СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2001 года по МПК A61K35/78 A61P29/00 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способов получения лекарственного средства, обладающего противовоспалительной активностью, из растительного сырья.

Известен способ получения лекарственного средства, обладающего противовоспалительной активностью, заключающийся в измельчении листьев алоэ (Aloe arborescens Mill.) на фарфоровых или деревянных вальцах; из полученной кашицы отжимают сок, нагревают его при 100^oC, выдерживают в течение 5 - 10 мин, охлаждают, помещают в отстойник, добавляют 96%-ный этанол до концентрации 20% и оставляют в прохладном месте на 14 - 15 суток. После отстаивания сок декантируют и добавляют 0,5% хлорбутанолгидрата.

Недостатком метода является дефицит природного сырья в Российской Федерации, длительность получения, необходимость нагревания до 100^oC, что влияет на качество получаемого средства, а также длительный срок культивирования растения (не менее 3-х лет) [3].

Цель изобретения - расширение арсенала способов получения лекарственных средств, обладающих противовоспалительной активностью.

Поставленную цель достигают новым способом получения лекарственного средства, обладающего противовоспалительной активностью, заключается в обработке растительного сырья, причем в качестве растительного сырья используют листья лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill.), которые экстрагируют в батарее из 5 перколяторов 40%-ным этанолом с интервалом слива 17 ч при соотношении сырье-этанол 1:1.

Новым в предлагаемом способе является то, что в качестве растительного сырья используют листья лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill.), которые экстрагируют в батарее из 5 перколятов 40%-ным этанолом с интервалом слива 17 ч при соотношении сырье-этанол 1:1.

Способ осуществляют следующим образом. Измельченные воздушно-сухие листья лопуха войлочного заливают 40%-ным этанолом в перколяторе и выдерживают в течение 17 ч. По истечении указанного срока полученное извлечение заливают на свежую порцию сырья, а 40%-ный этанол - в первый перколяторий, таким образом процесс ведут в 5 перколяторах с интервалом слива 17 ч. Жидкий экстракт получают из 5-го перколятора в объеме, равном массе взятого растительного сырья, из него затем удаляют растворитель под вакуумом досуха с последующим измельчением полученного остатка до порошкообразного состояния для проведения фармакологических испытаний.

Выход целевого продукта по загруженному сырья составляет 12,5%. Противовоспалительная активность в виде угнетения отека лапки на модели каррагенинового воспаления при дозах 100, 50, 10, 1 мл/кг соответственно составляет 13,5; 37,3; 25,6; 26,0%.

Для определения противовоспалительной активности опыты проводили на белых неинбредных мышах массой 20 - 25 г, полученных из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомедицинского моделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Острое асептическое воспаление вызывали введением под плантарный апоневроз левой лапки 1% раствор каррагенина в объеме 0,05 мл мышам и 0,1 крысам [4] . Величину отека определяли по разности масс воспаленной и невоспаленной лап животного, процент прироста рассчитывали по формуле:

В качестве препарата сравнения использовали синтетический противовоспалительный препарат - индометацин [2].

Результаты исследований обрабатывались методом непараметрической статистики Вилкоксона-Манна-Уитни [1].

Ниже приведены примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. По 100 г воздушно-сухих измельченных листьев лопуха войлочного загружают в пять перколяторов и в первый из них подают сверху 40%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем в 5 - 7 см, и оставляют на 17 ч. По истечении указанного срока жидкость из первого перколята сливают во второй, а в 1-й перколятор подают 40%-ный этанол до получения исходного уровня. Через 17 ч производят последовательные сливы из 2-го перколята в 3-й, из 1-го во 2-й, а в первый подают свежий растворитель. Через каждые 17 ч повторяют указанные операции до заполнения 5-го перколята. Затем из 5-го перколятора получают 100 мл экстракта, одновременно производя последовательные сливы из 1-го во 2-й, из 2-го в 3-й, из 3-го в 4-й, а из 4-го в 5-й перколятор. Через интервал в 17 часов из 5-го перколятора при аналогичной последовательности передвижки жидкости получают порциями по 100 мл еще четыре раза жидкий экстракт. Полученные экстракты объединяют (500 мл) и упаривают под вакуумом с последующим измельчением полученного остатка до порошкообразного состояния.

Выход целевого продукта составляет 12,50% от массы воздушно-сухого сырья.

Противовоспалительная активность в виде угнетения отека лапки на модели каррагенинового воспаления при дозах 100, 50, 10, 1 мг/кг соответственно составляет 13,5; 37,3; 25,6; 26,0%.

Пример 2. По 100 г воздушно-сухих измельченных листьев лопуха войлочного загружают в пять перколяторов и в первый из них подают сверху 70%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем в 5 - 10 см, и оставляют на 17 ч. По истечении указанного срока жидкость из первого перколятора сливают во второй, а в первый перколятор подают 70%-ный этанол до получения исходного уровня. Через 17 ч производят последовательные сливы из 2-го перколятора в 3-й, из 1-го во 2-й, а в 1-й подают свежий растворитель. Через каждые 17 ч повторяют указанные операции до заполнения 5-го перколятора. Затем из 5-го перколятора получают 100 мл экстракта, одновременно производя последовательные сливы из 1-го во 2-й, из 2-го в 3-й из 3-го в 4-й, а из 4-го в 5-й перколятор. Через интервал в 17 ч из 5-го перколятора при аналогичной последовательности передвижки жидкости получают порциями по 100 мл еще четыре раза жидкий экстракт. Полученные экстракты объединяют (500 мл) и упаривают под вакуумом с последующем измельчением полученного остатка порошкообразного состояния.

Выход целевого продукта составляет 11,41% от массы воздушно-сухого сырья.

Противовоспалительная активность в виде угнетения отека лапки на модели коррагенинового воспаления при дозе 50 мг/кг составляет 26,8%.

Пример 3. По 100 г воздушно-сухих измельченных листьев лопуха войлочного загружают в пять перколяторов и в первый из них подают сверху 25%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем в 5 - 10 см, и оставляют на 17 часов. По истечении указанного срока жидкость из первого перколятора сливают во второй, а в первый перколят подают 25%-ный этанол до получения исходного уровня. Через 17 ч производят последовательные сливы из 2-го перколята в 3-й, из 1-го во 2-й, а в 1-й подают свежий растворитель. Через каждые 17 ч повторяют указанные операции до заполнения 5-го перколятора. Затем из 5-го перколятора получают 100 мл экстракта, одновременно производят последовательные сливы из 1-го во 2-й, из 2-го в 3-й из 3-го в 4-й, а из 4-го в 5-й перколятор. Через интервал в 17 ч из 5-го перколятора при аналогичной последовательности передвижки жидкости получают порциями по 100 мл еще четыре раза жидкий экстракт. Полученные экстракты объединяют (500 мл) и упаривают под вакуумом с последующим измельчением полученного остатка до порошкообразного состояния.

Выход целевого продукта составляет от 10,22% от массы воздушно-сухого сырья.

Противовоспалительная активность в виде угнетения отека лапки на модели каррагенинового воспаления при дозах 100, 50, 10, 1 мг/кг соответственно составляет 29,0; 13,8; 28,9; 12,3%.

Пример 4. По 100 г воздушно-сухих измельченных листьев лопуха войлочного загружают в пять перколяторов и в первый из них подают сверху воду в количестве, создающем слой над сырьем в 5 - 7 см, и оставляют на 17 ч. По истечении указанного срока жидкость из первого перколятора сливают во второй, а в первый перколятор подают воду до получения исходного уровня. Через 17 ч производят последовательные сливы из 2-но в 3-й из 1-го во 2-й, а в первый подают свежий растворитель. Через каждые 17 ч повторяют указанные операции до заполнения 5-го перколятора. Затем из 5-го перколятора получают 100 мл экстракта, одновременно производя последовательные сливы из 1-го во 2-й, из 2-го в 3-й, из 3-го в 4-1, а из 4-го в 5-й перколятор. Через интервал в 17 ч из 5-го перколятора при аналогичной последовательности передвижки жидкости получают порциями по 100 мл еще четыре раза жидкий экстракт. Полученные экстракты объединяют (500 мл) и упаривают под вакуумом с последующим измельчением полученного остатка до порошкообразного состояния.

Выход целевого продукта составляет 9,93% от массы воздушно-сухого сырья.

Противовоспалительная активность в виде угнетения отека лапки на модели каррагенинового воспаления при дозах 100, 50, 10, 1 мг/кг соответственно составляет 3,2; 6,0; 7,7; 8,5%.

Пример 5. По 100 г воздушно-сухих листьев лопуха войлочного загружают в 5 перколяторов и в первый из них подают сверху 40%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем 5 - 7 см, и оставляют на 19 ч. По истечении указанного срока жидкости из первого перколятора сливают во второй и далее, как в примере 1, с тем лишь отличием, что контакт фаз длится 19 часов.

Выход целевого продукта 12,50% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 6. По 100 г воздушно-сухих листьев лопуха войлочного загружают в пять перколяторов и в первый из них подают сверху 40%-ный этанол в количестве, создающем слой над сырьем в 5 - 7 см, и оставляют на 16 ч.

Выход целевого продукта 11,90% от массы воздушно-сухого сырья.

Обоснование режимов
В процессе поиска оптимальных условий получения экстракта в качестве сырья были использованы листья лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill.) и изучено влияние двух факторов на выход целевого продукта в противовоспалительную активность: концентрации спирта и времени экстракта.

Выяснено, что оптимальным экстрагентом является 40%-ный этанол, наилучшее противоотечное действие оказал сухой экстракт на 40% этаноле, так как три дозы оказались эффективными (таблица). Наибольший противоэкссудативный эффект при введении его в дозе 50 мг/кг - 37,3% торможения прироста веса лапки в сравнении с контрольными животными. Практически на этом уровне проявил активность синтетический противовоспалительный препарат индеметацин и несколько ниже была активность у прототипа - сока алоэ.

При изучении влияния второго фактора - времени экстракции - выяснено, что экстракция наиболее целесообразна в течение 17 ч (выход целевого продукта 12,5% от массы воздушно-сухого сырья); в случае уменьшения продолжительности процесса (до 16 ч) выход целевого продукта снижается (11,9%), а увеличение времени (до 19 часов) не рационально, так как при этом выход целевого продукта не возрастает (12,5%).

Полученный в указанных условиях сухой экстракт обладает противовоспалительностью (угнетение отека в зависимости от дозы составляет от 13,5 до 37,3%). На основании проведенных фармакологических испытаний можно сделать вывод, что экстракция листьев лопуха войлочного 40%-ным этанолом приводит к получению средства, сопоставимого по противовоспалительной активности с синтетическим противовоспалительным препаратом индометацином и несколько превосходящего прототип - сок алоэ.

Дополнительным преимуществом предлагаемого способа является возможность получить препарат, обладающий противовоспалительной активностью, используя широко распространенное местное сырье.

Литература
1. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - Л.: Медицина, 1978. - 293 с.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В. 2 ч. - М., 1991. - Т 1. - 560 с.: Т. 2 - 556 с.

3. Технология лекарственных форм. под ред. Л.А. Ивановой - М., 1991. - Ч 2. - С. 415.

4. Winter C. A., Risley E.A., Nuss G.W. Carrageenin - induced edema in hinolpaw as on assay for an tiinflammatore drugs // Proc. Soc. Expr. Biol. and Med. 1962. N 3, Vol. 111.

Изобретение относится к медицине. В качестве сырья используют измельченные листья лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill). Экстрагирование ведут 40%-ный этанолом в батарее из пяти перколяторов при соотношении сырье-этанол 1 : 1. Интервал слива из каждого перколятора составляет 17 ч. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, обладающих противовоспалительной активностью. 1 табл.

Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью путем обработки растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют листья лопуха войлочного (Arctium tomentosum Mill), которые экстрагируют в батарее из 5 перколяторов 40%-ным этанолом с интервалом слива в 17 ч при соотношении сырье-этанол 1:1.