Способ оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 

13 Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний.

Цель изобретения - повышение точности способа и ускорение исследований.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуют у больных до и после лечения антимикробную активность цельной крови по суммарной способности ее клеточных и гуморальных факторов одномоментно блокировать активность микробов.

При исследовании антимикробной активности крови используют взвеси коммерческих, стандартизированных микробных

диагностикумов: сальмонелл брюшного тифа, паратифи В, шигелл Зонне, Ньюкестл, Флекснера ТашНИИ ВС и др.

Взвесь бактериального диагностикума с содержанием в 1 мл 3 млрд микробных тел тщательно смешивают и разводят в два и четыре раза. В объеме 0,25 мл исходную взвесь микробов и различные ее разведения переносят дозатором в пробирки и разводят физраствором натрия хлорида до объема 2,25 мл, контрольной пробой является фиэ- раствор с аналогичным объемом. Определяют оптическую плотность в процентах фотометром фотоэлектрическим (КФК-2, КФК-3) с использованием лунок объемом 2,25 мл и длины волны 227-300 нм.

00

Ј

О

ч о

По результатам исследований составляют шкалу, позволяющую определить в 1% оптической плотности концентрацию микробов в 1 млн микробных тел. В коммерческих бактериальных диагностикумах с содержанием в 1 мл 3 млрд микробных тел в 1 % определяется, как правило, 12-29 млн микробных тел.

С этой целью к 0,10-0,25 мл крови, взятой из пальца или вены, стабилизированной гепарином из расчета 50 АЕ/мл, добавляют 0,25 мл взвесь микробов с содержанием 200-400 млн микробных тел, к контрольной пробе крови приливают аналогичное количество физраствора. Смесь смешивают и выдерживают при 37°С в течение 15 мин, / центрифугируют 5 мин. Супернатант смеси в количестве 0,25 мл переносят в пробирки, в которые наливают 2,0 мл физраствора, определяют оптическую плотность опытной и контрольной проб крови.

Из исходной оптической плотности микробов вычисляют сумму оптической плотности микробов в супернатанте и коэффициента поправки и получают величину микробов в процентах, блокированных кровью. Полученный показатель умножают на количество микробов, содержащихся в 1 % оптической плотности, и получают величину антимикробной активности крови в млн микробных тел.

Коэффициент поправки для конкретного микробного диагностикума в серийных исследованиях - величина постоянная. Она зависит от способности разведенной микробной взвеси оседать при центрифугировании в смеси с кровью. Для различных взвесей микробных диагностикумов эта величина составляет от 7 до 20%.

Пример 1. Применение способа для оценки эффективности лечения больных детей и подростков с инфекционными воспалительными процессами.

Исследование проведено с кровью 17 детей и подростков в возрасте от 1 года 5 месяцев до 16 лет с острыми воспалительными процессами в форме абсцессов и флегмон челюстно-лицевой области до и после их лечения хирургическим и консервативным способами: пенициллином, ампициллином, оксациллином, витаминами группы В, аскорбиновой кислотой и противовоспалительными препаратами.

Установлено, что до начала лечения у больных лиц средняя величина их антимикробной активности крови 99 млн микробных тел, индивидуальные колебания этой величины очень существенны и колеблются от 24 до 168 млн микробных тел.

С учетом исходной антимикробной активности крови всех обследуемых лиц делили на две группы. К 1-й группе отнесли лиц с величиной, составляющей 84 млн микробных тел и ниже, к 2-й - с величиной более 84.

После лечения детей, по средним данным, отмечается склонность к повышению антимикробной активности крови - на 7%

(,05). В то же время у детей 1-й группы с низкой исходной неспецифической защитой организма от микробов отмечается значительное повышение уровня антимикробной активности крови: на 70% (от 33 до 133%),

5 которое носит статистически достоверный характер (,01). И, наоборот, у детей 2-й группы отмечается снижение этого показателя крови на -21 % (,01).

Таким образом, результаты исследова0 ний, приведенные в этом примере, подтверждают возможность использования заявляемого способа для определения индивидуальной разницы неспецифической защиты организма от микробов, обьектив5 ного контроля за эффективностью лечения больных лиц с инфекционными заболеваниями и прогнозирования изменения неспецифической резистентности организма от микробов при лечении больных.

0 П р и м е р 2. Применение способа для оценки эффективности лечения больных детей с гемангиомой.

Использование антимикробной активности крови проведено у 11 детей в возрасте

5 от В месяцев до 4 лет с диагнозом геманги- о ма челюстно-лицевой области до и после их лечения преднизолоном в терапевтических дозах, который вводили в область ге- мангиомы.

0 Выявлено, что средняя исходная антимикробная активность крови у детей составляет 104 млн микробных тел, индивидуальные колебания этой величины составляют от 42 до 140 млн микробных тел. К 1-й

5 группе отнесли детей с низкой исходной

антимикробной активностью крови - 84 и

ниже млн микробных тел, к 2-й - с более 84.

После лечения у больных детей средняя

величина антимикробной активности крови

0 снижается на 3 %. В то же время у трех детей с низкой исходной антимикробной активностью крови отмечается повышение ее величины на 67% (от 50 до 200%). И, наоборот, у детей 2-й группы с высокой исходной анти5 микробной активностью крови отмечается снижение ее величины, по средним данным, на-19%(.01).

Таким образом, результаты исследований полностью подтверждают возможность объективного контроля за эффективностью

лечения и прогнозирования изменения индивидуального уровня неспецифической ре эистентности организма при лечении соматических заболеваний. Усиление у трех детей антимикррбной активности крови с низкой ее исходной величиной не противоречит данным литературы, свидетельствующим от иммуностимулирующих свойствах глюкокортикоидов в относительно небольших дозах.

Пример 3. Применение способа для оценки эффективности лечения детей с рас- щелиной верхней губы.

Исследования проведены с кровью пяти детей в возрасте от 1 года 4 месяцев до 13 лет с диагнозом: расщелина верхней губы. Антимикробную активность крови изучали до и после лечения детей оперативным способом и витаминами группы В. аскорбиновой кислотой (группа иммуностимуляторов), антибиотиками - пенициллином, оксацил- лином и другими препаратами.

Установлено, что средняя исходная антимикробная активность крови составляет 103 млн микробных тел. индивидуальные ее величины колеблются от 56 до 194йПосле лечения отмечается повышение средней величины антимикробной активности крови на 33%. В то же время у детей с низкой и средней исходной антимикробной активно- стью крови отмечается значительное повышение ее величины - от 57 до 150%. И, наоборот, у одного больного ребенка с высокой исходной антимикробной активностью крови, составляющей 194 млн микробных тел, отмечается снижение ее величины на -35%. В целом по группе этих детей прослеживается высокая обратная корреляция между исходной антимикробной активностью крови и повышением ее величины (г 0,97 ± 0,03, Р 0,001).

Результаты эТих исследований полностью подтверждают наличие обратной зависимости уровня повышения неспецифической защиты организма от микробов от ее исходной величины при лечении больных инфекционными и соматическими заболеваниями, изложенные в первых двух примерах.

Таким образом, способ позволяет оце- нить исходную величину неспецифической защиты организма от микробов, проводить оценку эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний и прогнозировать изменение индивидуального уровня неспецифической резистентности организма от микробов у больных до начала их лечения.

Преимущества предлагаемого способа оценки эффективности лечения инфекцион-

ных и соматических заболеваний в сравнении со способом определения фагоцитарной активности лейкоцитов заключаются в упрощении и повышении точности.

Установлена высокая точность способа - процент средней ошибки одного измерения не превышает 6, Воспроизводимость способа практически 100%, что объясняется объективностью оценки результатов исследований.

В то же время в сравнении с предлагаемым способом методика оценки фагоцитарной активности лейкоцитов в связи с трудностью дифференцировки объектов фагоцитоза, адсорбированных на поверхности лейкоцитов от фагоцитированных, а также с субъективностью оценки результатов исследований дает около 25% ошибки, отличается низкой воспроизводимостью.

Существенным преимуществом предлагаемого способа в сравнении с методикой оценки фагоцитоза является значительное упрощение способа и его экспрессность. Результаты оценки неспецифической защиты организма от микробов известны сразу же после определения антимикробной активности крови, на исследование величины которой при серийных исследованиях требуется не более 5 мин,

В то же время для оценки фагоцитоза необходимо изготовление мазков, их фиксация и окраска с последующим подсчетом уровня фагоцитоза, а для оценки результатов исследований фагоцитоза в стадии подсчета необходимо значительное количество времени - от 30 мин до 1 ч.

Предлагаемый способ отличается также высокой экономичностью - при исследовании не требуются предметные стекла, реактивы для фиксации и окраски мазков.

Значительным преимуществом предлагаемого способа является и то, что методика антимикробной активности крови отражает одномоментно суммарный результат взаимодействия и клеточных (фагоцитов, лимфоцитов и эритроцитов) и гуморальных (антител, комплемента) факторов крови, их способность блокировать, агглютинировать, фагоцитйровать микробы, а роль этих факторов а защите организма от микробов общепризнана. Величина антимикробной активности крови составлена на 50% из количества блокированных микробов гуморальными и на 50% клеточными факторами крови. Из этой величины на долю фагоцитоза приходится не более 5% из всех блокированных микробов.

В то же время способ определения фагоцитарной активности лейкоцитов в основ-.

ном отражает активность 100-200 фагоцитов крови.

С учетом высокой эффективности, точности и простоты исполнения изобретение быть может применено как экспресс-способ для определения индивидуальной неспецифической защиты организма от микробов, оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний, прогнозирования изменения неспецифической защиты организма от микробов у больных до начала их лечения и в других, областях медицины.

Формула изобретения Способ оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний путем введения в цельную кровь пациента

взвеси микробов брюшного тифа с последующим исследованием реакции их взаимодействия, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и ускорения исследования, смесь дополнительно центрифугируют, после чего полученный су- пернатант фотоколориметрируют при длине волны 364 нм, измеряют оптическую плотность супернатанта и по калибровочной

кривой, отражающей корреляционную зависимость между количеством микробных тел и оптической плотностью в %, определяют количество микробных тел, блокированных гуморальными и клеточными факторами и

при значении показателя менее 100 млн микробных тел оценивают лечение как эффективное, а при значении более 100 млн микробных тел - не эффективное. .

Использование: в области медицины, а именно в иммунологии. Сущность изобретения: в цельную кровь пациента вводят взвесь микробов брюшного тифа, после чего смесь центрифугируют и фотоколориметри- руют при длине волны 364 нм, измеряют оптическую плотность супернатанта и по калибровочной кривой, отражающей корреляционную зависимость между количеством микробных тел и оптической плотностью в %, определяют количество микробных тел, блокированных гуморальными и клеточными факторами, и при значении показателя менее 100 млн микробных тел оценивают лечение как эффективное, а при значении более 100 млн микробных тел - неэффективное, Способ позволяет повысить точность оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний. Способ прост в исполнении и требует при исследовании небольшой затраты времени.