СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА Российский патент 2002 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики острого панкреатита и динамического наблюдения за эффективностью проводимой терапии.

Известен способ диагностики острого панкреатита путем измерения инфракрасного излучения в коротковолновом и длинноволновом диапазонах в различных точках брюшной полости. Диагностируют панкреатит по разнице изменений температур (Авторское свидетельство SU 1436981 от 24.11.1983). Данный способ диагностики недостаточно точен, так как повышение температуры выявляется и при других заболеваниях.

Кроме того, известен способ диагностики путем определения активности амилазы в моче (Колб В. Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия, Минск, 1976, с. 96-98).

Недостатками данного способа являются частая необходимость взятия мочи с помощью катетера у ряда больных, что приводит к инфицированию мочевыводящих путей, и недостаточная точность диагностики. Для амилазы мочи характерны широкие межиндивидуальные вариации. Определение активности амилазы мочи является менее точным показателем диагностики, чем ее определение в сыворотке крови, так как выход амилазы в мочу связан с функцией почек (Колб В.Г., Камышников В.С. 1976).

Более совершенным является способ диагностики острого панкреатита путем определения активности амилазы в крови (Caraway W.T., Amer. J. Clin. Pathol. , 1959, vol. 32, p. 97).

Недостатком данного способа является то, что метод достаточно травматичен и возможно заражение пациента трансмиссивными инфекциями. Кроме этого, получение сыворотки крови требует центрифугирования - это занимает дополнительно 10 мин. Гиперамилаземия наступает непосредственно после начала заболевания, достигает максимума к 12-24 ч, после чего быстро снижается и приходит к норме на 2-3 день. При остром панкреатите активность амилазы в плазме может быть не очень высокой, обычно она быстро снижается по мере выведения фермента с мочой. Таким образом, высокая активность амилазы в плазме лишь в самых общих чертах характеризует возможность наличия острого панкреатита, соответствующие норме, или незначительно повышенные величины активности этого фермента не позволяют исключить указанный диагноз (Зилва Д. Ф., Пэннелл П.Р., 1988).

Изобретение направлено на решение задач: ускорение, снижение травматичности, повышение точности диагностики острого панкреатита.

Указанные задачи решаются тем, что объектом исследования вместо крови является слеза.

Новизна способа заключается в том, что у больного активность альфа-амилазы определяют не в сыворотке крови, а в слезе, что технически значительно проще и быстрее, при активности фермента >300 Е/л диагностируют острый панкреатит.

Определение альфа-амилазы в слезе проще и быстрее на 20 мин, так как не требует взятия крови из вены и получения сыворотки. Получение слезы атравматично. Определение амилазы в слезе точнее, так как активность амилазы в слезе значительно выше, чем в крови (в 4 раза) и сохраняется в течение 7 дней.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого пациента глазной пипеткой берут 0,05 мл слезы после поднесения к носу ватки, смоченной 10%-ным нашатырным спиртом.

Проводят спектрофотометрическое определение активности альфа-амилазы по методике (Fischer J. , Tovarek J. , Clin, Chem., 1975, vol. 31, р. 166). Принцип метода: альфа-амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего, растворимого в воде красителя пропорционально активности фермента.

Используемые реактивы:
1. Буфер
фосфатный буфер 0,67 моль/л (рН 7,0)
хлорид натрия 0,1 моль/л
2. Субстрат
0,4 г цветного крахмального субстрата
0,2 г микроцеллюлозы
3. Осаждающий раствор
магний сернокислый 1,85 моль/л
кислота сульфосалициловая 2 ммоль/л
ЭДТА 1,3 ммоль/л
Приготовление рабочего раствора: 1 мл буфера, 9 мл дистиллированной воды, 0,6 г субстрата перемешивают в течение 15 мин. Реактив устойчив 1 неделю при 2 -8^oС.

Ход определения активности альфа-амилазы представлен в таблице.

Активность альфа-амилазы находят по калибровочной таблице, исходя из полученной оптической плотности. Результаты выражают в Е/л. Активность амилазы в слезе здоровых людей 193,5±20,9 Е/л (130 - 250 Е/л). При повышении амилазы более 300 Е/л диагностируют острый панкреатит.

Примеры конкретного выполнения:
Пример 1. Больной Л., 59 л. История болезни 1664. Диагноз: острый интерстициальный панкреатит, средней тяжести. Госпитализирован в экстренном порядке через 6 часов от начала заболевания с жалобами на постоянные боли в эпигастральной области, сухость во рту, тошноту, рвоту. Альфа-амилаза слезы 1900 Е/л, крови 1120 Е/л. При ультразвуковом исследовании контур поджелудочной железы нечеткий, паренхима гипоэхогенная, зернистая, однородная, размеры 2,0х1,4х2,1, вирсунгов проток не расширен. Заключение по данному УЗИ: острый панкреатит. Больному проводилась дезинтоксикационная, спазмолитическая, антибактериальная терапия, контрикал, сандостатин. Состояние улучшилось, боль купирована, альфа-амилаза слезы на 7-е сутки - 794 Е/л, крови 105 Е/л, мочи 1,60 Е/л. Выписан на амбулаторное лечение в удовлетворительном состоянии. Заключение: таким образом, активность амилазы слезы выше, чем активность амилазы крови. У данного больного с помощью определения активности амилазы слезы удалось диагностировать острый панкреатит.

Пример 2. Больная И., 61 г. История болезни 1197. Диагноз: острый калькулезный холецистит, реактивный панкреатит. Госпитализирована в экстренном порядке, с жалобами на боль в левом подреберье и эпигастрии опоясывающего характера, тошноту, многократную рвоту, слабость, повышение температуры до 37,5^oС. При поступлении состояние средней тяжести. В биохимическом анализе крови: билирубин 28,5 мкмоль/л, белок 57 г/л, тимоловая проба 5,0 ед., альфа-амилаза сыворотки крови 210 Е/л, альфа-амилаза слезы 310 Е/л. По данным ультразвукового исследования: поджелудочная железа 1,7х1,0х1,6, головка гипоэхогенная, вирсунгов проток не определяется, общий желчный проток 0,6 см, в желчном пузыре конкремент 1,7 см. Заключение по данным УЗИ: острый калькулезный холецистит, острый панкреатит. Больной проведена инфузионная, спазмолитическая терапия, контрикал. Состояние больной улучшилось, боль была купирована, активность альфа-амилазы через 10 дней после поступления составила в крови 155 Е/л, в слезе 240 Е/л. Произведена холецистэктомия. Послеоперационный период протекал без осложнений. Больная выписана в удовлетворительном состоянии. Заключение: выявленная повышенная активность амилазы слезы позволила установить сопутствующий острый панкреатит и провести адекватную предоперационную подготовку.

Пример 3. Больной С. , 20 л. История болезни 8799. Госпитализирован в экстренном порядке через сутки от начала заболевания с жалобами на боль в верхнем этаже живота опоясывающего характера. Диагноз при поступлении: острый панкреатит. В биохимическом анализе крови: билирубин 18 мкмоль/л/ активность ACT 0, 18 Ед, АЛТ 0, 15 Ед, активность альфа-амилазы крови 230 Е/л, активность альфа-амилазы слезы 246 Е/л. Заключение УЗИ: хронический холецистит. Поджелудочная железа в норме. После проведенной спазмолитической терапии боль купирована. Диагноз при выписке: хронический холецистит, обострение. Заключение: выявленная нормальная активность альфа-амилазы слезы позволила исключить острый панкреатит у данного больного.

Предлагаемый способ обеспечивает высокую точность диагностики. Способ атравматичен, прост, надежен и доступен для использования в клинических лабораториях. Данные подтверждены клиническими и лабораторными исследованиями на 24 больных острым панкреатитом.

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике. Способ обеспечивает снижение травматичности процедуры, ускорение и повышение точности диагностики. В слезе больного определяют активность фермента альфа-амилазы и при ее значении выше 300 Е/л диагностируют острый панкреатит. 1 табл.

Способ диагностики острого панкреатита путем определения активности фермента альфа-амилазы, отличающийся тем, что определяют активность альфа-амилазы в слезе и при ее значении выше 300 Е/л диагностируют острый панкреатит.