ТУБЕРКУЛОСТАТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2003 года по МПК A61K31/195 A61P31/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и касается химиотерапевтических антибактериальных средств лечения туберкулеза.

Современная химиотерапия туберкулеза, несмотря на наличие достаточно широкого спектра противотуберкулезных препаратов, часто бывает неэффективной вследствие быстрого развития полирезистентности микобактерий туберкулеза (МБТ), а также из-за возникновения токсических и токсикоаллергических осложнений при использовании этих средств. Поэтому постоянно идет поиск новых туберкулостатических препаратов. Наряду с синтезом новых антибактериальных препаратов (например, феназид - патент РФ 2080114, 1997 г.) в настоящее время в качестве противотуберкулезных предлагаются препараты, ранее широко применяемые в других областях медицины. Например, у 5-фторурацила, традиционно используемого в качестве цитостатического препарата, выявлены туберкулостатические свойства (патент РФ 2153339, 2000 г.) и он использован для лечения экспериментального туберкулеза (патент РФ 2165761, 2001 г.). Также туберкулостатическая активность была обнаружена и у других известных веществ и препаратов (патенты РФ 2127597, 1999 г. - эфирное масло растений семейства губоцветных; 2033159, 1995 г. - диоксидин). Обнаружены вещества, оказывающие влияние как на сопротивляемость организма туберкулезной инфекции, так и на рост микобактерий туберкулеза (патент РФ 2008902, 1994 г. - димефосфон). Несмотря на это, поиск новых препаратов для лечения туберкулеза и расширение ассортимента туберкулостатических средств остаются актуальными до сих пор.

В настоящее время основным, наиболее эффективным и широко применяемым антибактериальным препаратом для лечения туберкулеза, остается изониазид - гидразид изоникотиновой кислоты (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М. : Медицина, 1988. - Т. 2. - С. 315, 316), выбранный за прототип. Однако в ряде случаев при использовании изониазида происходит быстрое развитие устойчивости к нему МБТ, что значительно осложняет лечение. Известна и высокая токсичность изониазида.

Задача заявляемого изобретения - расширение ассортимента туберкулостатических средств.

Для ее решения авторы предлагают применять в качестве туберкулостатического средства тауфон.

Туберкулостатические свойства препарата тауфон были выявлены авторами в экспериментах in vitro.

Известный препарат тауфон (синоним - таурин) содержит таурин-2-аминоэтан-сульфоновую кислоту, которая является естественным продуктом обмена серосодержащих аминокислот. Препарат обладает осморегулятивным и мембранопротективным свойствами. У него также выявлены свойства тормозного нейротрансмиттера, он обладает антистрессорным действием, может модулировать высвобождение адреналина, полактина и других гормонов, а также регулировать ответы на них. Тауфон улучшает метаболические процессы в печени и других органах и тканях. Препарат снижает уровень сахара крови, значительно уменьшает концентрацию триглицеридов и атерогенность плазмы. Применяется в офтальмологической практике с целью улучшения микроциркуляторного кровотока конъюктивы глаза. Тауфон стимулирует репаративные процессы при старческих, диабетических и других поражениях сетчатки (Инструкция Фармкомитета по применению тауфона, регистрационный номер 86/1126/; 86/1126/4; 86/1126/5; 95/249/7).

Туберкулостатический эффект не вытекает непосредственно из фармакологических свойств тауфона, и он никогда ранее не применялся как туберкулостатическое средство.

Изучение туберкулостатической активности тауфона проведено в экспериментах in vitro с микобактериями туберкулеза штамма H₃₇R_v по двум стандартным методикам.

Пример 1. Определение ростовых свойств МБТ под действием тауфона методом абсолютных концентраций на плотной питательной среде "Новая" (Г.Г. Мордовской, 1972)
Исследуемую культуру МБТ лабораторного штамма H₃₇Rv готовили путем растирания колоний в стерильной ступке, постепенно добавляя стерильный физиологический раствор. Суспензию культуры стандартизировали по бактериальному стандарту мутности, соответствующему 500 млн. микробных тел в 1 мл (5 единиц ГКИ), затем разводили физиологическим раствором в пропорции 1:10. Разведение тауфона проводили стерильной дистиллированной водой до заданных концентраций (5,0; 4,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,25; 0,12 мкг/мл).

Питательную среду с различными концентрациями тауфона разливали в пробирки по 5 мл и свертывали в наклонном положении в течение 20 минут при температуре 85^oС, а затем засевали по 0,2 мл приготовленной взвесью МБТ, закрывали резиновыми пробками и помещали в наклонном положении в термостат при температуре 37^oС. Действие каждой концентрации тауфона на МБТ изучали на трех параллельных рядах. Регистрацию полученных результатов проводили через 10 дней. Для сравнения в качестве контроля использовали изониазид в концентрациях 5,0; 4,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,25; 0,12 мкг/мл. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Авторами обнаружено, что при концентрациях тауфона 2,0 мкг/мл и выше рост МБТ полностью отсутствовал. При концентрации тауфона 1,0 мкг/мл отмечался рост единичных колоний. В пробах с изониазидом рост МБТ отсутствовал во всех случаях.

Считается, что лабораторный штамм проявляет чувствительность к антибактериальным препаратам, если в пробирке со средой, содержащей препарат, выросло 5-20 колоний. Следовательно, концентрация тауфона 1,0 мкг/мл - минимальная концентрация, при которой проявляется туберкулостатическая активность препарата.

Пример 2. Изучение туберкулостатической активности тауфона методом вертикальной диффузии
Определение диффузионных свойств тауфона проводили методом вертикальной диффузии, модифицированным Kudon S. с соавторами (1965 г.), на плотной питательной среде "Новая", которую разливали по 5 мл, свертывая таким образом, чтобы 1/2 дна пробирки оставалась свободной. Свернутую среду засевали по 0,1 мл взвеси МБТ, разведенной по стандарту мутности 10 ед. ГКИ, и в наклонном положении помещали в термостат на 24 часа для подращивания. Через сутки пробирки ставили в вертикальное положение и по свободному краю пробирки закапывали по 0,3 мл тауфона в концентрациях примера 1 и выдерживали в стерильных условиях при температуре 37^oС. Оценку роста МБТ проводили по стандартной методике, где появление зон задержки роста МБТ более 10 мм свидетельствует о наличии туберкулостатических свойств препарата. Туберкулостатическая активность тауфона проявляется, начиная с концентрации 1,0 мкг/мл (табл. 2). Величина зоны задержки роста МБТ (в мм) пропорциональна степени туберкулостатической активности препарата. Параллельно проводили опыты с изониазидом. Полученные данные показывают, что, начиная с концентрации 1,0 мкг/мл, туберкулостатическая активность исследованных препаратов - одного порядка.

Таким образом, двумя различными методами определения туберкулостатической активности авторы показали, что тауфон в концентрации 1,0 мкг/мл и более обладает туберкулостатическими свойствами в отношении лабораторного штамма H₃₇Rv и может расширить ассортимент используемых туберкулостатических средств.

Изобретение относится к медицине. Предложено применение тауфона в качестве туберкулостатического средства. Изобретение позволяет расширить арсенал средств указанного назначения. 2 табл.

Применение тауфона в качестве туберкулостатического средства.