СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПРЕХОДЯЩИХ НАРУШЕНИЙ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/48 A61B5/02 

Изобретение относятся к области медицины, а именно к кардиологии, и предназначено для диагностики преходящих нарушений микроциркуляции - одной из главных причин развития ишемического повреждения миокарда у больных гипертонической болезнью.

В настоящее время для исследования состояния микроциркуляции используются как показатели гемореологии (исследование вязкости крови с помощью ротационной визкозиметрии при различных скоростях сдвига; изучение деформируемости эритроцитов, агрегации эритроцитов), так и биомикроскопия сосудов конъюктивы глазного яблока с помощью щелевой лампы /1/. При этом, оценка изменений (внесосудистых, сосудистых и внутрисосудистых) проводится по бальной системе. Основными анализируемыми показателями являются: фон, морфология капилляров, диаметр и длина капиллярных петель, число функционирующих капилляров на единицу площади, характер кровотока, агрегация эритроцитов.

Указанный метод носит описательный характер, труден для стандартизации, во многом зависит от подготовки специалиста, анализирующего получаемые результаты, не лишен субъективизма.

Существует сцинтиграфический метод изучения микроциркуляции миокарда, основанный на внутрижелудочковом введении микросфер альбумина человеческой сыворотки, меченных технецием-99м (^99mТс- МАА) /2/. Недостатками данного метода являются:
- необходимость катетеризации левого желудочка сердца, что возможно только в условиях специализированного ангиографического кабинета;
- применение специализированного дорогостоящего детектирующего устройства - гамма - камеры с высокой разрешающей способностью;
- лучевая нагрузка на пациента, что ограничивает кратность проведения исследования микроциркуляции в динамике;
- риск развития осложнений, характерных для любых инвазивных исследований.

Кроме того, приведенные методы не позволяют судить непосредственно о взаимодействии форменных элементов крови и клетками эндотелия, в то время как процесс свертывания крови рассматривается в настоящее время (3) как классический объект физиологической регуляции, поддерживаемый в состоянии равновесия противодействующими силами. Ключевая роль в этом процессе простаноидов очевидна.

Указанные недостатки приведенных методов устраняются определением соотношения уровней концентрации тромбоксана и простациклина плазмы крови после выполнения нагрузочной пробы.

Способ заключается в следующем:
1. Проводят пробу учащающей электрической стимуляции предсердий.

2. Забирают венозную кровь, центрифугируют для получения плазмы, инкубируют с меченным антигеном (TXB2, 6-keto-PGF1 α ) и антисывороткой к ним, подсчитывают радиоактивность комплекта антиген-антитело с последующим вычислением концентрации тромбоксана и простациклина.

Способ осуществляется следующим образом.

до и после проведения чреспищеводной стимуляции предсердий (ЧПСП) по стандартному протоколу и общепринятым критериям прекращения (4) осуществляют забор венозной крови из кубитальной вены в количестве 5 мл с добавлением в качестве антикоагулянта Na₂ЭДТА в соотношении 1:10. Кровь центрифугируют в течение 10 минут при температуре 4^oC и ускорении 2000 g. Полученную плазму разливают на аликвоты по 0,1 мл. Готовят ряд реакционных пробирок из расчета: две пробирки для определения уровня неспецифического связывания ¹²⁵I- тромбоксана; 12 пробирок для построения калибровочной кривой, по две пробирки на каждую анализируемую плазму.

В калибровочные пробирки вносят по 0,1 мл стандартов тромбоксана, содержащих соответственно: 1,4, 4,1, 12,3, 37,0, 111,0, 333 пг/0,1 мл, а в опытные - по 0,1 мл исследуемой плазмы. В пробирки для определения неспецифического связывания вносят по 0,1 мл "нулевого" стандарта. Во все пробирки вносят по 0,1 мл меченного ¹²⁵I-тромбоксана.

Во все пробирки, за исключением пробирок для определения неспецифического связывания, добавляют по 0,1 мл кроличьей антисыворотки к тромбоксану. Перемешивают содержимое пробирок с помощью вихревого смесителя в течение 3-5 секунд. Помещают штатив с пробирками в холодильник при 4^oC на 16-24 часа.

По окончании инкубации во все пробирки вносят по 0,5 мл раствора декстрана и тщательно перемешивают на вихревом смесителе 3-5 секунд. Инкубируют смесь при комнатной температуре 15-20 минут. Далее центрифугируют все пробирки при 1000 g, температуре 4^oC 15 минут.

После центрифугирования из каждой пробирки (за исключением общей внесенной активности) надосадочную жидкость переносят в новые пластиковые пробирки.

Определяют скорость счета радионуклида ¹²⁵I в каждой пробирке на гамма-счетчике. Время счета - одна минута.

Рассчитывают среднее арифмитическое значение скорости счета радионуклида ¹²⁵I в каждой паре пробирок: с общей внесенной активностью (Т), в пробирках для контроля неспецифического связывания (Вн), калибровочными и анализируемыми пробами.

Строят в линейных координатах калибровочную кривую, откладывая по оси абсцисс концентрацию тромбоксана в калибровочной пробе, а по оси ординат - соответствующее среднее значение скорости счета. Через полученные точки проводят плавную кривую.

Определяют содержание тромбоксана в анализируемых образцах, крови.

Для этого по оси ординат откладывают среднее арифмитическое значение скорости счета радионуклида I¹²⁵ в пробирках, содержащих пробы пациента. Через полученную точку проводят прямую, параллельную оси абсцисс, до пересечения с калибровочной кривой. Из точки пересечения опускают перпендикуляр до пересечения с осью абсцисс, где определяют значение тромбоксана в анализируемой плазме. Аналогично определяют содержание тромбоксана в остальных образцах плазмы.

Определение содержания простациклина (6-кето-PGF1α) проводят в той же пробе плазмы. Для этого, готовят ряд реакционных пробирок из расчета: две пробирки для определения уровня неспецифического связывания ¹²⁵I- простациклина; 12 пробирок - для построения калибровочной кривой, по две пробирки на каждую анализируемую плазму.

В калибровочные пробирки вносят по 0,1 мл стандартов простациклина, содержащих соответственно: 4,1, 12,3, 37,3, 111,0, 333, 1000 пг/0,1 мл, а в опытные - по 0,1 мл исследуемой плазмы. В пробирки для определения неспецифического связывания вносят по 0,1 мл "нулевого" стандарта. Во все пробирки вносят по 0,1 мл меченного ¹²⁵I-простациклина.

Во все пробирки, за исключением пробирок для определения неспецифического связывания, добавляют по 0,1 мл кроличьей антисыворотки к простациклину. Перемешивают содержимое пробирок с помощью вихревого смесителя в течение 3-5 секунд. Помещают штатив с пробирками в холодильник при 4^oC на 16-24 часа.

По окончании инкубации во все пробирки вносят по 0,5 мл раствора декстрана и тщательно перемешивают на вихревом смесителе 3-5 секунд. Инкубируют смесь при комнатной температуре 15-20 минут. Далее центрифугируют все пробирки при 1000 g, температуре 4^oC 15 минут.

После центрифугирования из каждой пробирки (за исключением общей внесенной активности) надосадочную жидкость переносят в новые пластиковые пробирки. Определяют скорость счета радионуклида ¹²⁵I в каждой пробирке на гамма-счетчике также, как при определении тромбоксана.

После определения уровней тромбоксана и простациклина проводят деление уровня первого на второй, и в том случае, если отношение превышает 1,20 - ставится диагноз преходящего нарушения микроциркуляции, значение отношения менее 1,20 - указывает на его отсутствие.

Сравнение заявляемого технического решения с прототипом позволило установить соответствие его критерию "новизна".

При изучении других известных технических решений в данной области технические признаки, отличающие заявляемый способ от прототипа, не были выявлены и поэтому они обеспечивают заявляемому техническому решению соответствие критерию "существенные отличия".

По предлагаемому способу было обследовано 49 больных гипертонической болезнью. Средний возраст составил 50,3±1,2 года. 44 обследованных беспокоили боли в области сердца, появившиеся, по данным анамнеза, позже возникновения артериальной гипертонии.

Длительность болевого синдрома составила 5,4±0,3 года. Характер болевого синдрома оценивали в соответствии с критериями ВОЗ. У 18 больных болевой синдром был расценен как стенокардия, у 26 - как кардиалгия и 5 пациентов не отмечали болей в области сердца.

Электрокардиографические признаки гипертрофии левого желудочка сердца выявлены у 55,1% больных.

Исследование функционального состояния сердца и определение степени гипертрофии левого желудочка проводили методом эхокардиографии у всех больных с помощью аппаратуры фирм "Aloka" (Япония) и "Apogee" (США). При эхокардиографии гипертрофия левого желудочка выявлена у всех обследуемых. Чреспищеводную стимуляцию предсердий (ЧПСП) проводили по стандартной методике при помощи кардиостимулятора "(Gordelectro" (Литва) с биполярным электродом. ЭКГ регистрировали на поликардиографе "Mingograf-34" (Швеция).

У 27 пациентов соотношение тромбоксана и простациклина превышало 1,2. При исследовании латентной коронарной недостаточности по предложенному ранее способу (патент РФ N 2122343 от 27.11.1998 г.) уровень миоглобина превысил значения нормы. В течение года у одиннадцати пациентов развился острый инфаркт миокарда, у восьми - произошло ухудшение состояния, проявившиеся в стойком повышении артериального давления, упорными головными болями, присоединении болевых ощущений в области сердца, аритмии.

Таким образом, анализируемая группа больных характеризовалась более тяжелым течением заболевания, выразившимся в развитии ишемического повреждения миокарда.

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в кардиологии. Способ включает выполнение стресс-теста и определение соотношения концентраций тромбоксана и простациклина, и при превышении соотношения 1,20 и выше диагностируют преходящие нарушения микроциркуляции. Способ позволяет повысить точность диагностики.

Способ диагностики преходящих нарушений микроциркуляции у больных гипертонической болезнью, заключающийся в проведении чреспищеводной стимуляции предсердий, отличающийся тем, что до и после выполнения указанного теста проводят определение концентрации тромбоксана и простациклина, и при значении их соотношения 1,20 и выше ставят диагноз преходящих нарушений микроциркуляции, значение менее 1,20 указывает на его отсутствие.