СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ДЕСТРУКТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРИ ОСТРОМ ХОЛЕЦИСТИТЕ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/66 G01N33/70 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и клинической лабораторной диагностике.

Проблема выбора тактики лечения больных с острым калькулезным холециститом остается по прежнему злободневной. Хирург часто стоит перед выбором: - оперировать больного на высоте приступа, когда применение современных малоинвазивных способов лечения холецистита - лапароскопической холецистэктомии, холецистэктомии из мини-доступа сопряжено со значительными техническими трудностями, или вообще невозможно, - либо проводить консервативное лечение, добиваясь купирования приступа, что позволяет отсрочить операцию и выполнить ее в более благоприятных условиях.

В этой связи представляется актуальной разработка новых способов оценки степени выраженности деструктивных воспалительных изменений желчного пузыря.

В хирургической практике диагноз острого холецистита обычно ставится по данным анамнеза и физикального обследования. Из лабораторных способов диагностики используется клинический анализ крови, где показателем заболевания является количество лейкоцитов. В типичных случаях число лейкоцитов составляет 10 - 15 • 10⁹/л со сдвигом формулы крови влево. Также несколько повышается билирубин (50 г/л) у 45% больных и трансаминазы (в 5 раз) у 25% больных [1,2,3,4].

По мнению авторов аналогом предлагаемого нами способа является общий клинический анализ крови. Но этот способ имеет недостатки, количество лейкоцитов изменяется под воздействием сезонных, климатических, физиологических состояний организма, а также при разнообразной патологии, что свидетельствует о малой информативности данного способа, и невозможности оценки с его помощью степени воспалительной деструкции желчного пузыря.

Авторы предлагают оригинальный способ дифференциальной диагностики степени выраженности воспалительных, деструктивных изменений при остром холецистите - аутолитические изменения в сыворотке крови.

Способ аутолитических изменений в тканях мозгового вещества белых крыс был предложен Г.А. Грибановым [6] и используется авторами как прототип.

Для метаболизма биохимических соединений характерно сочетание процессов их синтеза и распада. И одним из широко распространенных биологических явлений, где реакции распада, как правило, превалируют над синтетическими, является аутолиз [5].

В настоящее время благодаря использованию новых, современных способов анализа различных биохимических компонентов, а также на основе многочисленных исследований аутолитических процессов в различных органах и тканях и их ультраструктурах [6,7] были разработаны новые взгляды и подходы к процессу аутолиза, было разработано новое определение процесса аутолиза. Процесс аутолиза определяется как "выработанное в процессе эволюции свойство биологических объектов разлагать ферментативным и не ферментативным путем собственные структуры разного уровня с преимущественным участием гидролазных, а также трансферазных и других реакций биодеградации и биотрансформации их молекулярных компонентов" [6].

Для исследования процесса аутолиза была использована сыворотка крови здоровых и больных людей с клинически установленным диагнозом острого холецистита, с развернутой картиной заболевания, подтвержденного специальными исследованиями. В качестве контроля исследования проводились у практически здоровых людей. Всего было обследовано 56 мужчин и женщин в возрасте от 40 до 60 лет.

В работе были рассмотрены аутолитические процессы при остром холецистите с разной степенью воспалительной деструкции желчного пузыря две группы с незначительными и сильными деструктивными изменениями.

Забор крови производили перед операцией, из локтевой вены, натощак. Сыворотку отделяли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 минут. Образцы сыворотки крови (в объеме 0,5 - 1,0 мл) инкубировали в стерильных пробирках в термостате при 37^oC.

Биохимические параметры оценивали в следующие сроки: сразу после получения образца - 0 часов, через 4, 12, 24 часа после инкубации в термостате. Выбор указанных сроков исследования обусловлен различиями в характере и интенсивности аутолитического процесса в динамике.

Для оценки изменений при аутолитическом процессе исследовали следующие биохимические параметры сыворотки крови: глюкоза, общий белок и фракции, серомукоиды, тимоловая проба, мочевина, креатинин, мочевая кислота, холестерин, триглицериды, β-липопротеиды и ряд ферментов: аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфотаза, лактатдегидрогеназа и ее термостабильная субъединица, α-амилаза γ-глютамат-трансфераза и холинэстераза.

Биохимические исследования проводились по унифицированным клинико-биохимическим лабораторным методикам [8] с использованием полуавтоматического анализатора ФП-900.

Определение глюкозы.

Определение проводили наборами фирмы "Biocon". Принцип метода:

Приготовление реактивов: перед употреблением растворяется в 50 мл дистиллированной воды смесь лиофилизированных реактивов и оставляется для стабилизации на 30 минут. Стандартный раствор готов к применению, концентрация - 5,55 ммоль/л.

Проведение анализа: к 0,9 мл рабочего реактива добавляется 10 мкл сыворотки или стандартного раствора, перемешивается и инкубируется в течение 25 мин при 37^oC, фотометрирование проводится при 500 нм, холостая проба измеряется по реактиву.

Определение креатинина.

Определение проводили наборами фирмы "Biocon"
Принцип метода (модифицированный метод Яффе): креатинин вместе с пикриновой кислотой в щелочной среде образует окрашенный комплекс. Скорость образования окраски прямо пропорциональна содержанию креатинина в пробе.

Приготовление реактивов: раствор насыщенной пикриновой кислоты, содержащий 0,01% детергента, смешивается с раствором NaOH 2,5 моль/л. Стандартный раствор креатинина - 200 мкмоль/л в 0,1 моль/л HCl.

Проведение анализа: 0,5 мл рабочего реактива прогревают при 37^oC в течение 5 минут, далее смешивают с опытным образцом или стандартным раствором в количестве 25 мкл и измеряют.

Определение ЛДГ.

Определение проводится наборами "ЛДГ-П" фирмы "Biocon". Принцип метода:

Реактив растворяется в бидистиллированной воде и выдерживается 30 минут для стабилизации при комнатной температуре. Реакция проводится при 37^oC, кинетической реакцией с временем задержки 30 секунд, время реакции 90 секунд, при 340 нм 500 мкл реактива прогревают в течение 5 минут, вносят 20 мкл исследуемой пробы, перемешивают и стартуют реакцию.

В результате исследований были выявлены наиболее значимые критерии для оценки характера аутолитических изменений для острого холецистита, в их числе оказались глюкоза, мочевая кислота, мочевина, креатинин, щелочная фосфатаза, лактатдегидрогеназа. Все остальные исследованные биохимические параметры не давали значительных отклонений в динамике аутолиза и в дальнейшем нами не рассматривались.

В процессе аутолиза выявлена устойчивая закономерность изменений перечисленных выше биохимических параметров по сравнению с контрольной группой здоровых лиц в зависимости от степени деструктивных изменений желчного пузыря. Однако для рассмотрения представлены только изменения глюкозы (углеводный обмен), креатинина (азотный обмен) и изменения активности лактатдегидрогеназы (фиг. 1, 2, 3).

В ходе аутолиза сыворотки крови у контрольной группы (здоровых лиц) отклонения исследуемых параметров были незначительными, в то время как у больных отклонения от исходных данных носили более выраженный характер. Так, например, в ходе исследования аутолитических изменений содержания глюкозы у больных с недеструктурированным желчным пузырем выявлено, что изменения были сходны с изменениями у контрольной группы. А у больных с выраженной воспалительной деструкцией содержание глюкозы в сыворотке крови снизилось к концу исследуемого периода на 35% (фиг. 1). При исследовании изменений содержания креатинина выявлено, что при острой катаральной форме холецистита динамика содержания креатинина сходна с динамикой контрольной группы (плавное возрастание к концу срока инкубации у контрольной группы на 10% и 18% у больных с катаральным холециститом), а при деструктивных формах холецистита она противоположна, и содержание креатинина снизилось по сравнению с начальным уровнем почти на 30% (фиг.2). Исследование изменения активности лактатдегидрогеназы показали, что в норме активность фермента при аутолизе падает, при остром катаральном холецистите она достоверно не изменяется, при деструктивных формах холецистита наблюдается возрастание активности фермента в 1,5 раза (фиг. 3).

Таким образом, можно сделать вывод о возможности дифференциальной диагностики с помощью способа оценки аутолитических изменений в сыворотке крови больного степени воспалительного деструктивного изменения желчного пузыря.

Источники информации
1. Арсений А. К. Диагностика острых воспалительных заболеваний брюшной полости. Кишинев. 1982. Стр. 76, 84, 95, 175.

2. Юрг Хегглин. Хирургическое обследование. М., 1980, Стр. 195.

3. Лидский А.Г. Симптоматическая диагностика хирургических заболеваний. 1973. Стр. 57.

4. Астапенко В.Г. Справочник по диагностике и дифференциальной диагностике хирургических болезней. Минск, 1988. Стр. 96.

5. Лушников Е.Ф. Шапиро Н.А. Аутолиз. - М.: 1974. Стр. 65.

6. Грибанов Г.А. Исследование биохимических превращений эндогенных липидов биологических структур при аутолизе: Дис. д-ра биологических наук/КГУ. - Калинин, 1986. Стр. 461.

7. Скрипниченко О.В. Грибанов Г.А. Об использовании аутолизирующейся сыворотки крови больных ишемической болезнью сердца, инфарктом миокарда и атеросклерозом с целью биохимической дифференциальной диагностики ТГУ. Ученые записки том IV. 1999. Стр. 37-39.

8. Меншиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. Стр. 86, 98, 112.

Изобретение относится к медицине, в частности к внутренним болезням и хирургии. Способ обеспечивает высокую точность дифференциальной диагностики. Проводят определение аутолитических изменений в сыворотки крови, при этом после инкубации сразу и через 4, 12 и 24 ч определяют количество глюкозы, креатинина и активность лактатдегидрогеназы и при снижении количества глюкозы и креатинина до 35 и 30% соответственно и возрастании активности лактатдегидрогеназы в 1,5 раза диагностируют деструктивную форму холецистита. 3 ил.

Способ дифференциальной диагностики деструктивных изменений при остром холецистите, включающий определение аутолитических изменений в сыворотке крови, отличающийся тем, что после инкубации сразу и через 4, 12 и 24 ч определяют количество глюкозы, креатинина и активность лактатдегидрогеназы и при снижении количества глюкозы и креатинина до 35 и 30% соответственно и возрастании активности лактатдегидрогеназы в 1,5 раза диагностируют деструктивную форму холецистита.