СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ Российский патент 2000 года по МПК A61K31/03 A61K31/195 A61K39/04 A61P37/04 

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и может быть использовано в иммунологии, онкологии, микробиологии, биохимии, патофизиологии, фтизиатрии для разработки новых способов лечения.

Лечение инфекционных иммунодефицитов традиционными методами не всегда дает ожидаемые положительные результаты, поэтому авторами была предпринята попытка изыскания нового способа иммунокоррекции при тяжелом иммунодефиците, вызванном высоковирулентной микрофлорой, связанном с угнетением клеточного звена иммунитета.

Известно, что для стимуляции иммунобиологической резистентности организма, пораженного вирулентной микрофлорой, используются различные иммуностимуляторы, действующие на то или иное звено иммунной системы. Чаще всего с этой целью используется T-активин, иммуностимулин, некоторые интерлейкины, интерферон и т.д., т.е. вещества, образующиеся в организме животных и человека для стимуляции иммунной системы. Кроме того, в клинической практике и в эксперименте широко используются иммунокорректоры с не вполне понятным механизмом действия: производные аминокислот (левомизол) и нуклеиновых кислот (нуклеинат натрия), а также множество других веществ сложного состава и неизвестного механизма действия (мумие, прополис и т.д.).

Однако ни одно из применяющихся в эксперименте и клинике веществ не способно само по себе радикально изменять иммунобиологическую резистентность организма по отношению к вирулентной микрофлоре, что, очевидно, связано с глубинными перестройками метаболизма в целом, и как следствие значительными изменениями в функционировании иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ стимуляции иммунобиологической резистентности при иммунодефиците, вызванном МБТ, опубликованный в ж. "Проблемы туберкулеза", 1991, N 5, С. 61-61, выбранный в качестве прототипа. Известный способ включает введение животным, зараженным МБТ, на фоне хронического воздействия пестицидов иммуннокорректоров левамизола и мумие с последующим лечением антибактериальными препаратами.

Однако известный способ позволяет получить положительный эффект только в сочетании иммунокорректоров и антибактериальных препаратов. Используемые иммунокорректоры сами по себе не дают видимых положительных сдвигов в изменении иммунобиологической резистентности организма. Кроме того, левамизол и мумие мало исследованы в плане воздействия на обменные процессы в организме. Мумие является сложным по составу химическим веществом, а левамизол - производное серусодержащих аминокислот, которые в организме не обнаружены.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в повышении иммунологической резистентности организма эспериментальных животных на фоне воздействия неблагоприятных факторов внешней среды.

Для решения этой задачи в способе стимуляции иммунобиологической резистентности при иммунодефиците, вызванном МБТ, у экспериментальных животных, включающем введение иммунокорректоров, в качестве иммунокорректоров вводят 2%-ный раствор каменноугольной смолы, который наносят на кожу, а также через рот вводят ежедневно глутамат натрия в дозе 1 г/кг массы и таурин в дозе 0,1 г/кг массы в течение не менее месяца.

Автором экспериментально установлено, что важнейшее значение в патогенетических механизмах возникновения и течения инфекционного иммунодефицита, вызванного МБТ, имеют изменения на уровне аминокислотного обмена. Так, заражение МБТ морских свинок приводит к резкому снижению в их крови глутаминовой кислоты и серусодержащих аминокислот (метионина, цистеины и таурина) и увеличению концентрации этих аминокислот в печени, селезенке, костном мозге, т. е. в тканях, обеспечивающих во многом адаптивные возможности организма и его иммунобиологическую резистентность.

Известно, что для большинства перечисленных аминокислот и их производных (глутаминовая кислота, аргинин, цистеин) установлена иммуномодулирующая активность, касающаяся различных звеньев иммунной системы. Одновременно эти же аминокислоты и их производные играют значительную роль в обеспечении антиоксидантных возможностей организма, и в зависимости от изменения соответствующих ресурсов - источников этих аминокислот могут меняться антиоксидантные возможности организма в целом, а следовательно, и его адаптивные возможности, и как следует из вышеизложенного, его иммунобиологическая резистентность. Поэтому для коррекции нарушений, вызванных МБТ, были выбраны производное глутаминовой кислоты - глутамат натрия и серусодержащих аминокислот - таурин. Причем длительность введения по заявленному способу составляет не менее месяца, поскольку за период меньше месяца не происходит отчетливого изменения иммунобиологических показателей.

Способ осуществляют следующим образом. Морским свинкам массой 250-300 г в паховую складку вводят вирулентный штамм МБТ H₃₇ RV (Пузик В.И., 1966) в дозе 0,001 мг одноразово. Выбранный штамм МБТ приводит к быстрой генерализации экспериментального туберкулеза с подавлением иммунологической резистентности указанных животных. Через 2 недели после заражения морским свинкам на кожу еженедельно наносят 2%-ный раствор каменноугольной смолы (КС), а также ежедневно вводят глутамат натрия в дозе 1 г/кг массы тела. Нанесение смолы на кожу и введение глутамата натрия через рот производят в течение 1-3 месяцев.

Одновременно были выделены группы, в которых дополнительно к глутамату натрия в дозе 1 г/кг добавляют таурин в дозе 0,1 г/кг массы через рот ежедневно в течение 1-3 мес.

По окончании введения препаратов животных забивают посредством декапитации. Методом розеткообразования в крови определяют процентное содержание T-лимфацитов с эритроцитами кролика и B-лимфоцитов с эритроцитами барана. В ткани легких, печени, селезенки, лимфоузлов производится морфологическое исследование.

Параллельно выделяют группы, у которых исследуется продолжительность жизни после заражения МБТ, воздействия КС и рассматриваемых аминокислот-иммуностимуляторов.

После проведения способа у животных исследовали иммунограмму крови. Иммунобиологические показатели представлены в таблице 2.

Иммунограмма крови морских свинок по прототипу представлена в табл. 1.

Пример 1. В известном способе, принятом за прототип, воздействие надпороговых доз пестицида (дефолиант альфа-3) при длительной затравке приводит к существенному угнетению T- и B-клеточного звеньев иммунитета (табл. 1). Еще более выражены эти нарушения при заражении морских свинок МБТ. Последующее лечение антибактериальными препаратами в сочетании с левомизолом через 2 мес приводит к нормализации процента T-лимфоцитов в иммунограмме. В то же время применение в качестве патогенетической терапии мумие-ассиль к нормализации количества l- и B-лимфоцитов не приводит. В исследуемых тканях при воздействии обоих патогенетических средств усиливается продуктивный компонент специфического воспаления. Отмечались признаки стимуляции T-клеточного звена иммунитета и фагоцитоза, чего не отмечалось без применения рассматриваемых патогенетических средств.

Пример 2. Наблюдали животных, зараженных МБТ. Установлено, что экспериментальный туберкулез сопровождается резким снижением T- и B-лимфоцитов в иммунограмме при увеличении количества "O"- клеток (табл. 2). Морфологически отмечается специфическое поражение исследуемых тканей с преобладанием экссудативно-некротических реакций. Продолжительность жизни животных составляет в среднем 65 дней.

Пример 3. Наблюдали животных с воздействием надпороговых (токсичных) доз каменноугольной смолы, что приводило к резкому снижению процента T-клеток и увеличению "O" лимфоцитов.

Пример 4. Наблюдали морских свинок, зараженных МБТ с введением КС, которую наносили на кожу. При этом уровень T-лимфоцитов в иммунограмме существенно не изменяется, тогда как уровень B-лимфоцитов существенно увеличивается, а "O"-клеток имеет тенденцию к снижению по отношению ко 2 группе (МБТ) (табл. 2). На морфологическом уровне существенных отличий от гр. 2 не выявлено. Продолжительность жизни животных также существенно не изменяется.

Пример 5. Наблюдали животных, зараженных МБТ + КС + глутамат натрия в течение 2 мес (табл. 2). При этом практически нормализуется уровень T-лимфоцитов в иммунограмме, тогда как количество B-лимфоцитов сохраняется на повышенном уровне. На морфологическом уровне отмечается резкое подавление эксудативно-некротических компонентов специфического воспаления, тогда как продуктивный компонент усиливается. В 1,5 раза возрастает продолжительность жизни зараженных морских свинок.

Таким образом, глутамат натрия способствует увеличению иммунобиологической резистентности морских свинок, подвергавшихся воздействию КС. Оптимальная доза глутамата натрия 1 г/кг массы через рот ежедневно в течение двух месяцев после заражения.

Пример 6. Наблюдали группы животных, подвергавшихся воздействию по заявленному способу в течение одного месяца.

Меньшая продолжительность введения глутамата натрия в дозе 1 г/кг массы не дает отчетливого эффекта в плане стимуляции клеточного звена иммунитета, судя по меньшему проценту T-лимфоцитов в иммунограмме и снижению процента "O"-клеток.

Пример 7. Наблюдали животных, зараженных МБТ + КС + глутамат натрия + таурин.

Дополнительное к глутамату натрия введение таурина в дозе 0,1 г/кг массы через рот способствует увеличению уровня T-клеток в иммуннограмме. При этом резко снижается процент B-лимфоцитов, а "O"-клеток близок к нормальному содержанию. На морфологическом уровне в тканях морских свинок, подвергавшихся воздействию КС, а затем заражению МБТ максимально по сравнению с другими группами выражен продуктивный компонент специфического воспаления. Максимальна также продолжительность жизни животных этой группы по отношению к другим, подвергавшимся заражению.

Таким образом, сравнение результатов, приведенных в прототипе и в заявленном способе, свидетельствуют о том, что натриевая соль глутаминовой кислоты в сочетании с таурином, является эффективным средством коррекции туберкулезного иммунодефицита, развивающегося на фоне воздействия широкораспространенных неблагоприятных факторов окружающей среды.

При этом необходимо отметить, что нам удалось достичь отчетливого усиления иммунобиологической резистентности морских свинок к МБТ без применения этиотропной антибактериальной терапии. Кроме того, применяемые нами аминокислоты-иммуностимуляторы образуются в большом количестве, т.е. являются эндогенными адаптогенами. Тогда как используемые по прототипу вещества достаточно токсичны, что отмечается самими авторами и дает эффект только в сочетании с антибактериальной терапией.

Таким образом, предлагаемый способ обладает качественным преимуществом как в отношении к прототипу, так и к другим имеющимся экспериментальным исследованиям, поскольку позволяет без использования этиотропной терапии значительно усилить иммунобиологическую резистентность высокочувствительных к МБТ животных (морских свинок) при их заражении.

На основании заявленного способа могут быть разработаны эффективные методы коррекции инфекционных иммунодефицитов.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и касается стимуляции иммунологической резистентности при туберкулезной инфекции. Способ заключается в том, что животным, зараженным вирулентным штаммом микобактерий туберкулеза, в качестве иммунокорректоров вводят 2%-ный раствор каменноугольной смолы, который наносят на кожу, и ежедневно через рот вводят глутамат натрия и таурин в течение не менее месяца. Способ повышает результатность организма, в том числе на фоне воздействия неблагоприятных факторов внешней среды. 2 табл.

Способ стимуляции иммунобиологической резистентности при иммунодефиците, вызванном микобактериями туберкулеза у экспериментальных животных, включающий введение иммунокорректоров, отличающийся тем, что в качестве иммунокорректоров вводят 2%-ный раствор каменноугольной смолы, который наносят на кожу, а также через рот вводят ежедневно глутамат натрия в дозе 1 г/кг массы и таурин в дозе 0,1 г/кг массы в течение не менее месяца.