СПОСОБ ОЦЕНКИ МИКРОБНОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ЖЕЛЧИ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к способам оценки степени микробной обсемененности желчи.

Известен способ оценки степени микробной обсемененности желчи, заключающийся в окрашивании препаратов из центрифугатов желчи спиртосодержащим красителем Романовского-Гимзе с последующей микроскопической оценкой обсемененности микробной флорой [Кривошеина Ю.С.//Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. М. , 1986. - С. 18-19]. Однако при этом возможна только качественная оценка желчи, так как нарушается коллоидное состоянии желчи, растворяются ее составные компоненты; препарат частично смывается со стекла, что негативно отражается на точности диагностики.

Известен способ оценки степени микробной обсемененности биологического материала, в том числе и желчи, заключающийся в прижизненном окрашивании бактерий. В качестве красителя используется насыщенный спиртовый раствор метиленового синего в разведении 1:10000 [Кривошеина Ю.С.//Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. М., 1986. - С. 14-15]. Для этого на предметном стекле смешивают каплю из центрифугата желчи с раствором красителя и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют объективом х40. Однако морфологические признаки бактерий при этом способе окрашивания трудно различимы, что позволяет использовать этот метод лишь для качественной оценки (подтверждения наличия или отсутствия) микробной флоры в мазках желчи.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ оценки степени микробной обсемененности желчи, заключающийся в посеве материала на стерильные среды [Шевченко И.А.//Лабораторные методы исследования при заболеваниях органов пищеварения. - М., 1986. - С. 167]. Для посева желчь берут специальным зондом, в котором снимается резиновый конец. Соединительную трубку обжигают, и собирают желчь в стерильную пробирку. Однако этот способ составляет определенные трудности в соблюдении стерильности забора и посева желчи на питательные среды, а также трудоемок по времени (результаты бактериологического исследования получают через 48 часов), кроме того для более объективной оценки степени микробной обсемененности желчи необходимо повторно (дважды) зондировать пациента.

Техническую задачу - упрощение способа и сокращение времени диагностики - решают применением нового способа оценки степени микробной обсемененности желчи, включающим забор желчи и последующее ее исследование, причем забор желчи производят в объеме 10 мл, центрифугируют в течение 10 минут, из центрифугатов готовят тонкие мазки, окрашивают их 1% водным раствором метиленового синего в течение 1 минуты, располагая стекло в строго горизонтальном положении, и далее микроскопируют, количественно оценивая степень микробной обсеменности желчи, и при наличии в поле зрения единичных бактерий определяют слабую, при наличии по 25 микробных тел в поле зрения - среднюю, и при наличии более 50 микробных тел в поле зрения - высокую степень микробной обсемененности.

Обоснование режима: Центрифугированиие желчи в течение 10 минут необходимо для выделения осадка, содержащего микробные тела. Объем желчи в 10 мл необходим для проведения более точной оценки степени микробной обсемененности желчи. Время экспозиции окраски мазков из центрифугатов желчи составляет 1 мин; при меньшем времени экспозиции (< 1 мин) бактериальные клетки полноценно не окрашиваются, а при большем (> 1 мин) окраска становится более интенсивной и бактериальные клетки плохо визуализируются. Горизонтальное положение стекла выбрано для того, чтобы одновременно шло окрашивание и фиксация мазка и препарат со стекла не смывался. Оценочные критерии подобраны на основании клинических наблюдений за состоянием больных и в соответствии с проведением параллельного исследования материала бактериологическим способом. Так, наличие единичных микробных тел обычно наблюдается у здоровых людей и нами оценивается как слабая степень обсемененности за счет попадания микрофлоры из ротовой полости и соответствует росту единичных колоний на чашках с питательными средами при проведении исследования бактериологическим методом. Наличие менее 25 микробных тел определяется как умеренная степень микробной обсемененности желчи и обычно выявляется при умеренно выраженном обострении хронических заболеваний желчевыводящих путей и соответствует росту до 10 колоний на питательных средах. Наличие в поле зрения до 50 микробных тел определяется как средняя степень микробной обсемененности желчи, что диагностируется при значительно выраженном обострении хронических заболеваний желчевыводящих путей и соответствует росту 11-100 колоний на питательных средах при параллельном исследовании бактериальным способом. Максимальная степень обсемененности определяется при наличии более 50 микробных тел в поле зрения, что обычно подтверждается тяжелым состоянием больного, наличием явных признаков патологии, клинических симптомов заболевания и при проведении исследования бактериальным способом наблюдается рост большого количества колоний (более 100) на чашках с питательными средами.

Способ использовался при обследовании 23 пациентов с клиническими проявлениями обострения хронических форм некалькулезного холецистита и холангита, подтвержденных лабораторными и инструментальными методами исследования. При использовании предлагаемого способа микрофлора в мазках желчи обнаружена у 17 (73,9%) больных, причем чаще всего смешанная флора - у 7 больных (41,2%), стафилококки - у 3 (17,7%), стрептококки - у 2 (11,8%), энтерококки - у 1 (5,9%), кишечная палочка - у 4 больных (23,4%); что соответствовало определению известным бактериологическим способом.

Данные предложенного способа оценки степени микробной обсемененности желчи подтвердились при параллельном исследовании (через 48 часов) бактериологическим методом с определением чувствительности высеваемых микробов к антибиотикам.

Таким образом, клиническое применение разработанного способа оценки степени микробной обсемененности желчи позволяет в более короткие сроки (через 15 минут) диагностировать имеющуюся в желчном пузыре (порции A и B) и желчных протоках (порция C) микрофлору и использовать предложенный способ в качестве экспресс-метода без соблюдения стерильности забора и посева на дорогостоящих питательных средах, а также достоверно оценить степень обсемененности бактериями.

Можно сделать вывод, что применение предложенного способа оценки степени микробной обсемененности желчи может оказать существенную помощью в ранней диагностике хронических воспалительных заболеваний билиарной системы, что в конечном итоге позволит в наиболее короткие сроки проводить наблюдаемым больным антибиотикотерапию в комплексе лечебных мероприятий.

Способ может быть использован в медицине для оценки степени микробной обсемененности желчи. Проводят забор желчи в объеме 10 мл, центрифугируют ее в течение 10 минут, из центрифугатов готовят тонкие мазки, окрашивают их 1%-ным водным раствором метиленового синего в течение 1 мин, располагая стекло в строго горизонтальном положении, и далее микроскопируют, количественно оценивая степень микробной обсеменности желчи, и при наличии в поле зрения единичных бактерий определяют слабую, при наличии менее 25 микробных тел в поле зрения - умеренную, при наличии до 50 микробных тел в поле зрения - среднюю, и при наличии 50 микробных тел в поле зрения - высокую степень микробной обсемененности. Способ прост, экономичен и позволяет оказать существенную помощь в ранней диагностике хронических воспалительных заболеваний билиарной системы.

Способ оценки степени микробной обсемененности желчи, включающий забор желчи и последующее ее исследование, отличающийся тем, что забор желчи производят в объеме 10 мл, центрифугируют в течение 10 мин, из центрифугатов готовят тонкие мазки, окрашивают их 1%-ным водным раствором метиленового синего в течение 1 мин, располагая стекло в строго горизонтальном положении, и далее микроскопируют, количественно оценивая степень микробной обсемененности желчи, и при наличии в поле зрения единичных бактерий определяют слабую, при наличии менее 25 микробных тел в поле зрения - умеренную, при наличии до 50 микробных тел в поле зрения - среднюю, и при наличии более 50 микробных тел в поле зрения - высокую степень микробной обсемененности.