СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2003 года по МПК A61K31/255 A61P31/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фтизиатрии.

В настоящее время основным способом лечения туберкулеза является химиотерапия, которая часто сопровождается первичной и вторичной резистентностью микобактерий туберкулеза (МБТ), а также рядом реакций непереносимости. В связи с этим постоянно идет поиск новых препаратов и новых способов лечения туберкулеза (патенты РФ : 2080114 МПК А 61 К 31/15, 31/295, 31/455; 2008902 МПК А 61 К 31/21, 31/66; 2033159 МПК А 61 К 31/47). Существуют способы повышения эффективности этиотропной терапии туберкулеза с помощью разнообразных средств, воздействующих и на макроорганизм, и на микобактерии туберкулеза. Известно использование как синтетических иммуностимуляторов (например, диуцифона, Хоменко А.Г., Инсанов А.Б. Иммунохимиотерапия левамизолом и диуцифоном в комплексном лечении больных хроническим деструктивным туберкулезом легких. // Проблемы туберкулеза. - 1984. - 9. - С. 15-18), так и выделенных из микобактерий БЦЖ (например, рибомунила, Романова Р.Ю. Иммунологический анализ и антигенные свойства поверхностных белков микобактерий БЦЖ. // Сб. трудов "Актуальные вопросы лабораторной диагностики туберкулеза в эксперименте и клинике". - М., 1989. - Т.Ш. - С. 122-126). Несмотря на известные разнообразные этиопатогенетические способы лечения, проблема оптимизации и повышения эффективности химиотерапии туберкулеза остается актуальной вследствие высокой токсичности антибактериальных препаратов, быстрого формирования резистентности к химиотерпии, неоднозначного влияния иммуномодулирующих средств на иммунные реакции при туберкулезе. Эти причины заставляют продолжать поиск новых средств повышения эффективности терапии туберкулеза.

Самым эффективным и наиболее широко применяемым при изучении экспериментального туберкулеза и в терапии туберкулеза является способ лечения, включающий введение изониазида - гидразида изоникотиновой кислоты (Машковский М. Д. Лекарственные средства. - М., - Медицина, 1988. - Т. 2. - С. 315-316). В этом способе в качестве лекарственного препарата используют изониазид в терапевтических дозах 6-15 мг/кг в сутки. Нами этот способ взят в качестве наиболее близкого аналога (прототип). Известна недостаточная эффективность лечения изониазидом в ряде случаев, быстрое развитие устойчивости МБТ к нему, что приводит к необходимости назначения дополнительных антибактериальных препаратов. Также известна и высокая токсичность изониазида.

Задача заявляемого изобретения - повышение эффективности лечения экспериментального туберкулеза и расширение ассортимента используемых препаратов.

Технический результат заявляемого изобретения:
- увеличение прироста массы тела лабораторных животных;
- преобладание продуктивных тканевых реакций;
- уменьшение количества положительных посевов МБТ.

Для достижения этого технического результата в способе лечения экспериментального туберкулеза, включающем введение изониазида, авторы предлагают дополнительно применять тауфон. Введение тауфона можно проводить ежедневно в суточной дозе 15 мг/кг на протяжении не менее двух месяцев.

Препарат Тауфон (Tayfon) содержит таурин (2-аминоэтан-сульфоновая кислота), являющийся естественным продуктом обмена серосодержащих аминокислот - цистеина, метионина. Препарат обладает осморегуляторным и мембранопротективным действием, имеет свойства тормозного нейротрансмиттера, улучшает метаболические процессы в печени и других органах и тканях. Препарат применяется в средней суточной дозе 0,5-1,0 г курсами от 1 до 6 месяцев. Побочных эффектов нет (Инструкция Фармкомитета по применению Тауфона, регистрационный номер 86/1126/; 86/1126/4; 86/1126/5; 95/249/7).

Авторами обнаружены новые свойства препарата тауфон (туберкулостатическая и противотуберкулезная активность) и показано, что применение в течение двух месяцев тауфона совместно с изониазидом повышает эффективность терапии экспериментального туберкулеза. Это подтверждается увеличением прироста массы тела животных, преобладанием продуктивных реакций в тканях и уменьшением количества положительных посевов МБТ в гомогенатах ткани легких. Отмечена пролиферация Т лимфоцитов, вероятно, за счет повышения содержания в них серосодержащих аминокислот. Увеличение количества Т лимфоцитов, возможно, улучшает иммунный ответ на туберкулез.

Туберкулостатическая активность тауфона обнаружена авторами в эксперименте "in vitro" методом вертикальной диффузии. С целью изучения противотуберкулезной активности препарата "in vivo" был проведен эксперимент с использованием лабораторных животных, которые длительно получали тауфон. Доза тауфона, использовавшаяся в эксперименте (15 мг/кг), соответствует средней суточной терапевтической дозе, указанной в инструкции Фармкомитета к препарату.

Исследования проводили на морских свинках, самцах и самках. Было сформировано 4 группы по 7 животных, зараженных микобактериями туберкулеза штамма H₃₇Rv путем подкожного введения в левую паховую область дозы 0,01 мг/кг. Первая группа - контрольная, зараженная, но не получающая лечения. Вторая - получала лечение изониазидом 6 мг/кг ежедневно. Третья - ежедневное совместное лечение изониазидом 6 мг/кг и тауфоном 15 мг/кг. Четвертая группа получала лечение только тауфоном в дозе 15 мг/кг ежедневно. Препараты вводили внутримышечно. Лечение начинали с 14 суток после заражения и продолжали 2 месяца. По окончании эксперимента изучали параметры:
- масса тела;
- количество мочевины крови (унифицированный метод);
- количество лимфоцитов в периферической крови (Т, В, О лимфоциты) методом розеткообразования;
- концентрация цистеина в лимфоцитах и плазме крови (лимфоциты выделяли по методике двойного градиента, цистеин определяли методом ионнообменной хроматографии);
а также проводили исследования:
- микробиологические: посевы гомогенатов легких на наличие МБТ;
- гистологические: тканей легких, селезенки, печени, интраторакальных периферических (паховых) лимфоузлов;
- морфометрические: коэффициенты по методике Автандилова А.В.

Полученные результаты приведены в табл. 1-3.

В первой (контрольной) группе 3 свинки пали в сроки от 1 до 1,5 месяцев. На протяжении всего эксперимента наблюдали прогрессивное снижение массы тела (-33% от исходной массы к окончанию эксперимента) и высокий уровень мочевины крови (табл. 1). При вскрытии во всех случаях обнаружено множественное туберкулезное поражение внутренних органов с многочисленными очагами казеозного некроза (табл.2). Во всех случаях был отмечен рост микобактерий в гомогенатах ткани легких (7 из 7). Заключение: генерализованный туберкулез.

Во второй группе, получавшей лечение только изониазидом, прибавка массы тела составила +6% по сравнению с исходной массой тела в начале эксперимента. Рост МБТ на питательных средах из гомогенатов легких отмечен в 3 случаях из 7. При исследовании легких в ряде случаев обнаружены обширные участки казеозной пневмонии. Во всех случаях наблюдали неравномерное полнокровие и лимфоидные фолликулы, в лимфоузлах - чередование немногочисленных, иногда единичных эпителиоидноклеточных (ЭК) гранулем. Эти данные подтвердились при морфометрических исследованиях (табл.2). Несмотря на положительный результат терапии изониазидом, эффективность лечения была недостаточной.

В третьей группе, получавшей изониазид и тауфон, отмечена прибавка массы тела +79%, меньшее количество мочевины крови по сравнению с группой, получавшей только изониазид, положительные посевы МБТ из гомогенатов ткани легкого зарегистрированы только в 2 случаях из 7. Обнаружено повышение Т лимфоцитов на 45% и снижение О клеток на 28% по сравнению с группой, получавшей только изониазид. Вероятно, эти изменения связаны с повышением количества цистеина в клетках иммунной системы (табл.3). В легких отмечены только микроателетазы во всех наблюдениях. В интраторакальных лимфоузлах - локализованные казеифицированные ЭК гранулемы с крупнопетлистым склерозом (КПС), в паховых лимфоузлах - обширные очаги некроза с КПС по периферии, что показывает выраженный эффект от терапии двумя препаратами как следствие преобладания продуктивных тканевых реакций. Морфометрические данные приведены в табл. 2 и подтверждают это. Таким образом, результаты исследования показывают, что совместная терапия тауфоном и изониазидом более эффективна, чем лечение одним изониазидом.

В четвертой группе, получавшей только тауфон, авторами также отмечен противотуберкулезный эффект терапии, так как через 2 месяца после лечения зарегистрировано повышение массы тела на 24% и меньшее, по сравнению с контрольной, количество мочевины крови (табл.1). При морфологическом исследовании в легких наблюдали обширные участки туберкулезной пневмонии с ограниченными фокусами некрозов. В лимфоузлах изменения колеблются от эпителиоидномакрофагальной (ЭМФ) реакции с КПС различной степени выраженности в интраторакальных лимфоузлах до обширных казеознонекротических фокусов в паховых лимфоузлах, т.е. изменения в тканях также имели признаки продуктивных реакций. При морфометрическом исследовании обнаружено, что некротические изменения выражены в меньшей степени, чем в контрольной группе (табл.2). Положительные посевы МБТ из гомогенатов ткани легкого зарегистрированы в 4 случаях из 7. Это подтверждает обнаруженные в эксперименте "in vitro" бактериостатические свойства тауфона. Установлено повышение количества Т лимфоцитов на 10% и снижение количества О клеток на 10% по сравнению с контрольной группой, что также, вероятно, является следствием изменения количества цистеина в клетках (табл.3). Проведенные опыты показали противотуберкулезную активность тауфона. Отмеченный эффект, вероятно, является следствием не только бактериостатического действия тауфона, но и его влияния на иммунную систему, что повышает устойчивость морских свинок к туберкулезу.

Таким образом, совместное использование изониазида и тауфона в терапии экспериментального туберкулеза увеличивает эффективность лечения за счет большего прироста массы тела, преобладания продуктивных тканевых реакций, увеличения бактериостатического эффекта терапии, благоприятного воздействия на иммунную систему. Это, возможно, является следствием как комплексного влияния самого тауфона (и на микобактерии туберкулеза, и на иммунную систему), так и вероятного синергетического эффекта совместного применения изониазида и тауфона. Все это повышает устойчивость морских свинок к туберкулезу и эффективность их лечения, а также позволяет расширить ассортимент противотуберкулезных препаратов.

Изобретение относится к медицине, к экспериментальной фтизиатрии и может быть использовано для лечения экспериментального туберкулеза. Вводят тауфон на фоне лечения изониазидом, при этом тауфон вводят ежедневно в дозе 15 мг/кг не менее двух месяцев. Данное изобретение способствует повышению эффективности лечения экспериментального туберкулеза и расширению ассортимента используемых препаратов. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ лечения экспериментального туберкулеза, включающий введение изониазида, отличающийся тем, что дополнительно применяют тауфон. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что тауфон вводят ежедневно в дозе 15 мг/кг не менее двух месяцев.