждающемуся в таком имплантате. Подходящие органы, на которых могут использоваться растворы этого изобретения, включают, например, сердце, печень, почки и поджелудочную железу.

Все отдельные компоненты настоящего изобретения не токсичны и, как было установлено, устойчивы во время хранения. Хотя некоторые из компонентов настоящего изобретения аналогичны таковым других известных кардиоплегических и предохраняющих растворов, неожиданно было обнаружено, что добавление амилорида или содержащего амилоридсоединения в сбалансированный изотонический раствор, включающий ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве для приготовления кардиоплегического раствора и его использование с предохраняющим раствором настоящего изобретения позволяет сохранять органы при комнатной температуре по крайней мере в течение 24 часов без существенного повреждения органа.

Как кардиоплегические растворы, так и предохраняющие растворы настоящего изобретения, основаны на сбалансированном изотоническом растворе, включающем ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат натрия в физиологически приемлемом количестве. Определенные из этих типов растворов хорошо известны, такие как раствор, описанный ниже, который имеет состав, приведенный в таблице.

Кардиоплегический раствор
Кардиоплегический раствор приготавливается, начиная со сбалансированного изотонического раствора, описанного выше. Количество хлорида калия в кардиоплегическом растворе составляет предпочтительно от приблизительно 20 мМ до приблизительно 30 мМ. В сбалансированный изотонический раствор добавляется содержащее амилоридсоединение в количестве по крайней мере 0,5 мкМ, предпочтительно от приблизительно 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, и наиболее предпочтительно от 1,0 мкМ до 3,0 мкМ. С помощью содержащего амилоридсоединения подразумевается включение амилорида и аналогов амилорида. Добавление амилорида, химически обозначаемого как 3,5-диамино-6- хлор-Н-(диамин метилен) пиразинкарбоксамид моногидрохлорид, как было установлено, подавляет обмен Na⁺-H⁺. Другие содержащие амилоридсоединения или аналоги, которые могут использоваться в кардиоплегическом растворе, включают, например, гексаметилен амилорид (ГМА), химически обозначаемый как 5-(N,N-гексаметилен)-амилорид, диметил амилорид (ДМА), обозначаемый 5-(N,N,-диметил)-амилорид, этил изопропил амилорид (ЭИПА), обозначаемый 5-(N-этил-N-изопропил)-амилорид, и метил изобутил амилорид (МИА), обозначаемый 5-(N-метил-N-изобутил)-амилорид (Merck Sharpe & Dohme, West Point, Pa).

Для того, чтобы быть эффективным, кардиоплегический раствор должен предотвращать фибрилляцию органа в относительно короткий период времени, например от 2 минут до 5 минут или менее. Для этой цели, в раствор добавляется аденозин в количестве от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 15 мкМ на литр, предпочтительно, приблизительно 10 мкМ на литр. Аденозин быстро останавливает сердце (в пределах секунд), улучшает предохраняющие свойства и увеличивает потребление глюкозы.

Кардиоплегический раствор также предпочтительно включает этилен диаминтетрауксусную кислоту (ЭДТК) в количестве от 0,5 мМ до приблизительно 1,5 мМ в качестве хелатообразующего вещества. Раствор также может необязательно содержать другие ингредиенты, такие как по крайней мере один антиоксидант, например каталазу, в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов через перекись водорода.

Гепарин используется при осуществлении способа этого изобретения и может быть включен либо непосредственно в кардиоплегический раствор или он может вводиться донору органа отдельно. Добавление гепарина в количестве от приблизительно 500 единиц до приблизительно 1500 единиц, предпочтительно 1000 единиц, требуется для предотвращения образования сгустков крови внутри коронарных артерий во время кардиоплегической остановки и иссечения перед хранением и имплантацией органа.

Предохраняющий раствор
Предохраняющий раствор предназначен для предотвращения различных механизмов, которые вызывают повреждение органа и, таким образом, должен представлять собой композицию, которая (1) предотвращает или ограничивает внутриклеточный ацидоз, (2) предотвращает расширение межклеточного пространства, (3) предотвращает повреждение свободными кислородными радикалами, особенно во время реперфузии, (4) обеспечивает восстановление макроэргических фосфатных соединений во время реперфузии, (5) поддерживает соответствующую метаболическую потребность и (6) предотвращает быстрые изменения внутриклеточного содержания Na⁺-H⁺-Ca⁺⁺ после реперфузии.

Хотя кардиоплегический раствор и предохраняющий раствор начинаются со сбалансированного изотонического раствора, описанного выше, имеются существенные различия в их конечных составах. Например, предохраняющий раствор начинается с изотонического раствора, в котором концентрация калия поддерживается предпочтительно, на уровне от 3,0 мМ до приблизительно 8,0 мМ. Хлорид магния может использоваться вместо хлорида калия.

В сбалансированный изотонический раствор добавляется содержащее амилоридсоединение в количестве от приблизительно 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, предпочтительно, 1,5-3,0 мкМ. Под содержащим амилоридсоединением подразумевается включение амилорида и аналогов амилорида. Добавление амилорида, химически обозначаемого как 3, 5-диамино-6-хлор-N-(диамин метилен) пиразинкарбоксамид моногидрохлорид, как было установлено, подавляет обмен Na⁺-Н⁺. Другие содержащие амилоридсоединения или аналоги, которые могут использоваться в кардиоплегическом растворе, включают, например, гексаметилен амилорид (ГМА), химически обозначаемый как 5-(N,N,-гексаметилен)-амилорид, диметил амилорид (ДМА), обозначаемый 5- (N,N,-диметил)-амилорид, этил изопропил амилорид (ЭИПА), обозначаемый 5-(N-этил-N-изопропил)- амилорид, и метил изобутил амилорид (МИА), обозначаемый 5-(N-метил-N-изобутьил)-амилорид (Merck Sharpe & Dohme.West Soint, Pa).

Хотя аденозин включен в предохраняющий раствор, количество аденозина значительно меньше, чем количество аденозина, присутствующего в кардиоплегическом растворе, потому что деятельность органа была ранее остановлена. Количество аденозина в предохраняющем растворе обычно составляет от 0,7 мкМ до приблизительно 2,0 мкМ, предпочтительно приблизительно 1,0 мкМ.

Предохраняющий раствор также предпочтительно включает этилен диаминтетрауксусную кислоту (ЭДТК) в количестве от 0,5 мМ до приблизительно 1,5 мМ в качестве хелатообразующего вещества. Было также установлено, что желательно добавлять от 10 нМ до приблизительно 100 нМ каприловой кислоты, которая помогает раствору обходить блокированную утилизацию жирных кислот, и от 10 мкг/л до 100 мкг/л апоферритина, который служит для удаления железа (Fe⁺⁺), которое вызывает разрушение клеток. Десферриоксамин может также использоваться для хелатирования железа. Дихлоруксусная кислота может использоваться для снижения уровня лактата.

Подходящие антиоксиданты включают, но не ограничиваются, аллопуринол, глутатион, бета-каротин, каталазу, супероксид дисмутазу, диметил тиомочевину (ДМТМ), дифенил фенилен диамин (ДФФД), маннитол или цианиданол в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов. Антиоксиданты присутствуют в количестве от 1 нМ до 10 нМ. Антибиотики могут добавляться в трансплантируемые органы, но они обычно не добавляются во время острых исследований.

Способ использования
Способ трансплантации настоящего изобретения состоит в прекращении функции органа с помощью кардиоплегического раствора, защите и сохранении органа предохраняющим раствором и реперфузии предохраняющим раствором.

В предпочтительном способе достаточное количество кардиоплегического раствора вводится для остановки, например, сердца и предотвращения фибрилляции. Затем хирург удаляет орган и подсоединяют сердце к перфузионному аппарату, включающиму трубки и насосы. Предохраняющий раствор затем перфузируется через сердце при продолжающейся оксигенации кислородом и двуокисью углерода, пока оно ожидает имплантацию пациенту. Было установлено, что эффективной является скорость перфузии 50 мл/ч при 1,0^oC. Способ перфузии сердца может осуществляться либо при постоянном потоке, либо постоянном давлении.

Раствор может использоваться при всех температурах в диапазоне от 0^oC до нормальной температуре тела, 37^oC. При температурах от приблизительно 12^oC до приблизительно 37^oC раствор обладает более выраженным действием, чем другие известные предохраняющие растворы. В отличие от других консервирующих растворов, он сохраняет защитные свойства при температуре выше 10^oC в течение по крайней мере 214 часов.

Следующие примеры приводятся для дальнейшей иллюстрации настоящего изобретения, и таким образом не должен рассматриваться как ограничивающие изобретение.

ПРИМЕР 1
Готовят один литр кардиоплегического раствора, имеющего следующий состав.

NaCl - 118 мМ
KCl - 30 мМ
CaCl₂ - 1,75 мМ
KH₂PO₄ - 1,2 мМ
MgSO₄ - 1,2 мМ
NaHCO₃ - 25 мМ
Глюкоза - 11 мМ
Аденозин - 10 мкМ
ЭДТК - 1,0 мкМ
ДМА - 1,0 мкМ
Гепарин - 1000 Единиц
Дистиллированная деионизированная вода - Сколько требуется
В мерную колбу емкостью 1000 мл наливают раствор Krebs-Henseleit и добавляют бидистиллированную воду для получения одного литра при перемешивании. Остальные компоненты добавляют по очереди. После добавления всех компонентов pH доводят до 7,3 с помощью NaOH, и содержимое колбы оксигенируют смесью O₂/CO₂:95/5%. Раствор перемешивают приблизительно в течение тридцати минут и фильтруют для удаления любых нерастворенных частиц (фильтр с порами размером 5,0 мкм). После стерильной фильтрации раствор готов к использованию.

ПРИМЕР 2
Готовят один литр подходящего раствора, имеющего следующий состав.

NaCl - 118 мМ
KCl - 4,7 мМ
CaCl₂ - 1,75 мМ
KH₂PO₄ - 1,2 мМ
MgSO₄ - 1,2 мМ
NaHCO₃ - 25 мМ
Глюкоза - 11 мМ
Аденозин - 1,0 мкМ
ЭДТК - 1,0 мкМ
Апоферритин - 100 мкг/л
Каталаза - 10 мкг/л
ДМТМ - 10 нМ
ДФФД - 10 нМ
Каприловая кислота - 50 нМ
ДМА - 3,0 мкМ
Инсулин - 200,0 мк Единиц/мл
Дистиллированная деионизированная вода - Сколько требуется
Предохранительный раствор готовят во многом таким же образом, как и кардиоплегический раствор примера 1, то есть добавлением в мембранную колбу емкостью 1000 мл раствора Krebs-Henseleit с бидистиллированной водой для получения одного литра при перемешивании. Остальные компоненты готовят по очереди. После добавления всех компонентов pH доводят до 7,3 с помощью NaOH, и содержимое колбы оксигенируют смесью O₂/CO₂:95/5%. Раствор перемешивают приблизительно в течение тридцати минут и фильтруют для удаления любых нерастворенных частиц (фильтр с порами размером 5,0 мкм). После стерильной фильтрации раствор готовят к использованию.

ПРИМЕР 3
Проводят общую анастезию у самки беспородной собаки массой около 20 кг. В течение всего вмешательства вводят IV гидрирующий раствор 5,0% декстрозы в 0,45% солевом растворе со скоростью 75 см³/ч. Сердце открывают путем стернотомии. Вводят кардиоплегический раствор примера 1 для остановки сердца, затем сердце иссекают. Сердце помещают в лед и быстро переносят в лабораторию и помещают в перфузионный аппарат при комнатной температуре, где в аорту вводят трубку для постоянной перфузии предохраняющим раствором примера 2. Через 2-3 минуты сердце начинает сокращаться с частотой пульса 50 ударов в минуту. Избытку предохраняющего раствора дают заполнить контейнер до тех пор, пока сердце не покроется им для обеспечения того, чтобы сердце плавало так, чтобы не повредить аорту. Перфузию раствора примера 2 продолжают в течение всего времени консервации. Сердце продолжает сокращаться в течение более 24 часов.

Этот эксперимент демонстрирует, что кардиоплегический и предохраняющий растворы и способы настоящего изобретения увеличивают время сохранения от взятия органа до трансплантации и позволяют органу оставаться при комнатной температуре без серьезного разрушения клеток органа.

Настоящее изобретение было подробно описано и с особой ссылкой на предпочтительные варианты реализации. Специалистам в этой области будет понятно, что могут быть внесены изменения без отхождения от его духа и объема притязаний. Соответственно, настоящее изобретение должно определяться нижеследующей формулой изобретения с эквивалентами пунктов формулы изобретения, включенными в нее.

Изобретение относится к кардиоплегическим растворам для сохранения органов, и способам трансплантации. Кардиоплегические растворы включают на литр раствора сбалансированный изотонический раствор ионов натрия, калия, кальция и магния и бикарбоната в физиологически премлемом количестве по крайней мере 0,5 мкМ, содержащего амилоридсоединения и воду, достаточную для приготовления литра раствора. Предохраняющие растворы включают на литр раствора сбалансированный изотонический раствор ионов натрия, калия, кальция и магния и бикарбоната в физиологически приемлемом количестве, от приблизительно 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилоридсоединения и воду, достаточную для приготовления литра раствора. Предохраняющий раствор может содержать ЭДТК, небольшое количество аденозина и по крайней мере один антиоксидант. Предложен способ защиты функции органа, консервации органа и трансплантации органа. Технический результат: консервирующие растворы и способ их приготовления обеспечивают подавление обмена ионов, удлиняют жизнеспособность органов и уменьшают повреждение клеток. 7 с. и 20 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Кардиоплегический раствор для остановки сердца, предназначенного для трансплантации, включающий на литр раствора: (а) сбалансированный изотонический раствор, включающий ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве; (b) приблизительно от 0,5 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилорид соединения; и (с) воду. 2. Кардиоплегический раствор по п.1, отличающийся тем, что указанное, содержащее амилорид-соединение, представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из амилорида, гексаметилен амилорида, диметил амилорида, этил изопропил амилорида и метил изобутил амилорида. 3. Кардиоплегический раствор по п.1, отличающийся тем, что дополнительно включает от приблизительно 0,5 мМ до приблизительно 1,5 мМ ЭДТК и от приблизительно 5,0 мкМ до приблизительно 15 мкМ аденозина. 4. Кардиоплегический раствор для остановки сердца, предназначенного для трансплантации, включающий на литр раствора:
NaCl - 85,0 - 145 мМ
KCl - 2,0 - 30 мМ
CaCl₂ - 0,5 - 2,5 мМ
KH₂PO₄ - 0,7 - 1,3 мМ
MgSO₄ - 0,9 - 4,8 мМ
NaHCO₃ - 15,0 - 35 мМ
Глюкоза - 1,0 - 50 мМ
ЭДТК - 0,5 - 1,5 мМ
Дистиллированная, деионизированная вода - Сколько требуется
и от приблизительно 0,5 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилорид-соединения. 5. Кардиоплегический раствор по п.4, отличающийся тем, что указанное, содержащее амилорид-соединение представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из амилорида, гексаметилен амилорида, диметил амилорида, этил изопропил амилорида и метил изобутил амилорида. 6. Кардиоплегический раствор по п.4, отличающийся тем, что дополнительно включает от приблизительно 5,0 мкМ до приблизительно 15 мкМ аденозина. 7. Кардиоплегический раствор по п.4, отличающийся тем, что дополнительно включает от приблизительно 500 ед. - до приблизительно 1500 ед. гепарина. 8. Кардиоплегический раствор по п.4, отличающийся тем, что дополнительно включает антиоксидант в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов. 9. Предохраняющий раствор для консервации и реперфузии органов, предназначенных для имплантации, включающий на литр раствора: (а) сбалансированный изотонический раствор, включающий ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве; (b) приблизительно от 0,7 мкМ до приблизительно 2,0 мкМ, аденозина; (с) приблизительно от 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилорид соединения; и (d) воду. 10. Предохраняющий раствор по п. 9, отличающийся тем, что указанное, содержащее амилорид-соединение, представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из амилорида, гексаметилен амилорида, диметил амилорида, этил изопропил амилорида и метил изобутил амилорида. 11. Предохраняющий раствор по п.9, отличающийся тем, что дополнительно включает, по меньшей мере, один антиоксидант в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов и от приблизительно 10 нМ до приблизительно 100 нМ каприловой кислоты. 12. Предохраняющий раствор по п.9, отличающийся тем, что дополнительно включает от приблизительно 100 мк ед./мл до приблизительно 500 мк ед./мл инсулина. 13. Предохраняющий раствор, пригодный для сохранения органов при консервации и реперфузии органов, предназначенных для имплантации, включающий на литр раствора:
NaCl - 85,0 - 145 мМ
KCl - 3,0 - 8,0 мМ
CaCl₂ - 1,0 - 2,0 мМ
KH₂PO₄ - 0,7 - 1,3 мМ
MgSO₄ - 0,9 - 4,8 мМ
NaHCO₃ - 15,0 - 35 мМ
Глюкоза - 1,0 - 50 мМ
ЭДТК - 0,5 - 1,5 мМ
Аденозин - 0,7 - 1,5 мкМ
Апоферритин - 1 - 100 мкг/л
Каталаза - 1 - 10 мкг/л
Каприловая кислота - 10 - 100 нМ
ДМТМ - 1 - 10 нМ
ДФФД - 1 - 10 нМ
Диметил амилорид - 1 - 5 мкМ
Дистиллированная, деионизированная вода - Сколько требуется
14. Способ защиты, консервации и реперфузии органов, предназначенных для имплантации, причем указанный способ включает: перфузию указанного органа раствором включающим на литр раствора: (а) сбалансированный изотонический раствор, включающий ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве; (b) приблизительно от 0,7 мкМ до приблизительно 2,0 мкМ, аденозина; (с) приблизительно от 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилорид-соединения; и (d) воду. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанное, содержащее амилорид-соединение представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из амилорида, гексаметилен амилорида, диметил амилорида, этил изопропил амилорида и метил изобутил амилорида. 16. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный раствор, дополнительно включает, по крайней мере, один антиоксидант в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов. 17. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный раствор дополнительно включает от приблизительно 100 мк ед./мл до приблизительно 500 мк ед. /мл инсулина. 18. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанный орган представляет собой сердце. 19. Способ по п.14, отличающийся тем, что дополнительно включает защиту и консервацию указанного органа в указанном растворе при температуре от приблизительно 0^oC до приблизительно 37^oC. 20. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанная температура составляет от 15^oC до 37^oC. 21. Способ защиты, консервации и реперфузии органа, предназначенного для имплантации, причем указанный способ включает: перфузию указанного органа раствором, включающим на литр раствора:
NaCl - 85,0 - 145 мМ
KCl - 3,0 - 8,0 мМ
CaCl₂ - 1,0 - 2,0 мМ
KH₂PO₄ - 0,7 - 1,3 мМ
MgSO₄ - 0,9 - 4,8 мМ
NaHCO₃ - 15,0 - 35 мМ
Глюкоза - 1,0 - 50 мМ
ЭДТК - 0,5 - 1,5 мМ
Апоферритин - 1 - 100 мкг/л
Каталаза - 1 - 10 мкг/л
Каприловая кислота - 10 - 100 нМ
ДМТМ - 1 - 10 нМ
ДФФД - 1 - 10 нМ
Диметил амилорид - 1 - 5 мкМ
Дистиллированная, деионизированная вода - Сколько требуется
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанный раствор дополнительно включает от приблизительно 0,7 мкМ до приблизительно 2,0 мкМ аденозина. 23. Способ по п.21, отличающийся тем, что раствор дополнительно включает, по крайней мере один антиоксидант в количестве, эффективном для подавления образования свободных кислородных радикалов. 24. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанный орган представляет собой сердце. 25. Способ по п.21, отличающийся тем, что дополнительно включает перфузию, защиту и консервацию указанного органа в указанном растворе при температуре от приблизительно 0^oC до приблизительно 37^oC. 26. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанная температура составляет от 15^oC до 37^oC. 27. Способ приготовления предохраняющего раствора для консервации и реперфузии органов, предназначенных для имплантации, включающего: (а) приготовление сбалансированного изотонического раствора, включающего ионы натрия, калия, кальция и магния и бикарбонат в физиологически приемлемом количестве, (b) подмешивание приблизительно от 1,0 мкМ до приблизительно 5,0 мкМ, содержащего амилорид-соединения; и (с) добавление воды.