СПОСОБ ДОКЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ГЕПАТОЦИТА Российский патент 2001 года по МПК G01N33/86 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к разделу клинической лабораторной диагностики. Может быть использовано врачами других специальностей - гемостазиологами, трансфузиологами, хирургами, терапевтами, врачами клинической лабораторной диагностики.

Уровень техники:
Аналогами данного изобретения являются описанные в отечественной и зарубежной литературе методы оценки функционального состояния печени (К.А.Щетникович, 1994; Jeffers J. et al., 1995; Peres A. et a1., Remmel T. et al., 1995). Все они по ряду общих признаков могут быть разделены на группы:
1. объективные, субъективные;
2. лабораторные и инструментальные;
3. качественные, количественные;
4. структурные и функциональные.

В общей клинической практике применяется этапная система ранней диагностики патологии гепатоцита (Schruppan D., 1995; Murawaki Y. et al., 1996): используются пробы первой необходимости (билирубин, холестерин, трансаминазы, креатинин, глюкоза) и исследования HbsAg и анти-HBV. Выявленные изменения требуют повторения биохимических исследований по более широкой программе. Далее выполняется УЗИ печени и селезенки с определением калибра воротной вены и скорости портального кровотока. При отсутствии улучшения показано стационарное обследование для проведения пункционной биопсии печени.

Общим достоинством систем является то, что они основаны на объективных данных, которые позволяют однозначно трактовать степень патологических изменений печени. Однако при всех достоинствах поэтапного обследования проведение его каждому пациенту достаточно трудоемкая и дорогостоящая задача, часто растянутая во времени.

Причиной недостаточной информативности предлагаемых диагностических методов являются большие компенсаторные возможности печени (Аруин Л.И. и соавт. , 1990; Тельных Ю.В., 1997). Некоторые из лабораторных тестов не являются абсолютно специфичными для гепатоцита и дают ложноположительные результаты на фоне сопутствующих заболеваний, искажая диагностическую картину.

Другой не менее важной причиной несвоевременной диагностики функционального состояния гепатоцита является отсутствие комплексного диагностического алгоритма, охватывающего нарушения функции гепатоцита на любой стадии патологического процесса (дисфункция - гипоксия - дистрофия - некроз). Анализ литературы не позволил найти удачного алгоритма, полностью удовлетворяющего современным клиническим требованиям.

Прототипом предлагаемого способа оценки функционального состояния гепатоцита являются описанные в литературе способы доклинической диагностики патологии печени по определенным показателям свертывания крови. Наиболее широко известной является программа алгоритмического обеспечения анализа системы гемостаза у хирургических больных (А.Н.Курочкина, М.И.Титова, Л.Л.Шимкевич, А.А.Адамян, А.Р.Баевский, Н.Г.Асташева, 1986).

Система программно-алгоритмического обеспечения позволяет идентифицировать разную степень выраженности тромбофилии, склонности к тромбообразованию, варианты синдрома ДВС и дисфункции гепатоцита с гипокоагуляционными проявлениями, расширяет возможности лабораторной диагностики коагулопатий. Однако данный вариант диагностики функционального состояния гепатоцита не носит универсального характера, дает заключение лишь на момент исследования, не неся тем самым возможность долгосрочного прогноза этой патологии. Следует отметить, что такой подход не позволяет формировать группы риска на геморрагические осложнения, в генезе которых существенную роль играет дисфункция гепатоцита, делая невозможным своевременную коррекцию патологии гепатоцита и, с учетом вторичности коагулопатий, выявленных нарушений в системе гемостаза.

Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа доклинической диагностики функционального состояния гепатоцита на основании гемостазиологических тестов с малым изменением параметров при увеличении их числа. Данный способ позволяет своевременно выявить группу риска на развитие геморрагических осложнений и проводить программу профилактических мероприятий заблаговременно. Способ основан на исследовании системы гемостаза у пациенток гинекологического профиля. Группу контроля составили здоровые небеременные женщины.

Способ осуществляют следующим образом. Исследование гемокоагуляции проводят натощак, в утреннее время. Для выполнения гемостазиограммы забирают 5 мл венозной крови путем пункции вены на верхней конечности в пластиковую пробирку с пробкой. В пробирке находится стабилизатор крови - 4,6 % раствор цитрата натрия. Соотношение крови и стабилизатора зависит от показателя гематокритной величины исследуемой крови. В норме соотношение крови и стабилизатора составляет 9:1 соответственно. Богатую тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут; бедную - путем центрифугирования богатой тромбоцитами плазмы со скоростью 3000 оборотов в минуту в течение 20 минут. Время от момента взятия крови до начала проведения исследования составляет 5 - 15 минут.

При использовании пакета прикладных программ "Квазар" с помощью дискриминантного анализа выявлено, что наиболее информативными тестами гемостазиограммы являются: количество тромбоцитов, определяемое с помощью фазово-контрастного микроскопирования с использованием фазово-контрастного микроскопа Standard-20 фирмы "К.Zeizz" (Германия); тромбиновое время в плазме, определяемое на коагулометре CL-4 Behnk Elektronik (Германия) с использованием тромбин-теста (З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998), набор реагентов для определения тромбинового времени фирмы "Технология-Стандат" (г.Барнаул); активированное парциальное тромбопластиновое время в плазме, выполненное на коагулометре CL-4 в условиях стандартной активации свертывания фосфолипидами (кефалином) и контактом с чужеродной поверхностью (каолином) (З.С.Баркагац, А. П.Момот, 1998), набор реагентов для определения активированного парциального тромбопластинового времени фирмы "Технология-Стандарт" (г. Барнаул).

На основании информативных показателей гемостазиограммы определяют диагностический показатель S, характеризующий функциональное состояние гепатоцита по формуле
S = К₁ • P₁ - К₂ • P₂ - К₃ • P₃ - const
Где P₁ - количество тромбоцитов в венозной крови (• 10⁹/л)
P₂ - тромбиновое время (секунды)
P₃ - активированное парциальное тромбопластиновое время (секунды)
К₁, К₂, К₃ - коэффициенты. K₁ = 0,034; K₂ = 0,246; К₃ = 0,012;
Const = 3,351.

Установлено, что можно сделать достоверное заключение о наличии патологии гепатоцита - если S меньше 0 (S < 0), об отсутствии патологии гепатоцита - если S больше 0 (S > 0).

Предлагаемый нами способ оценки дает вероятность правильной классификации в 87% случаев для пациентов с патологией гепатоцита при уровне значимости P < 0,05 у в 96% случаев для здоровых при уровне значимости P < 0,05.

Данный способ может быть использован в общесоматической и хирургической практике за исключением пациенток акушерского профиля.

Пример 1. Полеаскина Г.Н., 45 лет, ИБ N 7565, 1998 г. Госпитализирована в гинекологическое отделение УНИИ ОММ в плановом порядке для хирургического лечения миомы матки больших размеров. Соматический анамнез отягощен гипертонической болезнью II ст., наличием хронического холецистопанкреатита, вне обострения. На этапе предоперационного обследования по результатам гемостазиограммы диагностирована патология гепатоцита: S менее 0. Проведена стандартная предоперационная подготовка без учета выявленных изменений системы гемостаза. Предпринято оперативное вмешательство в объеме пангистерэктомии. Интраоперационно: повышенная кровоточивость тканей, кровопотеря 1000,0 мл, гемотрансфузия. Продолжительность операции 1 час 15 минут.

Пример 2. Планкина Г.Н., 51 года, ИБ N 7573, 1998 г. Госпитализирована в гинекологическое отделение УНИИ ОММ для оперативного лечения миомы матки больших размеров с атипичной локализацией узлов. Соматически отягощена наличием гипертонической болезни I ст.

При гемостазиологическом исследовании перед операцией выявлена патология гепатоцита: S менее 0, к рутинной предоперационной подготовке подключены антиоксиданты, гепатопротекторы. Объем выполненного оперативного вмешательства: пангистерэктомия. Интраоперационная кровопотеря 500,0 мл. Продолжительность операции 1 ч 20 мин. Гемотрансфузия не проводилась.

Пример 3. Луткова Г.С. 19 лет, ИБ N 7362, 2000 г. Госпитализирована в гинекологическое отделение УНИИ ОММ с прорывным кровотечением. Соматический анамнез спокойный. При гемостазиологическом обследовании патологии гепатоцита не выявлено: S более 0. Пациентке проведена симптоматическая терапия по остановке кровотечения.

Таким образом, предложенный алгоритм информационной поддержки клинических решений позволяет из имеющихся данных выделить минимальный набор гемостазиологических признаков, обеспечивающих наилучшие результаты.

Базовая модель функционального состояния гепатоцита сокращает время диагностического процесса и повышает его качество. Диагностически важным для выявления патологии гепатоцита на доклинической стадии становятся результаты гемостазиограммы в пределах нормальных референтных величин. Иначе говоря, надежные диагностические выводы делаются без использования признаков, требующих дорогого оборудования или реактивов, без информации, получение которой связано с операционными процедурами и возможными осложнениями
Источники информации
1. Аруин Л. И., Шепелева С.Д., Ткачев В.Д. Морфологическая диагностика цирроза печени по материалам пункционных биопсий // Цирроз печени: (Клиника, диагностика, лечение): Сб. науч. тр./Под ред. А.С. Логинова; ЦНИИГ. - М. 1990. - С. 96-100.

2. Баркаган 3. С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. - Барнаул, 1998.

3. Курочкина А.И., Титова М.И., Шимкевич Л.Л., Адамян А.А., Баевский А. Р. , Асташева Н. Г. Программно-алгоритмическое обеспечение анализа системы гемостаза у хирургических больных. // Программно-алгоритмическое обеспечение анализа данных в медико-биологических исследованиях: Материалы 1 Всесоюзной школы-семинара. - Пущино, 1986. - С. 80-94.

4. Тельных Ю.В. Соотношение структурно-функциональных изменений печени при хроническом вирусном гепатите В //Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии. - 1997. - Т.7, N5. - С. 161-162. - Прил.

5. Щетникович К.А., Морозова В.Т. Изменения лабораторных показателей системы гемостаза при вирусном гепатите. //Клиническая лабораторная диагностика. - 1994. - N2. - С.54- 55.

6. Jeffers J., Coelho-Little M., Cheinquer Н. Et al. Procollagen-lll peptide and chronic viral С hepatitis // Arner. J. Gastroenterology. - 1995. - Vol. 90, N9. P. 1437-1440.

7. Murawaki Y., lkuta Y., Koda M. Et al. Clinical significance of serum hyaluronan in patients with chronic viral liver disease // Gastroenterology, Hepatology. - 1996. - Vol. 11, N5. - P.459-465.

8. Remmel Т., Remmel lJ., Salupere Т. Clinical significance of aminoterminal propeptide of type III procollagen and hyaluronat in follow-up of primary biliary cirrhosis (PBC) patients // Surrogate Markers to Asses Efficacy of Treatment in Chronic Liver Disease. - Basel, 1995. - P.29.

9. Schruppan D. Serum markers of fibrosis //Surrogate Markers to Asses Efficacy of Treatment in Chronic Liver Disease. - Basel, 1995.-P.25.

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической лабораторной диагностике. Способ прост и позволяет своевременно выявить группу риска на развитие геморрагических осложнений. Проводят исследование гемостазиограммы, при этом подсчитывают количество тромбоцитов в крови, измеряют тромбиновое время и активированное парциальное тромбопластиновое время в плазме и определяют диагностический показатель S по формуле: S=0,034•P₁-0,246•P₂-0,012•P₃-3,351, где P₁ - количество тромбоцитов (•10 9/л); P₂ - тромбиновое время, с; P₃ - активированное парциальное тромбопластиновое время, с, при значении S менее 0 диагностируют патологию гепатоцита, при S более 0 судят об отсутствии патологии гепатоцита.

Способ доклинической диагностики функционального состояния гепатоцита путем исследования гемостазиограммы, отличающийся тем, что подсчитывают количество тромбоцитов в крови, измеряют тромбиновое время и активированное парциальное тромбопластиновое время в плазме и определяют диагностический показатель S по формуле
S = 0,034 x P₁ - 0,246 x P₂ - 0,012 x P₃ - 3,351;
где P₁ - количество тромбоцитов (x 10⁹/л); P₂ - тромбиновое время, с; P₃ - активированное парциальное тромбопластиновое время, с, при значении S менее 0 диагностируют патологию гепатоцита, при S более 0 судят об отсутствии патологии гепатоцита.