ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЕ И АНТИТРОМБОЦИТАРНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2004 года по МПК A61K31/10 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего гемореологическими и антитромбоцитарными свойствами.

Известны средства, проявляющие гемореологические свойства - пентоксифиллин, диквертин, танакан [3, 6, 9, 10].

Известны средства, обладающие антитромбоцитарными свойствами -пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота, тиклопидин, дипиридамол [3, 7].

Наиболее близким (прототипом) является лекарственное средство -пентоксифиллин, обладающее как гемореологическими, так и антитромбоцитарными свойствами [3]. Пентоксифиллин способен улучшать деформируемость эритроцитов и уменьшать агрегацию эритроцитов, улучшая реологические свойства крови и микроциркуляции [3].

Задачей изобретения является расширение арсенала антиагрегантных средств, улучшающих реологические свойства крови и обладающих антитромбоцитарным эффектом.

Поставленная задача достигается использованием бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфида (тио-фан) в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства.

Использование тио-фана как гемореологического и антитромбоцитарного средства в литературе не описано.

Ранее предложено использование тио-фана в качестве высокоэффективного стабилизатора полимерных материалов [2].

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства используют тио-фан. Его новое свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. В качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства его можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми и другими заболеваниями для уменьшения повышенной вязкости крови, спонтанной агрегации эритроцитов и повышения сниженной деформируемости эритроцитов, а также снижения агрегационной способности тромбоцитов.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Новое свойство тио-фана было обнаружено благодаря экспериментальным исследованиям.

Эксперименты по изучению гемореологических свойств тио-фана проводили на 15 крысах-самцах Вистар массой 250-300 г. Животные были разделены на 3 группы: 5 животных получали внутрижелудочно 1 мл крахмальной слизи (ежедневно однократно в течение 5 суток) (контроль), 5 животных получали внутрижелудочно пентоксифиллин (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток) (Опыт I) - прототип; 5 животных получали внутрижелудочно тио-фан (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток) (Опыт II) - предлагаемое средство. Влияние препаратов на вязкость крови оценивали с использованием модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro [8]. Кровь забирали из общей сонной артерии под эфирным наркозом. В качестве стабилизатора использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Вязкость крови измеряли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига от 5 до 300 с^-1 до и после инкубации образцов при температуре 44°С в течение 60 мин.

Эксперименты по изучению атнитромбоцитарных свойств тио-фана проводили на 18 крысах-самцах Вистар массой 250-280 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 животных получали внутрижелудочно 1 мл крахмальной слизи (однократно) (контроль), 6 животных получали внутрижелудочно пентоксифиллин (400 мг/кг однократно) (Опыт III) - прототип; 6 животных получали внутрижелудочно тио-фан (100 мг/кг однократно) (Опыт IV) - предлагаемое средство. Через 2 ч после введения препарата у животных под эфирным наркозом катетеризировали общую сонную артерию для забора крови. В качестве стабилизатора использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Получение богатой (БТП) и бедной (БеТП) тромбоцитами плазмы и подсчет числа тромбоцитов проводили по Балуда [1]. Из проб крови получали БТП и БеТП методом центрифугирования при 400 g и 1800 g соответственно на центрифуге ЦЛМН-Р 10-01. В полученной БТП подсчитывали количество тромбоцитов микроскопическим методом при фазовом контрасте в камере Горяева. Для этого в силиконовую пробирку точно пипеткой отмеряли 1,98 мл разводящего 5% раствора ЭДТА и осторожно вносили 0,02 мл БТП. В течение 2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивали без вспенивания. Заполняли камеру Горяева и на 10 мин помещали для оседания тромбоцитов в чашку Петри со смоченной фильтровальной бумагой. Тромбоциты подсчитывали в 25 больших квадратах.

Нормальные пределы колебаний числа тромбоцитов в крови у крысы составляют от 430000 до 1 млн. в 1 мм³ [4, 5].

После определения числа тромбоцитов в БТП проводили стандартизацию числа тромбоцитов, для чего БПТ разводили необходимым количеством БеТП до 400±30 тыс. в 1 мм³ в пробе.

Амплитуду агрегации тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме на приборе АТ-02, агрегатограммы регистрировали с помощью самописца Recorder 2210.

Статистическую обработку проводили с помощью ПСП "Statistica for Windows 4.3". Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку, для выявления межгрупповых различий использовали t-критерий Стьюдента.

Результаты, подтверждающие гемореологическое действие тио-фана

Пример 1. Контрольным крысам вводили 1% крахмальную слизь (ежедневно однократно в течение 5 суток в количестве 1 мл). На 5 сутки осуществляли забор крови из сонной артерии и ее инкубирование течение 60 мин при температуре 44°С. Инкубирование крови приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5, 10, 50, 100, 300 c^-1 на 53, 43, 34, 34 и 24% соответственно (табл.1).

Пример 2. Опытным крысам I группы вводили пентоксифиллин (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток). На 5 сутки осуществляли забор крови из сонной артерии и ее инкубирование в течение 60 мин при температуре 44°С. У опытных крыс в группе I вязкость крови до инкубации была ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 50 и 100 c^-1 на 10 и 5% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5, 10, 50, 100, 300 с^-1 на 39, 23, 33, 33 и 15% соответственно. После инкубации вязкость крови при скоростях сдвига 10, 50, 100, 300 с^-1 была ниже, чем в контроле на 15, 11, 12 и 10% соответственно (табл.1).

Таким образом, на модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro пентоксифиллин ограничивает возрастание вязкости крови.

Пример 3. Опытным крысам II группы вводили тио-фан (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток). На 5 сутки осуществляли забор крови из сонной артерии и ее инкубирование в течение 60 мин при температуре 44°С. У опытных крыс в группе II до инкубации вязкость крови была ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 10, 50, 100 c^-1 на 9, 10, и 5% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5, 10, 50, 100, 300 с^-1 на 43, 33, 26, 23 и 15% соответственно. После инкубирования вязкость крови была ниже, чем в контроле при скоростях сдвига 5, 10, 50, 100 и 300 с^-1 на 16, 15, 15, 12% и 12% соответственно (табл.1).

Таким образом на модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro тио-фан ограничивает возрастание вязкости крови. Выраженность гемореологического эффекта тио-фана сопоставима с таковым у прототипа - пентоксифиллина.

Результаты, подтверждающие антитромбоцитарные свойства тио-фана.

Пример 4. Контрольным крысам вводили 1% крахмальную слизь (однократно в количестве 1 мл). Через 2 ч осуществляли забор крови из сонной артерии, получение БТП, БеТП, стандартизированной плазмы и регистрацию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. В контрольной группе животных амплитуда АДФ-нндупированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 48±1% (табл.2).

Пример 5. Опытным крысам III группы вводили пентоксифиллин (400 мг/кг однократно). Через 2 ч осуществляли забор крови из сонной артерии, получение БТП, БеТП, стандартизированной плазмы и регистрацию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. У опытных крыс в группе III пентоксифиллин при однократном внутрижелудочном введении в дозе 400 мг/кг снижал амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизированной плазме до 40±4%, что на 17% ниже показателя у крыс контрольной группы (табл.2).

Пример 6. Опытным крысам IV группы вводили тио-фан (100 мг/кг однократно). Через 2 ч осуществляли забор крови из сонной артерии, получение БТП, БеТП, стандартизированной плазмы и регистрацию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. У опытных крыс группы IV тио-фан при однократном внутрижелудочном введении в дозе 100 мг/кг снижал амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме до 39±3%. Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 19% ниже, чем в контроле, и была близка к значению показателя у крыс в группе III (табл.2).

Таким образом, тио-фан в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженным антиагрегантным эффектом, сравнимым по выраженности с пентоксифиллином в дозе 400 мг/кг.

Источники литературы

1. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза - Барнаул, 1998. – С.10-11.

2. Макарова Г.Г., Лугова Л.И., Просенко А.Е. и др. Полимерная композиция. // Патент РФ №988840, 30.07.1993.

3. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. - Ереван, 1985. - 399 с.

4. Закревская А.Л. Тромбоциты крыс как модель исследования ингибиторов агрегации // Патологич. Функцион. Системы гемостаза. - Л., 1990. - С.46-54.

5. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные - Киев, 1974. - 303 с.

6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина. - 1992. - 624 с.

7. Ноеаль Р. Современное состояние и перспективы антитромбоцитарной терапии // Словакофарма ревю. 2000. - №1-2. - С.14-19.

8. Плотников М.Б., Колтунов А.А., Алиев О.И. Метод отбора лекарственных веществ, влияющих на реологические свойства крови in vitro // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1996. - №6. - С.57-58.

9. Плотников М.Б., Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев А.С., Тюкавкина Н.А. Коррекция синдрома повышенной вязкости крови в условиях ишемии мозга у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. - №6. - С.45-47.

10. Koltringer P., Eber О., Lind P. Et al. Microzirkulationund Viscoelastizitat des Vullblutes unter Gingko biloba extrakt. Eine placebocontrollierte randomisierte Doppelblind-Studie // Perfusion. - 1989. - Bd.1. - S.28-30.

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, влияющего на реологию крови и агрегацию тромбоцитов. Предложено использование бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфида, ранее известного как полупродукт при получении биотина, в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих одновременно гемореологическими и антитромбоцитарными свойствами. 2 табл.

Применение бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфида в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства.