СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ХИМИОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ АСЦИТНОЙ ФОРМОЙ РАКА ЯИЧНИКОВ III-IV СТАДИИ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/48 A61K31/665 

Способ определения индивидуальной чувствительности к химиотерапии больных асцитной формой рака яичников III-IV стадий.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для лечения больных распространенной формой рака яичников (III-IV стадии).

Известен способ определения чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам с помощью подкапсульного теста, основанного на оценке скорости роста трансплантантов опухолей человека под капсулой почки животных (см. Сергеева Н.С. Прогнозирование индивидуальной реакции злокачественных опухолей человека на лучевую и лекарственную терапию (экспериментальное исследование). Диссертация на соискание ученой степени д.б.н., М., 1991, 344 с.). Однако наряду со многими преимуществами этот способ имеет следующие ограничения: не все опухоли человека имеют достаточную скорость роста в организме животных; он дорог (требует большого количества животных и затрат человеческого труда), а также достаточно длителен - 6-7 суток.

Известен способ прогнозирования химиочувствительности карцином яичников с помощью микротетразолиевого теста (см. Кулиляк О.А. Микротетразолиевый тест в прогнозировании химиочувствительности карцином яичников человека. Диссертация на соискание ученой степени к.б.н., М., 1993, 166 с.). Способ основан на способности ряда митохондриальных дегидрогеназ, активность которых наиболее высока в опухолевых клетках карцином большинства типов, восстанавливать соли тетразолия. Однако этот способ требует использования необщедоступного оборудования и реактивов. Длительность тестирования - 4 суток.

Известен способ определения чувствительности к терапии больных раком яичников III-IV стадий по изменению активности щелочной фосфатазы после инкубации асцитической жидкости с химиопрепаратами (см. Франциянц Е.М., Долматова O. K. , Архангельская А. В. Авторское свидетельство 1718650 от 16.06.92), взятый нами в качестве прототипа. Способ дает возможность в течение 3 часов определить чувствительность опухолевых клеток к различным химиопрепаратам и их комбинациям. Однако для осуществления способа необходимо использование наборов реактивов Био-Лахема-тест, Прага, Чехословакия, что ограничивает возможность широкого его использования в настоящее время.

Целью изобретения является выбор оптимальной схемы химиотерапии без использования дорогостоящих реактивов и оборудования.

Поставленная цель достигается тем, что в асцитической жидкости после инкубации с химиопрепаратами определяют количество живых и мертвых клеток и выбирают для дальнейшей химиотерапии препараты, дающие 20% и более мертвых клеток.

Изобретение является новым, так как оно не известно из уровня медицины в области определения индивидуальной чувствительности к химиотерапии больных асцитной формой рака яичников путем исследования жизнеспособности клеток асцитической жидкости.

Известные в медицинской литературе способы оценки чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам связаны с проведением достаточно длительных и дорогостоящих исследований по изучению либо определенных биохимических свойств этих клеток с использованием дорогостоящих реактивов и оборудования (например, иммунофлуоресцентный антинуклеотидный тест), либо способности опухолевых клеток к росту (клоногенный и подкапсульный тесты), что ограничивается недостаточной скоростью роста многих клеток человека в необычных для них условиях, а также требует использования большого количества животных и трудовых затрат.

Новизна изобретения заключается в том, что о чувствительности к цитостатикам судят по проценту гибели клеток асцитической жидкости при инкубации с соответствующими препаратами. При этом не используются дорогие оборудование и реактивы.

Изобретение имеет изобретательский уровень, так как для специалиста-онколога явным образом не следует из уровня развития медицины в области лечения онкологических больных.

Изобретение является промышленно применимым, так как оно может быть использовано в медицинских учреждениях различного профиля (НИИ онкологии, онкологические диспансеры) при лечении раков различных локализаций, сопровождающихся накоплением асцитической жидкости. Его применение не требует дорогостоящего оборудования и высококвалифицированных сотрудников, может быть осуществлено в любой клинической лаборатории.

Способ определения индивидуальной чувствительности к химиотерапии больных асцитной формой рака яичников III-IV стадии выполняется следующим образом.

Асцитическую жидкость центрифугируют при 1,5 тыс. об./мин в течение 15 мин. Полученный осадок дважды отмывают физиологическим раствором и доводят им до конечной концентрации опухолевых и мезотелиальных клеток 2 · 10⁶ в 1 мл суспензии. В пробирки для инкубации вносят 2 мл среды 199, 0,2 мл суспензии отмытых клеток асцитической жидкости и по 0,3 мл разведенных в физиологическом растворе различных химиопрепаратов и их комбинаций в концентрации 50 мкг/мл для циклофосфана и 5 мкг/мл для других цитостатиков (метатрексат, тиофосфамид, винбластин, доксорубицин, проспидин, 5-фторурацил, платидиам). Пробирки с пробами инкубируют 30 мин при температуре 37^oC. После инкубации в пробах оценивают количество живых и мертвых клеток по окраске с 0,05% раствором нитрозина. Подсчет и оценку доли жизнеспособных клеток проводят в камере Горяева под световым микроскопом. Контролем служат клетки асцитической жидкости больных, инкубированные с 0,3 мл физиологического раствора. Для дальнейшей терапии выбирают те химиопрепараты и их комбинации, инкубация с которыми дает наибольший процент мертвых клеток.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. Больная С., 58 лет, и. б. N 12426/д, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ в январе 1997 года с диагнозом рак яичников, асцитная форма, IV стадия, метастазы в печень, кл. группа 2. Первым этапом комплексной терапии выполнена циторедуктивная операция в объеме билатеральной аднексэктомии. Послеоперационный гист. анализ N 467351-354: умеренно дифференцированная папиллярная цистаденокарцинома. Во время операции была собрана асцитическая жидкость и произведено ее исследование предложенным способом. В пробе, инкубированной без добавления цитостатиков, все клетки были живы. В пробах, содержащих циклофосфан, выявлено 6% мертвых клеток, метотрексат - 8%, платинол - 0%, тиофосфамид - 1%, проспидин - 10%, т.е. клетки асцитической жидкости оказались практически нечувствительными ко всем испробованным препаратам. Больной проведено три курса внутрибрюшинной химиотерапии (ВБХТ) по схеме CPV (циклофосфан, платинол, винбластин). Однако химиотерапия оказалась неэффективной, констатирована генерализация процесса.

Пример 2. Больная П., 73 года, и. б. N 5178/ж, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ в мае 1998 года с диагнозом рак яичников, асцитная форма, III стадия, кл. группа 2. Произведен лапароцентез, эвакуировано 5 литров соломенно-желтой асцитической жидкости. Цит. анализ N 25021-22 - аденокарцинома. Выполнено исследование асцитической жидкости предложенным способом. Как в пробе без цитостатиков, так и в пробах, содержащих следующие сочетания препаратов: циклофосфан + платинол; тиофосфамид + платинол; циклофосфан + метотрексат + 5-фторурацил; тиофосфамид + метотрексат + 5-фторурацил, все клетки асцитической жидкости оказались живыми. Проведен курс неоадьювантной ВБХТ по схеме CMF (циклофосфан, метотрексат, 5- фторурацил). Кумулятивная доза: циклофосфан - 4 г, метотрексат - 50 мг, 5-фторурацил - 3 г без выраженного клинического эффекта. Проведена эксплоративная лапаратомия, выявившая генерализацию рака яичников по брюшине, прорастание большого сальника в поперечно-ободочную кишку, единый опухолевый инфильтрат в полости малого таза. Гист. анализ N 506900-06 - низкодифференцированная папиллярная цистаденокарцинома.

Пример 3. Больная С. , 50 лет, и. б. N 778/е, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ в феврале 1997 года с диагнозом рак яичников, асцитная форма, III стадия, кл. группа 2. Выполнена циторедуктивная операция полного объема - надвлагалищная ампутация матки с придатками, оментэктомия. Размеры резидуальной опухоли были менее 2 см. Гист. анализ N 121456-458 - умеренно дифференцированная цистаденокарцинома. Проведено исследование асцитической жидкости предложенным способом. В пробе, инкубированной без цитостатиков, обнаружено 3% мертвых клеток, в пробе с циклофосфаном - 39%, с тиофосфамидом - 5%, с метотрексатом - 5%, с платинолом - 25%, с винбластином - 21%. На основе этих данных для больной была выбрана схема химиотерапии CPV. Проведено 6 циклов ВБХТ по выбранной схеме. Кумулятивная доза составила 30 мг винбластина, 4,8 г циклофосфана, 950 мг платинола. Более 18 месяцев больная находится в полной клинической ремиссии.

Пример 4. Больная Ф., 51 год, и. б. N 10864/д, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ в октябре 1996 года с диагнозом рак яичников, асцитная форма, IV стадия, метастаз в пупок, кл. группа 2. Первым этапом комплексной терапии произведена лапаратомия с иссечением пупка, надвлагалищная ампутация матки с придатками, оментэктомия. Размеры резидуальной опухоли превышали 2 см. Послеоперационный гист. анализ N 463170-73 - серозная цистаденокарцинома; N 461374-376 - метастазы в большой сальник, пупок. Проведено исследование асцитической жидкости предложенным способом. В пробе, инкубированной без цитостатиков, все клетки были живые, в пробе с циклофосфаном выявлено 28% мертвых клеток, с проспидином - 11%, с тиофосфамидом - 12%, с метотрексатом - 22% и с платидиамом - 57%. После операции проведено 5 циклов ВБХТ по схеме: СР. Кумулятивная доза: 6 г циклофосфамида, 900 мг платидиама. Более 20 мес больная находится в полной клинической ремиссии.

Технико-экономический эффект способа определения индивидуальной чувствительности к химиотерапии больных асцитной формой рака яичников III-IV стадии заключается в том, что чаще достигаются полные клинические ремиссии, предотвращается побочное действие цитостатиков, избегается неоправданное использование заведомо неэффективных препаратов.

Определение индивидуальной чувствительности больных к химиопрепаратам предлагаемым способом возможно осуществлять в учреждениях практического здравоохранения, так как исключается использование дорогостоящих реагентов, аппаратуры и высококвалифицированных специалистов.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкогинекологии, и может быть использовано для лечения больных раком яичников III - IV стадии. Способ обеспечивает выбор оптимальной схемы химиотерапии без использования дорогостоящих реактивов и оборудования. Асцитическую жидкость больного инкубируют с различными химиопрепаратами и их комбинациями в течение 30 мин при 37^o, затем оценивают количество живых и мертвых клеток и выбирают для проведения химиотерапии комбинацию химиопрепоратов, вызывающую наибольшую гибель клеток асцитической жидкости. Способ осуществляется в течение 1,5 ч, не требует дорогостоящих реактивов и оборудования и позволяет достичь хорошего клинического эффекта.

Способ определения индивидуальной чувствительности к химиотерапии больных асцитной формой рака яичников III - IV стадии, включающий инкубацию асцитической жидкости с химиопрепаратами, отличающийся тем, что в асцитической жидкости определяют количество живых и мертвых клеток по окраске с 0,05% раствором нитрозина и выбирают для дальнейшей химиотерапии препараты, дающие 20% и более мертвых клеток.