ТУБЕРКУЛОСТАТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2002 года по МПК A61K31/505 A61K31/513 A61K9/08 A61P31/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и касается химиотерапевтических антибактериальных средств для лечения туберкулеза.

В настоящее время для лечения туберкулеза используют ряд основных химиотерапевтических препаратов: производные изоникотиновой и парааминосалициловой кислот и антибиотики (стрептомицин, рифампицин).

Однако химиотерапия туберкулеза осложняется развитием резистентности микобактерий туберкулеза (МБТ) к известным препаратам. Кроме того, в последние годы растет число больных, зараженных МБТ, первично устойчивыми к основным туберкулостатическим препаратам. Поэтому поиск новых туберкулостатических средств продолжается постоянно (а.с. СССР 523084, МПК С 07 С 109/08, А 61 К 31/00, 1976; патент РФ 1490907, МПК С 07 D 239/60, А 61 К 31/505, 1996; патент РФ 2080114, МПК А 61 К 31/15, 31/295, 31/455).

Наиболее широко используемым и самым эффективным туберкулостатическим средством в настоящее время является изониазид-гидразид изоникотиновой кислоты, иначе изониазид (И), выбранный за прототип (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Вильнюс, 1993. -Ч.2. -С.278).

Применение изониазида бывает ограничено непереносимостью его больными, а также быстрым развитием устойчивых форм МБТ к этому препарату. У 70% больных, леченных изониазидом, через 3 месяца после начала лечения развивается устойчивость к нему, из них почти половина переходит в разряд хронических. К тому же до 20% впервые выявленных больных туберкулезом инфицированы МБТ, первично устойчивыми к основным противотуберкулезным химиопрепаратам.

Поэтому весьма актуальна задача расширения ассортимента туберкулостатических средств и повышения их туберкулостатической активности.

Для решения этой задачи в туберкулостатическое средство, содержащее изониазид-гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид), авторы предлагают дополнительно ввести 2,4-диоксо-5-фторпиримидин, называемый 5-фторурацил, в концентрации 300 мкг/мл и более при содержании изониазида не менее 0,8 мкг/мл.

Лекарственный препарат "5-Фторурацил"-2,4-диоксо-5-фторпиримидин (ФУ) относится к антиметаболической группе цитостатических средств (Машковский М. Д. Лекарственные средства. - Вильнюс, 1993.-Ч.2.-С.402-403). Недавно было установлено, что он обладает еще и туберкулостатическими свойствами при концентрациях 600 мкг/мл и выше (патент РФ 2153339, МПК А 61 К 31/513, 2000).

Известно, что комбинация нескольких туберкулостатических средств не всегда целесообразна из-за взаимного увеличения их токсичности, а также из-за их возможной несовместимости, связанной с химическим строением препаратов и особенностями их воздействия на биологический объект. Проведенные авторами эксперименты показали, что изониазид и 5-фторурацил при смешивании совместимы и что туберкулостатическая активность смеси возрастает. Добавление 5-фторурацила в количестве 300 мкг/мл и более при содержании изониазида не менее 0,8 мкг/мл приводит к синергидному туберкулостатическому эффекту, когда туберкулостатическое свойство смеси изониазида и 5-фторурацила выше, чем сумма этих свойств отдельных компонентов. При более низких концентрациях компонентов их смесь проявляет аддитивное увеличение туберкулостатических свойств.

Изучение туберкулостатической активности смеси изониазида и фторурацила проведено в экспериментах "in vitro" методом вертикальной диффузии на лабораторном (H37Rv) и клиническом изониазидоустойчивом штаммах МБТ.

Пример 1. Изучение туберкулостатической активности на лабораторном штамме МБТ H37Rv.

Определение диффузионных свойств изониазида, 5-фторурацила и их смесей проводили методом вертикальной диффузии, модифицированным Kudon S. с соавторами (1965г.) на плотной питательной среде "Новая", которую разливали по 5 мл, свертывая таким образом, чтобы 1/2 дна пробирки оставалась свободной. Свернутую среду засевали по 0,1 мл взвеси МБТ, разведенной по стандарту мутности 10 ед. ГКИ, и в наклонном положении помещали в термостат на 24 ч для подращивания. Через сутки пробирки ставили в вертикальное положение, и по свободному краю пробирки закапывали по 0,3 мл смеси изониазида и 5-фторурацила в заданных концентрациях и выдерживали в стерильных условиях при температуре 37^oС. Оценку роста МБТ проводили по стандартной методике, где появление зон задержки роста МБТ более 10 мм свидетельствует о наличии туберкулостатических свойств. Величина зоны задержки роста МБТ (в мм) пропорциональна степени туберкулостатической активности препарата. Параллельно проводили опыты с изониазидом и 5-фторурацилом в различных концентрациях.

Разведение изониазида и 5-фторурацила проводили стерильной дистиллированной водой до заданных концентраций 5-фторурацила (150; 300; 600; 1250 мкг/мл) и изониазида (0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2; 6,4 мкг/мл) и соединяли их для получения заданных смесей. Результаты изучения туберкулостатической активности приведены в табл. 1-3. При концентрациях изониазида от 0,1 до 0,4 мкг/мл почти везде отмечено увеличение туберкулостатической активности смеси, содержащей 150-600 и более мкг/мл 5-фторурацила. При концентрациях изониазида 0,8 мкг/мл и выше во всех смесях с 5-фторурацилом, содержащих 300 и более мкг/мл, отмечено проявление синергидного эффекта, выражающегося в большей задержке роста МБТ и появлении бактерицидного действия, что превышает суммарный результат отдельных компонентов при тех же концентрациях.

Пример 2. Изучение туберкулостатической активности на клиническом изониазидоустойчивом штамме МБТ.

Эксперимент проводили на плотной питательной среде "Новая" описанным выше способом. Устойчивость штамма МБТ к изониазиду была подтверждена методом абсолютных концентраций на жидкой питательной среде Сотона. По результатам исследования (табл.4) используемая клиническая культура МБТ признана изониазидоустойчивой. Результаты изучения туберкулостатической активности на клиническом штамме МБТ приведены в табл.5. Сравнение этих результатов с примером 1 позволяет заключить, что туберкулостатическое средство, содержащее изониазид и 5-фторурацил, проявляет более высокую туберкулостатическую активность по отношению к клиническому изониазидоустойчивому штамму МБТ.

С помощью этих двух примеров показано, что туберкулостатическое средство, содержащее изониазид и 5-фторурацил, при содержании изониазида не менее 0,8 мкг/мл и 5-фторурацила 300 мкг/мл и более, приводит к синергидному туберкулостатическому эффекту и проявляет более высокую туберкулостатическую активность, чем прототип (изониазид). Новое туберкулостатическое средство эффективно подавляет рост как чувствительного к изониазиду штамма МБТ, так и резистентного к нему (что особенно важно для фтизиатрии).

Таким образом, туберкулостатическое средство, содержащее изониазид и 5-фторурацил в указанных концентрациях, обладает высокой туберкулостатической активностью и может расширить ассортимент противотуберкулезных препаратов, особенно при лечении изониазидоустойчивых форм туберкулеза.

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и касается химеотерапевтических антибактериальных средств для лечения туберкулеза. Изобретение заключается в том, что туберкулостатическое средство содержит смесь изониазид-гидразида изоникотиновой кислоты при содержании не менее 0,8 мкг/мл и 2,4-диоксо-5-фторпиримидина в концентрации 300 мкг/мл и более. Изобретение позволяет эффективно подавлять рост как чувствительного к изониазиду штамма микробактерий туберкулеза, так и резистентного к нему, что особенно важно для фтизиатрии. 5 табл.

Туберкулостатическое средство, содержащее изониазидгидразид изоникотиновой кислоты (изониазид), отличающееся тем, что оно дополнительно содержит 2,4-диоксо-5-фторпиримидин (5-фторурацил) в концентрации 300 мкг/мл и более при содержании изониазада не менее 0,8 мкг/мл.